二陈汤对慢性支气管炎气道黏液高分泌的影响

目的观察二陈汤对慢性支气管炎大鼠气道黏液高分泌的影响及其机制。方法采用香烟烟熏加内毒素脂多糖制备慢性支气管炎大鼠模型,大鼠随机分为正常组,模型组,二陈汤低、中、高剂量组,急支糖浆组。正常组和模型组灌胃生理盐水6 ml/d,急支糖浆组灌胃给予太极急支糖浆12 g/kg,二陈汤低、中、高剂量组分别灌胃2.45、4.90、9.80 g/kg,连续14 d。免疫组化检测黏蛋白(MUC)5AC和水通道蛋白(AQP)5在支气管组织中的表达。结果与正常组相比,模型组MUC5AC蛋白表达显著增强,AQP5蛋白表达显著减弱(均P<0.01),MUC5AC与AQP5蛋白表达呈负相关(r=-0.55,P<0.01);与模型组相比,二陈汤中剂量组MUC5AC蛋白表达显著减弱,AQP5蛋白表达增强(均P<0.01),MUC5AC与AQP5蛋白表达呈负相关(r=-0.75,P<0.01)。结论二陈汤对慢性支气管炎气道黏液高分泌有调节作用,其机制可能与抑制MUC5AC、上调AQP5蛋白表达有关。

恐伤孕鼠对其子代股骨早期发育和骨代谢影响

目的:探讨孕期恐伤肾对其56日龄仔鼠股骨发育和血清中骨代谢指标的影响,为“恐伤肾,肾主骨”理论提供实验依据。方法:选取基线一致的孕0.5 d Wistar大鼠20只按照随机数字表法分为模型组和对照组,模型组运用旁观电击法建立妊娠期恐伤大鼠模型,对照组正常喂养,分别在孕7 d、14 d和20 d采用旷场实验对孕鼠进行行为学测试,在孕20 d采用酶联免疫法(ELISA)检测其血清糖皮质激素(GC)水平并评价建模情况。仔鼠延续母鼠分组,利用旷场实验对56日龄仔鼠进行行为学测试,采集血清和双后肢股骨样本并检测钙磷水平。用ELISA检测血清中I型胶原羧基端交联肽(CTX-I)、骨源性碱性磷酸酶(BALP)和I型前胶原氨基端原肽(PINP)水平。结果:与对照组比较,模型组孕鼠在孕7 d、14 d和20 d的旷场实验水平得分、垂直得分均降低(P<0.05),孕20 d GC水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,模型组56日龄仔鼠旷场实验水平得分、垂直得分均降低(P<0.05),体质量减轻,肾脏质量和脏器系数均降低(P<0.05);双后肢股骨干重降低(P<0.05),股骨钙磷含量也均降低(P<0.05),血清中钙含量降低(P<0.05),CTX-I水平显著升高(P<0.05),BALP和PINP的水平均降低(P<0.05)。结论:恐伤孕鼠可影响其子代的股骨发育和代谢,恐惧刺激可以引起骨发育损伤,主要表现为钙磷代谢紊乱和骨吸收增强。

孕期丙戊酸暴露对自闭症子代大鼠不同肠段菌群分布特征的影响

目的:探讨孕期丙戊酸(VPA)暴露对28日龄子代自闭症大鼠肠道不同部位菌群的影响,为VPA自闭症大鼠模型肠道菌群相关研究提供参考。方法:选取受孕0.5 d孕鼠随机分为正常组和模型组,仔鼠延续孕鼠分组。模型组受孕12.5 d时按600 mg/kg腹腔注射丙戊酸钠溶液,通过行为学评价仔鼠模型是否构建成功,正常组腹腔注射无菌生理盐水并正常喂养至分娩,其仔鼠为正常组。对建模成功的雄性仔鼠采用随机数字表法从每组中分别选取4只进行四个肠段内容物取材。采用16S rRNA基因的高通量扩增测序对仔鼠十二指肠、空肠、结肠和直肠部位的肠道内容物菌群样本进行微生物多样性分析。结果:与正常组相比,模型组仔鼠旷场实验评分和社交时间均明显降低(P<0.05),而刻板行为评分升高(P<0.05)。正常组十二指肠和空肠部位的菌群丰富度和多样性均降低且分布一致(P<0.05),结肠部位和直肠部位菌群分布一致(R~2=0.478,P=0.001)。模型组空肠部位的丰富度和多样性降低(P<0.05),不同部位无明显分布差异。与正常组相比,模型组十二指肠部位(R~2=0.254,P=0.001)、空肠部位(R~2=0.187,P=0.001)和直肠部位(R~2=0.175,P=0.021)菌群相似性存在差异,其中十二指肠部位组间差异最大。与正常组相比,在属水平,模型组十二指肠部位Allobaculum属相对丰度提高,乳酸菌属、Romboutsia属、双歧杆菌属和Dubosiella属相对丰度降低;直肠部位乳酸菌属和Prevotellaceae_NK3B31相对丰度增加,Allobaculum属、Dubosiella属和Romboutsia属相对丰度降低。结论:VPA自闭症模型大鼠不同部位的肠道菌群出现了不同程度的紊乱,孕期VPA暴露破坏了其子代十二指肠和空肠部位的菌群特异性,这可能是菌群改变的原因。

