^60Coγ射线体外照射对人外周血淋巴细胞DNA切除修复能力的影响

本文研究了在0．5—5戈瑞的剂量范围内，^60Coγ射线体外照射全血，诱发的人外周血淋巴细胞染色体畸变产额的剂量效应关系及其对细胞DNA切除修复能力的影响。研究结果表明，双着丝粒体畸变(dic)。无着丝粒断片(ace)。细胞畸变率(cell．abr)分别适合配以二次多项式函数如下：Ydic=(0．2±0．59)D+(4．79±0．40)D^2，Yace=0．03+(4.49±1．31)D+(1.42±0．67)D^2，Ycell．abr=0.05+(7.43±1．80)D+(2.56±0.91)D^2。用u,v线诱发的细胞非预定性DNA合成(UDs)观察人外周血淋巴细胞DNA切除修复能力的变化说明，该指标受γ射线急性照射的影响不显著，而且未发现有规律性变化；同时结果也表明．0．5—5戈瑞γ射线照射不能诱发可检出的人外周血淋巴细胞UDS。

粒细胞集落刺激因子防治小鼠CCl_4所致肝损伤的作用

目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG- CSF)对CCl_4所致小鼠肝损伤的保护和治疗作用以及探讨rhG-CSF动员的外周血干细胞在受损肝组织内定植的能力方法:清洁级BALB/c小鼠,ip 400mL/LCCl_4,2mL/kg,每周2次,诱导肝损伤,sc rhG-CSF 200μg/kg进行预防和治疗.观察各实验组小鼠的生存率、肝组织病理变化、肝功能等指标.分别用免疫组化及流式细胞术观察肝组织中Thy-1和CD34阳性细胞变化,用Y染色体原位杂交法观察rhG-CSF动员的♂小鼠外周血干细胞在肝受损伤的♀小鼠肝脏内的定居能力.结果:rhG-CSF预防组小鼠的生存率、肝组织病理改变、肝功能的酶学指标均好于模型组(P<0.05).治疗后30d,rhG-CSF治疗组小鼠血清中肝功能酶学指标ALT和AST与对照组相比分别有显著性意义(1033.5±350.1nkat/L vs 1983.7±616.8nkat/L,P<0.01;1817.0±483.4 nkat/L vs 3017.3±811.2nkat/L,P<0.05),治疗后8d、15d rhG-CSF组肝脏组织中Thy-1^+和CD34^+细胞明显多于对照组(P<0.05).接受♂小鼠外周血干细胞移植的♀小鼠肝组织可见Y染色体阳性的细胞,主要位于汇管区与中央静脉周围,少数位于脾脏.结论:rhG-CSF预防和治疗均能促进CCl_4所致的小鼠肝损伤修复,提高生存率.

军团菌双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立一种特异、快速、敏感,同时能区分嗜肺和非嗜肺军团菌的荧光定量PCR方法,用于检测临床和环境样品。方法利用军团菌属特异性23S rRNA基因和嗜肺军团菌种mip基因的保守序列,设计引物和TaqMan探针。提取嗜肺军团菌标准菌株(LP1)DNA,分别构建2个含有目的基因的标准质粒作为阳性模板。优化荧光PCR反应条件和反应体系,对方法的特异性、敏感性、重复性进行评价。并对环境水样及80份临床痰样进行检测。结果该方法检测灵敏度达10标准质粒拷贝数/反应,具有高度特异性、稳定性。整个过程约需2 h。对35份环境水样进行检测,检出3株嗜肺军团菌和3株非嗜肺军团菌,所有水样经传统分离培养法和普通PCR法检测均显示为阴性。对临床80份随机痰液标本进行检测,2份嗜肺军团菌阳性。结论 TaqMan探针荧光定量PCR双管检测是一种可同时区分嗜肺与非嗜肺军团菌的特异、敏感、稳定的方法,可用于基层医院对环境标本及临床痰样的检测。

RT-LAMP与LAMP法检测结核分枝杆菌的效果比较

目的比较RT-LAMP、LAMP、L-J法检测MTB的效果,为结核病的快速诊断提供依据。方法用常见的非结核分枝杆菌与其他常见的呼吸道感染病菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌)检测特异性,并用酶切实验对结核分枝杆菌特异性产物进行酶切鉴定;用RT-LAMP、LAMP、L-J法检测100名结核病患者和22名来自无结核病患者痰标本中的结核分枝杆菌测试灵敏性;对浓度为1ng/μL H37Rv标准株进行对倍比稀释用于RT-LAMP极限检测实验。结果RT-LAMP、LAMP、L-J方法的阳性率分别为100%,92%和88%;RT-LAMP和L-J,RT-LAMP和LAMP差异均有统计学意义;RT-LAMP的灵敏度比LAMP高10倍;RT-LAMP不仅可以识别活菌,并且能够重复检测MTB的单一拷贝。结论 RTLAMP检测效果优于LAMP及L-J,适于基层医院结核病诊断的推广和应用。

