融合蛋白hVEGF121/βhCG与mGM-CSF/βhCG联合抗肿瘤作用及其机制

探讨m GM-CSF/βh CG(GC)和h VEGF121/βh CG(VC)两种融合蛋白联用对C57BL/6J小鼠RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的抑制效果,并对其抗肿瘤作用机制进行初步研究。采用含有p ET-28a-m GM-CSF-X10-βh CGCTP37和p ET-28a-VEGF-M2-X10-βh CG-CTP37的两个重组菌进行乳糖诱导表达,分离纯化融合蛋白。将两种蛋白制备抗肿瘤蛋白疫苗(VC蛋白疫苗和GC蛋白疫苗),并将两蛋白混合制备联合蛋白疫苗(VGC蛋白疫苗),免疫C57BL/6J接瘤小鼠,测量瘤块生长状态;检测免疫小鼠脾细胞增殖以及对肿瘤细胞的细胞毒作用;ELISA检测小鼠体内细胞因子IFN-γ和抗h VEGF抗体浓度。结果发现,在前列腺癌和黑色素瘤小鼠移植瘤模型中,与生理盐水NS组相比,各实验组均具有统计学意义(P<0.05)。其中VGC组抗肿瘤效果优于GC组和VC组(P<0.01),且对前列腺癌和黑色素瘤的抑瘤率分别达到(41.7±0.83)%和(46.4±1.27)%。由此可见,VC和GC两种蛋白联合后,通过发挥抗肿瘤免疫和抗肿瘤血管生成双重作用,高效地抑制了RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的生长。

GnRH/M_2与mGM-CSF/βhCG融合蛋白致敏树突状细胞疫苗抗小鼠前列腺癌的作用

目的探讨分别负载GnRH/M_2融合蛋白和mGM-CSF/βhCG融合蛋白的树突状细胞(dendritic cells,DCs)及与多西他赛(DTX)联合应用治疗小鼠前列腺癌的效果,及其抗肿瘤作用机制。方法用GnRH/M_2融合蛋白与mGM-CSF/βhCG融合蛋白分别致敏DC,获得DC疫苗,流式细胞仪检测DC成熟度。测量各组小鼠肿瘤生长体积和重量、检测免疫小鼠脏器指数和脾细胞增殖,脾细胞对癌细胞特异性杀伤活性及小鼠外周血内细胞因子IFN-γ浓度,观察各组对荷瘤小鼠的抑瘤效果。结果与0.9%氯化钠溶液对照组比较,单独用药对荷瘤小鼠肿瘤均具有抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05),联合应用组抗肿瘤效果均优于DC疫苗单独应用组(P<0.01)。结论两种DC疫苗均能与多西他赛发挥协同抗前列腺癌作用,抑瘤效果显著增强。且联合应用也能有效抑制前列腺癌细胞RM-1荷瘤小鼠肿瘤的生长。

hVEGF_(121)/βhCG融合蛋白联合化学药物对小鼠B16F10黑色素瘤抑制效应研究

将融合蛋白hVEGF121-M2-X_(10)-βhCG-CTP37作为免疫原,并分别联合化学药物环磷酰胺(CTX)和多西他赛(DTX),探索其对C57BL/6J小鼠B16F10黑色素瘤的抑制效应。将h VEGF121/βhCG融合蛋白(VC)分别与CTX和DTX联合给药(VCC、VCD),免疫接种B16F10黑色素瘤小鼠,对免疫小鼠皮内肿瘤组织周围毛细血管进行计数、测量各组小鼠瘤块体积和重量、对肿瘤组织进行切片分析、检测免疫小鼠脏器指数、MTT法检测脾细胞增殖、LDH法检测特异性杀伤活性。皮内肿瘤组织周围血管计数结果显示,与NS组比,DTX组、VC组以及VCD组均能高效抑制黑色素瘤血管生成(P<0.01);皮下肿瘤抑制结果显示,与NS组相比,DTX组和VCD组抑瘤效果最为显著,抑瘤率分别为60.0%,70.0%,其中VCD组抗肿瘤效果优于VC组或DTX组给药组(P<0.01);肿瘤组织病理学切片结果显示,VCD组的病变程度和炎细胞浸润程度最显著;对小鼠脾脏指数分析结果显示,与NS组相比,DTX组和VCD组的脾脏指数均显著增高(P<0.05);抗肿瘤免疫实验中:与NS组相比,VCD组提高了脾细胞增殖能力和细胞毒作用(P<0.05),且VCD组小鼠的脾细胞杀伤率在效靶比为20∶1、40∶1和80∶1时均具有显著性差异(P<0.05)。h VEGF121/βhCG融合蛋白与化学药物DTX初步表现出协同抗肿瘤的效果,而与化学药物CTX未表现出协同抗肿瘤作用。