不同教学模式用于生物化学和分子生物学实验教学中的效果比较

目的 探讨不同教学模式用于生物化学和分子生物学实验教学中的效果比较。方法 选取2020年1月-2021年12月本院临床医学专业80名实习医学生作为研究对象,用随机数字表法将其分对照组和观察组,每组各40名,对照组接受常规LBL教学法,观察组接受PBL联合翻转课堂教学,比较两组医学生考核成绩、教学满意度、教学质量等。结果 观察组医学生DNA重组与重组DNA技术(t=43.6378)、非营养物质代谢(t=19.3962)、酶(t=18.3347)知识考核得分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组医学生在是否可促进师生沟通(t=16.0164)、是否可提升小组合作能力(t=49.8940)、是否可提升知识应用能力(t=7.7873)、是否可更准确掌握知识(t=52.0633)、是否可提升理解问题的能力(t=49.3553)、是否可提升自学能力(t=43.8199)、对此类教学方式的喜欢程度方面(t=33.8656)的评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组得分高于对照组(t鼓励和指导=240.3138、t评判性思维=64.4538、t人际交往=50.6667、t价值观=112.5314、t学习积极性和兴趣性=54.2032),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PBL联合翻转课堂教学用于生物化学和分子生物学实验教学中,可让医学生更好的掌握理论知识和实际操作技能,调动医学生学习兴趣性和积极性,提升教学质量。

非小细胞肺癌Survivin和Skp2的表达及其临床意义

目的检测Survivin和Skp2蛋白在非小细胞肺癌中的表达,探讨其相互关系及临床意义。方法用实时定量PCR的方法检测30例非小细胞肺癌组织及其对应的癌旁组织中survivin mRNA的表达,应用免疫组织化学法检测50例非小细胞肺癌组织中Survivin和Skp2的表达,统计Survivin与病理特征及Skp2的关系。结果 76.7%(23/30)肿瘤组织survivin mRNA表达量明显高于对应的癌旁组织。Survivin蛋白在癌组织的阳性表达率(74.0%)显著高于癌旁组织(16.7%),χ2=25.9,P<0.001。Skp2在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率(70.0%)也显著高于癌旁组织(20.0%),χ2=18.8,P<0.001)。Survivin表达与非小细胞肺癌的病理类型、分化程度、肿瘤分期以及是否有淋巴结转移无统计学意义的相关性(P>0.05)。Survivin表达与Skp2表达呈正相关(χ2=8.32,P<0.05)。结论 Survivin在肺癌组织中高表达,其阳性表达率与肿瘤病理类型、肿瘤分期、细胞分化程度和淋巴结转移无明显相关性,与Skp2表达呈正相关。

结直肠癌微卫星不稳定状态与MTHFR基因多态性及临床病理特征的相关性

目的检测结直肠癌标本中微卫星稳定性及亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性,并探讨两者的相关性。方法用限制酶内切法检测52例结直肠癌标本的MTHFR基因的多态性,应用毛细管电泳法检测微卫星稳定与否,统计MTHFR多态性、微卫星稳定性与临床病理特征的关系及两者的相关性。结果微卫星不稳定的结直肠癌共14例(26.92%),与结直肠癌患者年龄(χ2=0.051,P>0.05)、性别(χ2=0.083,P>0.05)和肿瘤分期(χ2=0.259,P>0.05)无相关性,而与肿瘤分化程度(χ2=6.361,P<0.05)和远处转移与否(χ2=4.798,P<0.05)相关。MTHFR CC型29例,CT+TT型23例,两组间结直肠癌患者年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤分期和有无远处转移差异均无统计学意义(P>0.05)。MTHFR C677T多态与微卫星不稳定性呈正相关性。结论 MTHFR C677T多态与结直肠癌微卫星不稳定性有统计学相关性,但具体机制尚需要进一步研究。