肉苁蓉苯乙醇苷对ALD小鼠肠道黏膜屏障和肠道菌群的影响

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(CHPhGs)对酒精性肝病(ALD)小鼠肠道黏膜屏障和肠道菌群影响。方法:将36只C57BL/6N雌性小鼠,随机分为正常组、正常给药组、模型组和CHPhGs低、中、高剂量组(175、350、700 mg·kg^(-1)),每组6只。采用利伯-德卡利(Lieber-Decarli)乙醇液体饲料建立ALD小鼠模型。正常给药组和CHPhGs低、中、高剂量组按相应剂量每天灌胃给予CHPhGs。生化仪检测血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、脂多糖(LPS)、脂多糖结合蛋白(LBP)、D-乳酸(D-LA)和二胺氧化酶(DAO)水平,肝脏LBP水平;比色法检测肝脏中TG和TC水平;肝脏行油红O和苏木素-伊红(HE)染色;电镜观察空肠上皮细胞微观结构;空肠和结肠道行HE和阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色,及黏蛋白2(Muc2)免疫组化。收集正常组、正常给药组、模型组和CHPhGs高剂量组肠道内容物,进行测序。结果:ALD模型建立成功,与正常组比较,模型组血清中ALT、AST和TG水平,以及肝脏TG和TC水平均明显升高(P<0.05);病理结果提示,与正常组比较,模型组肝脏细胞出现了明显的脂肪变性。与模型组比较,CHPhGs低、中、高剂量组的血清中TG和肝脏TG和TC水平均明显降低(P<0.05);CHPhGs高剂量组血清中ALT、AST、TNF-α、IL-1β、LPS和LBP明显降低(P<0.05);CHPhGs高剂量组脂肪变性肝细胞数量明显减少,空肠上皮细胞微绒毛结构基本完整,结肠Muc2表达减少,肠道菌群出现了明显改变(P<0.05)。与正常组比较,异杆菌(Allobaculum)在模型组出现了显著上调(P<0.01);与模型组比较,嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia)在CHPhGs高剂量组中明显上调(P<0.05)。Akkermansia与Allobaculum的丰度呈负相关(r=-0.701,P<0.01)。结论:CHPhGs对ALD的肠道屏障损伤有改善作用,可能是通过调节肠道有益菌Akkermansia和潜在有害菌Allobaculum的丰度和结构,影响肠道黏液稳态来发挥作用。

