8型腺相关病毒介导短发夹状RNA在小鼠肝脏的表达及其功能

目的以内源性基因超氧化物歧化酶1(SOD1)为靶基因,观察经单次尾静脉注射后8型腺相关病毒(AAV8)介导的短发夹状RNA(shRNA)在小鼠肝脏内的表达、对靶基因的沉默效应以及重组AAV8-SOD1 shRNA的副反应。方法利用AAV8载体系统的双启动子构建能同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和SOD1 shRNA的重组AAV8-SOD1 shRNA。采用Northern blot和Western blot分别检测SOD1shRNA在小鼠肝脏内表达水平、靶基因SOD1在mRNA和蛋白水平表达变化、肝细胞微小RNA122(miRNA-122)表达水平;标准酶法测定小鼠肝功能;酶联免疫实验测定干扰素-α(IFN-α)水平;经HE染色对肝组织进行病理学观察。结果经尾静脉注射重组AAV8-SOD1 shRNA后,小鼠肝组织中可检测到SOD1 shRNA和SOD小干扰RNA(SODsiRNA)反义链的表达;靶基因SOD1在mRNA和蛋白水平表达均明显受抑;血清转氨酶轻度升高,但IFN-α水平无上调;肝组织无明显病理学改变;肝细胞miRNA-122水平无明显下降。结论经尾静脉单次注射重组AAV8-SOD1 shRNA后,SOD1 shRNA后可在小鼠肝脏中高效表达并沉默靶基因表达。重组AAV8-SOD1 shRNA对小鼠机体无明显副反应。