三棱散对人胃癌SGC-7901细胞增殖作用的影响

目的:探讨三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡影响及其可能机制。方法:制备三棱散水提物,培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法观察不同时间(24 h,72 h)不同浓度三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。用流式细胞仪检测三棱散水提物对细胞周期阻滞及其凋亡的影响。RT-PCR法检测不同浓度三棱散水提物作用人胃癌SGC-7901细胞72 h后细胞NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达情况。结果:随着三棱散水提物浓度增高和作用时间的延长,人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐增高(P<0.05),同一浓度不同时间的细胞增殖抑制率相比,有显著性差异(P<0.05)。人胃癌SGC-7901细胞在G0/G1期表现出明显的增加,S期细胞明显的减少,各浓度组均明显诱导细胞凋亡(P<0.05),其凋亡率随三棱散浓度增加而提高。RT-PCR法检测显示,随着三棱散水提物浓度的增加,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA表达逐渐减少,p16 mRNA表达逐渐增加。三棱散水提物浓度5.0 mg/m L,10.0 mg/m L时,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA及p16 mRNA表达存在显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:三棱散水提物对人胃癌SGC-7901细胞有抑制增殖和促凋亡作用,呈时间和浓度依赖性,且G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少。RT-PCR法检测显示,NF-κBp65 mRNA、cyclin D1 mRNA呈现低表达,p16 mRNA呈现高表达,由此推测,NF-κBp65表达下调会直接影响Cyclin D1表达,发挥细胞周期的正反馈调节,p16表达上调可启动细胞周期的负反馈调节,共同作用产生细胞增殖抑制及促进凋亡的作用。

LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞

目的探讨肝X受体(liver X receptors,LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用。方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后,CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平;western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况。结果与control组相比,1、5和10μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%,各组间差异有统计学意义(F=301.90,P<0.01)。与control组G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比,1、5和10μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%,差异有统计学意义(F=80.83,P<0.01)。S期细胞比例分别为(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%,差异有统计学意义(F=221.30,P<0.01)。10μmol/L T0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control组(2.28±0.10),差异有统计学意义(t=4.54,P<0.05)。但两组间p27 mRNA水平差异无统计学意义(t=0.28,P>0.05)。10μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P<0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12,control组为1.89±0.01,t=10.98,P<0.01)。以对照组(100%)为参照,转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%,与对照组比较,转染组间差异无统计学意义(t=1.542,P>0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P<0.01);药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t=7.77,P<0.01)。结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制,p27蛋白表达量增加,其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降。

高分辨率熔解曲线分析技术检测EGFR基因突变方法的建立及其初步临床应用

目的建立高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的方法,并探讨其的临床应用价值。方法建立HRM技术检测EGFR基因突变方法,并用其检测200例非小细胞肺癌患者肿瘤石蜡包埋标本,并与测序法的结果进行比较。结果所建HRM检测方法 Tm与ct值的CV值均较小,重复性好。HRM法检测标本EGFR基因突变的结果与测序法相比,突变总检出率分别为40.0%和37.0%,敏感性为100%,特异性>95%。结论 HRM法检测EGFR基因突变,敏感性高,特异性强,重复性好,操作简便,节约时间,成本低,适用于临床。

树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖及CyclinD1、p16表达的影响

目的探讨树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖及CyclinD1、p16表达的影响,进一步研究其抗胃癌的可能机制。方法培养人胃癌SGC-7901细胞,MTT法观察不同时间(24 h,72 h)不同浓度树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。用流式细胞法检测树舌多糖对细胞周期阻滞及其凋亡的影响。实时荧光定量法检测树舌多糖作用人胃癌SGC-7901细胞72 h后CyclinD1及p16的表达情况。结果随着树舌多糖浓度增高和作用时间的延长,对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率逐渐增高(P<0.05),同一浓度不同时间的细胞增殖抑制率相比有显著性差异(P<0.05)。人胃癌SGC-7901细胞在G0/G1期表现出明显的增加,S期细胞明显的减少,各浓度组均明显诱导细胞凋亡,其凋亡率随树舌多糖浓度增加而提高。实时荧光定量法检测显示,随着树舌多糖浓度的增加,CyclinD1表达逐渐减少,p16表达逐渐增加。树舌多糖浓度0.5mg/ml,1.0 mg/ml时,CyclinD1及p16表达存在显著性差异(P<0.05)。结论树舌多糖对人胃癌SGC-7901细胞有抑制增殖和促凋亡作用,呈时间和浓度依赖性,且G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少。RT-PCR法检测显示,CyclinD1呈现低表达,p16呈现高表达,由此推测,CyclinD1表达下调与p16表达上调可分别发挥细胞周期的正、负反馈调节,共同作用产生细胞增殖抑制及促进凋亡,从而发挥抗肿瘤作用。

