单引物预掺入PCR与抗体可变区基因的体外放大

用针对引导序列的５′－引物和针对恒定区的３′－引物，常规ＰＣＲ程序只使所选５株单抗１０个可变区ｃＤＮＡ中的４个得到放大。新设计的程序增设了一个反应时相：９４℃ｌｍｉｎ，３７℃６－８ｍｉｎ，循环１－３次，只加入５′－引物，补充３′－引物后，转入常规ＰＣＲ循环，１０个可变区ｃＤＮＡ均获放大。此程序被命名为＂单引物预掺入ＰＣＲ＂。

单克隆抗体可变区基因PCR扩增产物的直接测序

利用一组通用引物对单克隆抗体可变区ｃＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增。扩增产物经纯化后通过一个以链终止法为基础的“循环测序”程序直接进行序列测定，其中所用四种双脱氧核苷酸分别带不同的荧光标记，测序引物选自同一组通用引物。测序电泳和数据收集在ＤＮＡ测序仪上进行。本法简单、快速、准确，是解析抗体可变区序列的有效手段。