肉苁蓉苯乙醇苷对酒精性肝病模型小鼠脂质代谢稳态的改善作用及其机制

目的:利用Lieber-Decarli液体酒精饲料构建小鼠酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)模型,探究肉苁蓉苯乙醇苷(Cistanche deserticola phenylethanoid glycoside,CPhGs)对酒精性脂肪肝病脂质代谢稳态的调节作用。方法:将48只雌性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、对照+700 mg·kg^(-1) CPhGs组、模型组、模型+175 mg·kg^(-1) CPhGs组、模型+350 mg·kg^(-1) CPhGs组和模型+700 mg·kg^(-1) CPhGs组,每组8只。基于美国国家酒精滥用与酒精中毒研究所(National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism,NIAAA)法构建小鼠ALD模型,建模成功后,不同浓度CPhGs灌胃给药,持续14 d。测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。HE和油红O染色观察肝脏病理改变情况。用比色法检测肝脏匀浆中TG,TC,HDL-C和LDL-C含量。采用WB法检测肝脏组织中过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators activated receptor α,PPARα)蛋白量表达。结合LC-MS/MS技术对肝脏进行类靶向脂质代谢检测,筛选差异代谢物并进行代谢通路分析。结果:与模型组相比,模型+700 mg·kg^(-1) CPhGs组小鼠血清AST,ALT,TG,TC和LDL-C含量显著降低,HDL-C含量升高。HE与油红O染色结果显示,模型+700 mg·kg^(-1) CPhGs组肝脏脂滴蓄积明显降低。Western blot (WB)结果显示,与模型组相比,模型+700 mg·kg^(-1) CPhGs组PPARα蛋白表达量增加。脂质代谢共筛选出16个差异代谢物,通路分析显示CPhGs主要通过调节甘油磷脂代谢、磷脂酰肌醇信号系统和磷酸肌醇代谢等代谢通路改善小鼠ALD。结论:CPhGs可以通过促进PPARα表达、增加磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)类物质合成,调控相关脂质代谢通路,改善ALD脂质稳态。

两种给药途径对联合抗生素建立伪无菌大鼠模型比较

目的利用联合抗生素通过饮水和灌胃2种给药途径干预大鼠,评估是否可建立伪无菌大鼠模型。方法将15只SD大鼠随机分为正常组(Nor组),饮水组(Dri组)和灌胃组(Ig组),每组5只。饮水组:用超纯水配制成浓度为0.5 g/L万古霉素、1.0 g/L氨苄西林、1.0 g/L新霉素和1.0 g/L甲硝唑的混悬液,自由饮水。灌胃组:用生理盐水配制成浓度为200 mg/mL万古霉素,400 mg/mL氨苄西林,400 mg/mL新霉素和400 mg/mL甲硝唑的混悬液,0.5 mL/kg体积灌胃。建模14 d。收集空肠、盲肠和结肠的肠道内容物分别进行菌群培养,并对混合的肠道内容物样本进行测序。结果与正常组相比,在有氧和厌氧培养条件下,饮水组和灌胃组肠道内容物在培养基上的菌落数量显著减少。饮水组和灌胃组肠道菌群丰富度和多样性均明显降低,肠道菌群的物种数量显著减少。饮水组大鼠肠道菌群主要以埃希-志贺菌属为主,灌胃组以克雷伯菌属为主。结论通过饮水和灌胃给予大鼠联合抗生素,均清除了其大部分的肠道菌群,可以达到建立伪无菌大鼠模型的要求。

基于16S rRNA探究孕期“恐伤肾”对仔鼠情绪及肠道菌群的影响

目的:探究孕期“恐伤肾”对仔鼠肠道菌群结构的影响,并预测其关键菌群及差异代谢功能。方法:基线一致的已孕0.5 d Wistar大鼠分为正常组和恐应激组,两组于孕18 d采用悬尾实验、糖偏好实验评价造模效果。仔鼠延续母鼠分组,在5周龄行悬尾试验、高架实验评价仔鼠情绪,使用16S rRNA基因测序分析仔鼠肠道菌群。结果:与正常组比较,恐应激组孕鼠悬尾不动时间显著增加(P<0.05),糖偏好率显著降低(P<0.05);恐应激组仔鼠悬尾不动时间显著增加(P<0.05),高架开放臂停留时间比例显著减少(P<0.05)。两组仔鼠肠道菌群丰富度、多样性、物种结构差异显著(P<0.05)。与正常组比较,恐应激组厚壁菌门(Firmicutes)显著降低,拟杆菌门(Bacteroidetes)显著升高(LDA>4.0,P<0.05),菌属方面乳杆菌属(Lactobacillus)、粪杆菌属(Faecalibacterium)、嗜果胶拟杆菌属(Bacteroides pectinophilus)显著降低(LDA>4.0,P<0.05),瘤胃球菌UCG014(Ruminococcaceae UCG014)、Erysipelotrichaceae科的杜波氏菌属(Dubosiella)、异芽杆菌属(Allobaculum)、尿道杆菌属(Turicibacter)显著升高(LDA>4.0,P<0.05)。菌群代谢功能方面,与正常组比较,恐应激组仔鼠外源生物降解与代谢、脂质代谢功能丰度降低(P<0.05),能量代谢功能丰度增加(P<0.05)。结论:孕期恐应激导致仔鼠不良情绪,伴随肠道菌群紊乱与其代谢功能的失调。