吉非替尼敏感性不同的非小细胞肺癌中miRNA-7表达的差异及临床意义

目的检测吉非替尼敏感性不同的非小细胞肺癌中miR-7的表达差异,并探讨其临床意义。方法采用吉非替尼(Gefitinib)药物大剂量冲击法诱导H827,建立耐吉非替尼肺癌细胞亚系H827-7/GR,有限稀释法将H827-7/GR细胞单克隆化,CCK-8法检测耐药前后细胞株及各单克隆细胞对吉非替尼的敏感性;RT-PCR方法检测H827、H827-7/GR和耐药单克隆细胞株以及其他对吉非替尼敏感性不同的肺癌细胞株A549、H358、H1299、H1650和H1975中miR-7的表达差异。结果 H827/GR耐药指数大于100;获得的6株耐药单克隆细胞株对吉非替尼的半生长抑制浓度(the half growth inhibition concentration,IC50)值不同;和吉非替尼敏感株H827相比,诱导的耐药细胞株H827/GR、耐药单克隆细胞株和吉非替尼耐药株A549、H358、H1299、H1650和H1975中miR-7的相对表达水平均降低(P<0.05)。结论在非小细胞肺癌中,耐药细胞中miR-7的相对表达水平均较敏感细胞系降低,提示miR-7的低表达可能与非小细胞肺癌耐药性相关,其可能是潜在的肺癌药物敏感性预测分子标志物。

骨髓涂片和流式细胞术诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯的临床价值比较

目的比较骨髓细胞形态学（BMA）和流式细胞术（FCM）诊断非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者骨髓侵犯的临床价值。方法回顾性分析本院在2013-2014年间收治的207例NHL患者的骨髓涂片及流式细胞免疫表型的检测结果,分析2种检测方法在不同程度、不同形态淋巴瘤骨髓侵犯的临床价值。结果经2种方法联合检测,总体阳性率为24.6%（51/207）。BMA和FCM的骨髓侵犯阳性率分别为17.4%（36/207）和22.2%（46/207）;其中阳性结果一致者29例,主要表现于高比例瘤细胞骨髓侵犯的病例;不一致36例多见于低比例瘤细胞骨髓侵犯的病例（17.4%）,16例FCM检测为阳性而BMA为阴性的病例主要为轻度异形小细胞淋巴瘤,8例BMA阳性而FCM为阴性的病例为高度异形大细胞淋巴瘤。结论 BMA、FCM在诊断不同形态淋巴瘤细胞侵犯的敏感性不同,FCM诊断轻度异形细胞淋巴瘤骨髓侵犯的敏感性高于BMA,BMA检测高度异型大细胞淋巴瘤骨髓侵犯优于FCM,两者联合检测可提高骨髓侵犯的阳性率。

弥漫大B细胞淋巴瘤骨髓侵犯的瘤细胞形态与临床参数分析

目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)骨髓侵犯瘤细胞的形态与临床及实验室特征。方法:收集107例DLBCL的临床资料,回顾性分析患者的临床特征、实验室指标及骨髓细胞形态学和流式细胞术(FCM)的检测资料。结果:107例DLBCL患者中17例(15.9%)有骨髓侵犯,其中9例为高度异形瘤细胞,8例为低度异形瘤细胞。与低度异形组比较,高度异形组具有多种不良预后因素,包括较晚的临床分期、增高的乳酸脱氢酶及国际预后指数。FCM诊断出的高度、低度异形淋巴瘤骨髓侵犯病例分别为3例(3/9)、8例(8/8);骨髓涂片诊断出的病例分别为9例(9/9)、1例(1/8)。结论:DLBCL高度异形瘤细胞骨髓侵犯与多种预后不良因素密切相关;FCM诊断低度异形DLBCL骨髓侵犯的敏感性高于骨髓涂片,骨髓涂片对高度异形淋巴瘤侵犯的诊断率高于FCM。两种方法联合应用可有效提高DLBCL骨髓侵犯的诊断。

胰岛素样生长因子与乳腺癌的相关性研究

乳腺癌的发病率和死亡率在逐年增加,且越来越趋于年轻化态势。体内的胰岛素样生长因子(IGF)对细胞的增殖、凋亡发挥着重要的调控作用;而大量人群资料和临床基础试验也均表明,IGF系统不仅对机体的正常生长发育起着重要的调控作用,在肿瘤的发生发展中也扮演着重要角色。该文将从IGF系统概况、IGF系统与乳腺癌等几个方面深入研究IGF的功能、相关影响因素及其调控的信号通路,为乳腺癌的治疗提供新方向和新靶点。

