近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布

【目的】为了研究近年来华东地区家鸭中禽流感病毒的亚型分布情况。【方法】对2002-2006年分离自华东地区家鸭的180株禽流感病毒的HA亚型和其中88株禽流感病毒的NA亚型分别进行了测定。【结果】近年来华东地区家鸭中至少存在9种HA亚型和6种NA亚型组成的H1N1,H3N1,H3N2,H3N8,H4N6,H5N1,H5N2,H6N2,H6N8,H8N4,H9N2,H10N3,H11N2共13种亚型的禽流感病毒。【结论】华东地区家鸭中有多种亚型的禽流感病毒分布,应加强家鸭禽流感的监测和防制工作。

冷冻原肠中肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究

目的检测分析进出境冷冻原肠携带肠出血性大肠杆菌O157∶H7的情况。方法对2010-2011年进境或国产的35份冷冻原肠样品(包括19份冷冻羊原肠和16份冷冻猪原肠)进行检测,根据细菌的培养特性、生化鉴定和血清学鉴定,同时设立标准菌株作为对照。结果 2份原肠样品检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7,检出率为5.71%。结论进境和国产原肠均有可能携带肠出血性大肠杆菌O157∶H7,应该加强监测。

鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因的原核表达及动物免疫试验

为了研究鸡柔嫩艾美耳球虫SO7基因原核表达重组蛋白的免疫效力,分析其在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中对鸡平均增重、抗球虫指数(ACI)、减少盲肠病变和卵囊数量中的作用,从柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA作为模板,用RT-PCR扩增出SO7基因片段,再应用DNA重组技术将SO7基因克隆到原核表达载体pET32a(+)中并用IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果显示,pET32a(+)-SO7表达的目的蛋白约为40ku,主要以包涵体形式存在。用纯化的重组蛋白进行动物免疫试验显示,SO7重组蛋白在鸡抗柔嫩艾美耳球虫感染中有较好的免疫保护作用,能够显著提高鸡柔嫩艾美耳球虫感染鸡的平均增重和抗球虫指数(ACI),对减少盲肠病变和卵囊数量也有部分作用。

鼠痘、小鼠肝炎和鼠仙台病毒感染症的国内流行情况及防控对策

为了解鼠痘、小鼠肝炎和鼠仙台病毒感染症这3种新纳入《中华人民共和国进境动物检疫疫病名录》鼠病在国内的流行情况,对这3种鼠病的文献资料进行了收集和分析。重点分析了3种鼠病在国内清洁级及以上级别的实验大、小鼠中的流行情况,同时对如何防控提出了建议和对策。这3种鼠病在国内清洁级或以上级别的实验大、小鼠中均有检出,应进一步提高实验大、小鼠屏障设施建设和管理的标准化和规范化水平,重视微生物监测的作用,有效提高实验大、小鼠的质量。

猪胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌的生化及分子鉴定

为了建立胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌这3种猪常见呼吸道致病菌的区分鉴定方法,比较分析了3种细菌的生化特性,总结挑选出具有区分鉴定意义的生化项目,并从每种细菌中分别选择2个已知菌株进行生化反应的平行试验,同时用16SrDNA技术对细菌进行鉴定。通过对6株已知菌株的区分鉴定表明,细菌生化鉴定和16SrDNA鉴定均可用于3种猪呼吸道致病菌的鉴定,但两种方法配合使用,可以提高区别鉴定的效率和准确性。

