苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定

本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,诱生腹水效价为1∶80 000。单克隆抗体的亚型为IgG1,亲和力解离常数为1.14×1010,腹水抗体纯化后纯度可达98%,回收率80%,SDS-PAGE凝胶电泳可见单克隆抗体的轻链、重链分子质量分别为25和50ku,Western blotting检测抗体能特异性的识别SW。其线性检测范围为4~128μg/mL(R2=0.9969),与BSA、明胶、多聚赖氨酸、α-甘露糖苷等无交叉反应。本试验制备的SW单克隆抗体为免疫学检测SW和免疫学防制家畜疯草中毒奠定基础。

小花棘豆中毒对和田羊母羊繁殖器官的影响

试验旨在探讨小花棘豆(Oxytropis glabra DC)中毒对和田羊母羊繁殖器官指数、性激素水平和相关基因mRNA表达量的影响。以小花棘豆中毒和田羊母羊为研究对象,采集血清后屠宰,采集试验羊的丘脑、垂体和卵巢组织,测定其脏器系数,检测血清中促性腺激素释放激素(GnRH)、促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量的变化,并检测各组织中相关繁殖基因的表达。结果显示,小花棘豆中毒和田羊母羊丘脑、垂体和卵巢指数均极显著升高(P<0.01),且卵巢表面卵泡数显著下降(P<0.05),HE染色表明丘脑神经元细胞固缩、浓染;垂体中细胞核变形、浓染,胞浆减少;卵巢中初级卵母细胞溶解、消失,间质血管扩张。小花棘豆中毒和田羊母羊血清中GnRH、FSH、LH、E2和P4含量均极显著下降(P<0.01),丘脑中Kiss-1、GPR54、ERαmRNA,垂体中GnRHR mRNA和卵巢中FSHR、LHR mRNA表达量均极显著下降(P<0.01)。结果表明,小花棘豆毒性成分可通过丘脑—垂体—性腺轴影响和田羊母羊的生殖系统。