铁调素在非小细胞肺癌组织和血清中的表达 及其与临床病理特征的相关性

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者肿瘤组织及血清标本中铁调素的水平,并探讨两者与其临床病理特征之间的相关性。方法:免疫组织化学检测60例NSCLC标本中铁调素的表达,应用ELISA检测血清中铁调素的含量,统计两者与临床病理特征的相关性。结果:组织中铁调素表达及血清铁调素水平与NSCLC的年龄、性别、病理类型、分化程度以及是否有淋巴结转移无显著相关性,但均与肿瘤分期及是否有远处转移相关。组织中铁调素表达与血清中铁调素水平并无显著相关性。结论:组织和血清中铁调素水平与NSCLC肿瘤分期及是否有远处转移相关,具体机制需要进一步研究。

Survivin和SIRT1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达及两者相关性分析

目的检测survivin和SIRT1 mRNA在非小细胞肺癌中的表达,探讨其相互关系。方法用实时定量PCR的方法检测江苏省肿瘤医院42组非小细胞肺癌组织和对应的癌旁组织中survivin和SIRT1 mRNA的表达,统计survivin与SIRT1的相关性。观察EGFR酪氨酸酶抑制剂吉非替尼处理非小细胞肺癌细胞系HCC827后survivin和SIRT1的表达改变。结果 85.7%(36/42)肿瘤组织survivin mRNA表达明显高于对应的癌旁组织。61.9%(26/42)肿瘤组织SIRT1 mRNA的表达低于其癌旁组织,33.3%(14/42)肿瘤组织SIRT1 mRNA表达高于其癌旁组织。Survivin表达与SIRT1表达有统计学意义的相关性(P<0.05)。吉非替尼能增加HCC827细胞中的SIRT1表达,降低survivin的表达水平,呈时间和剂量依赖性。结论 Survivin在非小细胞肺癌组织中高表达,而大部分SIRT1基因呈低表达状态。survivin与SIRT1表达呈负相关。在细胞水平上,吉非替尼能增加SIRT1的表达从而降低survivin的水平。提示两者在非小细胞肺癌的发生发展中可能发挥重要作用。

高分辨率熔解曲线分析技术检测血清游离DNA的EGFR基因突变

目的利用高分辨率熔解曲线分析技术(high resolution melting,HRM)检测石蜡包埋组织和血清游离DNA的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变,分析两者之间的关系,并探讨其临床应用价值。方法利用HRM技术检测EGFR基因突变的方法,检测200例非小细胞肺癌患者石蜡包埋标本和200例相应的血清游离DNA,并将二者结果进行比较分析。结果HRM法检测非小细胞肺癌患者石蜡包埋组织DNA的EGFR基因突变总检出率为43.5%,血清游离DNA的EGFR基因突变总检出率为25.0%,HRM法检测血清游离DNA的EGFR基因突变与检测石蜡包埋组织DNA的EGFR基因突变相比,敏感性为57.5%,特异性为100%。结论 HRM法检测血清游离DNA的EGFR基因突变为无法获取肿瘤组织标本的患者提供了新的检测机会。

13例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤特征分析

目的分析血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)骨髓涂片(BMA)及流式细胞术(FCM)的检测结果,探讨其骨髓侵犯的诊断依据。方法回顾性分析13例AITL BMA及FCM检测结果,并与临床特征作比较分析。结果经BMA检测13例AITL患者中5例为不确定,骨髓中瘤细胞异形度低、比例低;FCM检测1例阳性、2例为不确定,免疫表型特征不突出。与阴性病例比较,阳性及不确定病例在临床特征、实验室特征以及骨髓继发性改变的例数均高于阴性组,包括发热及肝、脾淋巴结肿大;贫血、血小板减低以及白细胞计数的异常;骨髓增生程度的异常、浆细胞及嗜酸性细胞比例的增高。结论 BMA、FCM检测AITL骨髓侵犯的敏感性不高,涂片中异形细胞与临床表现、实验检测结果及骨髓继发改变相关,明确诊断需进行骨髓活检并结合临床与实验室其他指标综合判断。