RT-LAMP与RT-PCR法快速检测脑脊液结核分枝杆菌的效果比较

目的探讨逆转录(RT)-环介导等温扩增(RT-LAMP)法、RT-聚合酶链反应(PCR)法检测脑脊液结核分枝杆菌(MTB)的效果,为其快速诊断及临床药效评估提供依据。方法选取2015年12月至2017年4月解放军白求恩国际和平医院就诊的85例患者脑脊液标本进行研究,并将其分为TBM组(46例)、疑似TBM组(25例)和对照组(16例),根据结核分枝杆菌16SrRNA区段,设计特异性引物,建立RT-LAMP和RT-PCR检测技术体系,对两种方法的检测结果进行分析。结果 TBM组阳性检出率分别为97.8%和75.0%,疑似TBM组阳性检出率分别为76.0%和40.0%,对照组阳性检出率分别是0.0%和12.0%,各组RT-LAMP法阳性检出率高于RT-PCR法,差异有统计学意义(P<0.01);对照组中,采用RT-PCR法检测时发现非特异性扩增,采用RT-LAMP法检测时未见非特异性扩增,RT-LAMP法检测特异性强于RT-PCR法;RT-PCR法检测灵敏度为100CFU/mL,高于RT-LAMP法的1CFU/mL。结论 RT-LAMP法检测MTB时具有简便、灵敏快速、可检测活菌特点,与PCR法比较,特异性强、操作简便、检测成本低、耗时短,有望成为基层、野战医疗单位及发展中国家等的常规检查工具。

雷公藤服用者精液中乳酸脱氢酶及其同功酶C_4活性的研究

本文对19例中药雷公藤服用者精子、精浆中乳酸脱氢酶(LDH)及同功酶C_4(LDHC_4)的活性进行了测定分析。发现服药后以单位数量精子表示的LDHC_4活性在精子、精浆中均有明显升高(双侧非参数秩和检验,分别为P<0.01和P<0.02);通过酶活性与精子计数的相关分析,显示服药后精浆LDHC_4活性(mU/ml)与精子计数的正相关性(r=0.2279)较服药前(r=0.5505)弱,可能与精液中精子以外的其他LDHC_4来源贡献增大有关,诸如生精细胞的分解增多等。本文认为服药后精子LDHC_4活性上升,精液中非成熟精子比例增高是其原因之一。

少精子症患者精液沉淀物乳酸脱氢酶同工酶凝胶电泳分析

本文运用乳酸脱氢酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法，分析比较了少精子症、弱精子症、精液正常者的精液沉淀物乳酸脱氢酶同工酶百分比活性。结果显示：少精子症患者的ＬＤＨ－Ｃ４同工酶百分比活性４６％显著低于精液正常者的７１％（Ｐ＜０．０１）及弱精子症患者的６７％（Ｐ＜０．０１）；相对的，少精子症的ＬＤＨ５同工酶百分比活性１６％显著高于精液正常者的４．８％（Ｐ＜０．０１）和弱精子症的６．３％（Ｐ＜０．０１）。本文认为少精子症者精液沉淀物ＬＤＨＣ４活性降低与其精液中的各类细胞诸如未成熟的精子细胞。

粒细胞集落刺激因子对四氯化碳所致小鼠慢性肝损伤的预防作用

肝硬化目前尚缺乏满意治疗方法，阻断肝硬化的进展，将有助于延长患者生命。我们用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF），研究粒细胞集落刺激因子对CCh所致小鼠慢性肝损伤的预防作用。

细胞穿透肽:一种新型非病毒载体

细胞膜的选择通透性对维持细胞内环境的稳定起着非常重要的作用,但细胞膜的这种特性限制了一些生物大分子和药物进入细胞内,不利于对一些细胞内疾病的诊断和药物靶向治疗的应用。如何将一些具有诊断和治疗潜力的生物大分子、药物通过细胞膜进入细胞内一直是医学界研究的热点和难点。细胞穿透肽是一类能够携带多肽、蛋白质、核酸、纳米颗粒、病毒颗粒及药物等穿过细胞膜进入细胞,导致完整载物内化的短肽,为生物大分子和药物进入细胞内部提供了有力的运载工具,其作为载体具有的高转导效率和低毒性特点,已经得到了广泛关注和大量研究。目前,细胞穿透肽作为生物分子和药物细胞内化的运载体已经在荧光成像,肿瘤治疗,抗炎治疗及药物靶向治疗中发挥了潜在的诊断和治疗作用,显示出其诱人的应用前景。

粒细胞集落刺激因子对四氯化碳所致小鼠慢性肝损伤的治疗作用

目的观察重组人粒细胞集落刺激因子（rhGCsF）对四氯化碳（CCl4）所致小鼠慢性肝损伤的治疗作用。方法清洁级雄性BALB／C小鼠分为治疗组与对照组。每周2次CCl4腹腔注射制备慢性肝损伤模型。造模成功后治疗组给予rhGCsF（200big·kg^-1·d^-1）皮下注射7d，对照组给予同等剂量0．9％氯化钠溶液。测定小鼠体质量、肝重和脾重。采用临床常规方法检测肝功能、肝纤维化指标。对肝纤维化程度进行评分。流式细胞仪计数分析肝组织中CD34＋细胞，免疫组化法测定Thy-1^＋表达。结果治疗组小鼠第8和15天时脾重与肝重比值（15．94％±1.20％和10．52％±0．66％）与对照组（7．14％±1.68％和8．31％±1．71％）比较差异有统计学意义（P值均〈O．05），两组小鼠体质量和肝重差异无统计学意义（P〉0．05）。第15天时治疗组小鼠白蛋白水平快速上升。第30天时治疗组丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）水平均低于对照组。第30天时两组肝纤维化程度计分差异有统计学意义（治疗组5．49±2．16，对照组8．74±1．86，P〈0．05）。治疗组小鼠肝脏组织中CD34＋细胞和Thy-1^＋阳性细胞数在第8天（9．54±2．24和5．10±1．25）和第15天（8．18±1．93和7．53±1．39）时高于对照组（第8天时5．40±0．99和3．25±0．75；第15天时4．46±0．77和3．35±0．86，P值均〈O．05）。结论rhG-CSF能促进慢性肝损伤的恢复，将为肝纤维化提供一个新的治疗方法。