华东地区家鸭中N2亚型低致病性禽流感病毒神经氨酸酶基因的重排

为研究华东地区家鸭中低致病性禽流感病毒NA基因的遗传进化规律,对2000年-2006年分离的包括H3N2,H5N2,H6N2,H9N2和H11N2的44株禽流感病毒的NA基因进行了遗传进化分析。44株病毒NA基因之间的同源性为82.9%-99.9%,4株H9N2病毒的NA基因同源性为96.9%-99.9%,所有H3N2病毒的NA基因同源性为92.3%-99.9%,H5N2、H6N2和H11N2病毒的同种亚型毒株间的NA基因同源性变化幅度较大,相反,有些不同HA亚型毒株间的NA基因同源性反而很高。进一步分析NA基因推导的氨基酸序列也表现出相似的规律。华东地区家鸭中N2亚型的禽流感病毒正处于不断地进化状态中,不同N2亚型的禽流感病毒之间已存在NA基因的重排。

六株H4N6亚型水禽禽流感病毒分离株NA基因的进化分析

为了丰富禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)的分子流行病学资料,通过对2002～2007年分离自华东地区家鸭的6株稀有H4N6亚型低致病性AIV的NA基因序列进行的分析,发现病毒NA基因全长约1464～1465bp,开放阅读框(ORF)都位于NA基因的19～1431位,长度均为1413bp。6株病毒NA基因之间的同源性为90.8%～99.8%,其中5株病毒NA基因的同源性非常高,达到96.0%～99.8%,但另外1株与其他病毒NA基因的同源性相对较低,介于90.8%～92.2%,进一步分析表明该病毒可能来源于其他地区禽类。对NA基因的推导氨基酸分析表明,ORF编码470个氨基酸,NA没有发生茎部缺失。研究结果表明,水禽内的H4N6亚型禽流感病毒进化相对比较缓慢。

肠衣携带细菌情况的分析及对策

通过对肠衣携带细菌的细菌总数、细菌多样性、致病菌情况和细菌对肠衣品质的影响等几个方面的分析,论述了肠衣携带细菌的安全隐患,全面分析所述隐患未引起重视的原因,并提出了相应的应对措施。

冷冻原肠浸泡解冻池水细菌多样性分析

为了研究冷冻原肠浸泡解冻池水的细菌多样性,采集3份水样直接提取细菌基因组总DNA,再分别用PCR技术扩增出细菌16S rDNA并构建基因文库,经PCR鉴定后从3个文库中分别随机挑取50个阳性克隆进行DNA序列测定。分别对3个文库的测序结果进行分析发现,除去24.00%~32.00%为无法鉴定的未培养细菌和未分类细菌以外,其余细菌来自于芽胞杆菌纲、γ-变形菌纲、放线菌纲和黄杆菌纲,分别占各文库克隆总数的38.00%~42.00%、20.00%~26.00%、4.00%~8.00%和0~2.00%。除去44株无法鉴定的细菌,进一步对其他106株细菌进行分析发现,其中2株放线菌目细菌和5株肠杆菌科细菌无法进一步鉴定,其余99个菌株包含了来自19个属的至少30种细菌,且肠球菌属、变形杆菌属和芽胞杆菌属为其中的优势菌属。本研究显示冷冻原肠浸泡解冻池水中细菌多样性较高,其中部分细菌为致病菌和条件致病菌。

大批量进口奶牛入境应当慎用空运

随着改革开放的发展和人民生活水平的提高，百姓的膳食结构也发生了巨大的调整，肉、蛋、奶等高营养、高蛋白食品在膳食中的比重正在逐年提高。这在增强国民体质、保障人民健康的同时，也给畜牧养殖业带来了巨大的压力。在我国，牛奶生产行业本来就是高要求、高投入、高风险的行业，特别是在“三聚氰胺事件”发生以后，国内牛奶市场面临从新洗牌、国外牛奶借机挤占中国市场并见风起价的特殊时期。引进高产、优良的奶牛保证奶源供给，