荧光定量PCR法检测肿瘤慢性贫血患者外周血淋巴细胞铁调素mRNA

目的建立检测肿瘤慢性贫血患者铁调素（hepcidin）mRNA表达水平的荧光定量PCR法，初步观察肿瘤慢性贫血患者淋巴细胞铁调素mRNA水平。方法建立荧光定量PCR检测铁调素mRNA的标准曲线，评价其灵敏度、特异性及重复性；检测50例体检健康者、49例肿瘤慢性贫血患者外周血淋巴细胞铁调素mRNA水平，同时检测血清白细胞介素6（IL-6）及血清铁（sI）水平。结果荧光定量PCR检测铁调素mRNA的灵敏度为10copies／μL，线性范围为10‘-10’copies／ILL；熔解曲线示扩增峰单一；检测3份低、中、高浓度的阳性质粒批内CV分别为1．83％、1．27％、1．39％，批间CV分别为6．13％、7．48％、6．87％。肿瘤慢性贫血组铁调素mRNA水平为[10．51（8．02～16．31）]×10～copies／cell，高于健康人对照组[2．57（2．20～3．20）]×10～copies／cell，P〈0．01；外周血铁调素mRNA水平与IL石水平呈正相关（r=0．92，P〈0．01），与sI呈负相关（r=-0．83，P〈0．01）。结论建立了定量检测外周血淋巴细胞铁调素mRNA的荧光定量PCR法，肿瘤慢性贫血患者铁调素mR—NA水平高于健康人，可能与炎症反应有关。

miR-181a在实体瘤及血液恶性肿瘤中的研究进展

miRNAs是一种参与转录后调控的非编码小RNA,其可通过与靶基因的3’UTR区结合负性调控靶基因。但由于其与靶基因具有低互补性,造成一个miRNA可以对应多个靶基因。因此,miRNAs在疾病的发生发展过程中起到错综复杂的作用。论文讨论近年来miR-181a在实体瘤及血液恶性肿瘤病理发展过程中起到的作用,旨在揭示miR-181a与实体瘤及血液恶性肿瘤间复杂的反馈关系。

白藜芦醇治疗结直肠癌的机制研究进展

白藜芦醇是一种天然的多酚化合物,有预防心血管疾病,预防衰老,抗炎,抗癌等作用。该文总结了近年来白藜芦醇作用于结直肠癌的机制的研究进展,为白藜芦醇的进一步研究提供依据。

非小细胞肺癌源性外泌体提取方法探讨

目的 :比较3种提取非小细胞肺癌A549细胞培养上清中外泌体(Exosomes)的方法 ,为获得高质量的Exosomes提供参考。方法:分别采取超速离心法、进口Exo Quick-TC提取法、国产Ribo提取法提取A549细胞培养上清中的Exosomes。利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠法进行蛋白定量,Western blot检测Exosomes表面标志物CD63表达。结果:3种方法均可提取到Exosomes,电镜下可观察到圆形膜性囊泡结构。进口Exo Quick-TC提取法及国产Ribo提取法提取样本浓度显著高于超速离心法(P<0.05);3种方法提取样本均有Exosomes特异性标志蛋白CD63表达,超速离心法CD63表达最高。结论:超速离心法、进口Exo Quick-TC提取法、国产Ribo提取法均可成功分离Exosomes,超速离心法获得的Exosomes纯度较高,应用试剂盒方法获得的Exosomes浓度高。

弥漫大B细胞淋巴瘤血清VEGF和β2-MG蛋白与Bcl-6和Ki-67表达临床相关性分析

目的:探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)患者治疗前血清β2微球蛋白(β2-microglobnlin,β2-MG)和内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达与Bcl-6和Ki-67表达的临床相关性。方法:2011-09-08-2013-02-16江苏省肿瘤医院初治49例DLBCL患者行CHOP方案化疗,Luminex液相芯片法检测治疗前血清VEGF和β2-MG蛋白表达水平,常规免疫组化法检测Bcl-6和Ki-67表达。结果:VEGF蛋白高表达合并Bcl-6高表达者多见于年龄>60岁的老年患者,阳性率为53.8%(7/13),P=0.048;合并Ki-67高表达者的各项临床特征间差异均无统计学意义,P>0.05。VEGF蛋白高表达合并Ki-67高表达者能获得更佳的疗效,P=0.008;完全缓解(CR)患者阳性率为4/7,部分缓解(PR)患者阳性率为50.0%(8/16)。β2-MG蛋白高表达合并Bcl-6和Ki-67高表达与各项临床特征间差异无统计学意义,P>0.05。结论:VEGF蛋白高表达合并Ki-67高表达与治疗疗效密切相关,两者同时高表达时DLBCL患者对CHOP治疗方案的敏感度高,治疗疗效好。β2-MG和VEGF蛋白表达结合临床常规免疫组化检测有望成为DLBCL临床诊断和治疗方案选择的新方法。