利用离子交换层析法制备人凝血因子VIII的条件优化

通过对离子交换层析法中的试验条件的筛选和优化,获得高收率人凝血因子Ⅷ制品。方法 选用Fractogel®EMD TMAE(M)凝胶作为填料,取同一批次的人凝血因子Ⅷ上柱前液,研究不同浓度的洗涤液和洗脱液对人凝血因子Ⅷ效价和蛋白含量的影响。结果 从人凝血因子Ⅷ回收率和比活性考虑,洗涤液为2200mM氯化钠浓度和洗脱液为450mM氯化钠浓度时为层析洗涤洗脱最佳条件。结论 在本试验层析条件前提下,调节洗涤液为220mM氯化钠浓度和洗脱液为450mM氯化钠浓度,制备获得的人凝血因子Ⅷ制品纯度更高、稳定性和安全性更好。

牛结蛋白基因启动子的初步改造研究

本研究在前期研究工作的基础上,通过添加特异的调控元件对牛结蛋白(Desimn)基因启动子进行改造,以期获得活性较高且具有肌肉组织特异性的启动子。本研究以300bp的牛结蛋白基因启动子为基础,对其进行改造,即通过串联多拷贝的正调控元件的方式,成功构建了3个改造后的结蛋白基因启动子片段:pGL3-desmin300-desmin180、pGL3-MD-αD1-desmin300和pGL3-αD2-αD1-desmin300。结果表明,pGL3-desmin300-desmin180、pGL3-MD-αD1-desmin300和pGL3-αD2-αD1-desmin300的启动子活性分别是野生型启动子pGL3-desmin300的1.67、2.56和2.88倍,说明改造后的启动子片段具有较高的启动活性。同时,牛骨胳肌卫星细胞和成纤维细胞试验结果表明,以上3组改造后的启动子片段具有较强的肌肉特异性,以上高效肌肉特异性启动子片段的应用为提高肌肉产量的转基因家畜肉的生产提供重要帮助。