国产和进口冷冻原肠中奇异变形杆菌的监测与分析

目的研究国产和进口冷冻原肠携带奇异变形杆菌的情况。方法本研究对2014-2016年采集的40份冷冻原肠样品进行检测,其中包括16份国产猪原肠和24份进口羊原肠。经过奇异变形杆菌的分离、表型特征鉴定和16SrDNA鉴定,同时收集GenBank中不同地域和宿主动物的奇异变形杆菌,以及其他重要食源性致病菌的16SrDNA序列,结合本研究测定序列共同进行比对分析。结果 40份样品中有10份样品为PM检测阳性,总的PM检测阳性率为25.00%,其中,国产冷冻猪原肠的PM检测阳性率为31.25%,澳大利亚和新西兰进口冷冻羊原肠的PM检测阳性率分别为27.27%和15.38%,另外,发现不同原肠PM分离株之间的16SrDNA同源性差异较大,且同源性的高低和PM菌株的分离地域及宿主动物均未呈现明显的关联性。结论国产和进口冷冻原肠携带奇异变形杆菌的情况比较严重,相关管理和研究应进一步加强。

柔嫩艾美耳球虫江苏株SAG10基因的克隆及分析

根据Gen Bank中已发表的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)SAG10基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从E.tenella江苏株的第2代裂殖子中成功克隆出SAG10基因。将该基因与Gen Bank中国内外不同E.tenella分离株的SAG10基因进行比对,发现E.tenella江苏株与北京株的SAG10基因同源性最高,高达99%,其后依次为杨凌株、豪顿株。4种不同分离株SAG10基因的ORF之间有11个碱基不同,其中3个为无义突变,8个为有义突变。分析4种分离株SAG10基因推导蛋白质的亲水性、抗原指数、表面可及性发现,国内外不同E.tenella分离株SAG10蛋白的抗原性总体比较接近且很强,但国内不同分离株之间的抗原性更加接近,并优于国外的豪顿株,这可能是由于氨基酸突变引起蛋白质的空间构象和亲水性等发生变化而引起。将上述SAG10基因序列与复顶门原虫的其他相关SAGs基因序列进行遗传进化分析,发现Eimeria属球虫SAGs基因之间相对比较保守,且与犬新孢子虫(Neospora caninum)、N.hughesi、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的SAG基因之间同源性较低,与已有观点一致;但神经肉孢子虫(Sarcocystis neurona)的2条SAG1基因序列却与E.tenella的SAG1基因序列表现出更高的同源性,这与其他研究结论不符。

柔嫩艾美耳球虫核糖体蛋白S3a基因的克隆及分析

根据Gen Bank中收录的柔嫩艾美耳球虫核糖体蛋白S3a基因序列,利用计算机软件设计1对引物,从纯化的柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子中提取总RNA,然后应用RT-PCR技术扩增出约810 bp的产物,将其连入p MD18-T载体,经双酶切和PCR鉴定正确后,进一步进行DNA序列测定。将本研究测序结果与Gen Bank收录的柔嫩艾美耳球虫S3a基因进行比对,发现两序列间有6个碱基发生突变,其中3个为无义突变,其余为有义突变,同源性为97.9%;本研究扩增的S3a基因包含了一个全长795 bp的完整开放阅读框(ORF),编码264个氨基酸,蛋白分子量约为29.9 KD,ORF碱基同源性为99.0%,推导氨基酸序列同源性为98.1%。将本研究克隆的核糖体蛋白S3a基因与Gen Bank中收录的人和哺乳动物、植物、真菌、禽鸟等共15种真核生物的核糖体蛋白S3a基因进行比对发现,虽然本研究克隆和Gen Bank中收录的柔嫩艾美耳球虫S3a基因之间同源性最高,但是两者却与硕大利什曼原虫和布氏锥虫这2种原虫的S3a基因同源性较低,反而与禽鸟S3a基因的同源性较高。

关于打造江苏口岸进境活动物隔离检疫基地的设想

近年来,江苏口岸隔离检疫进境活动物的数量出现了急剧增长的态势,本文从打造江苏口岸进境活动物基地的必要性、有利条件和下一步工作的方向几个方面来论述:抓住"十二五"和2014年"青奥会"在南京举行这个机遇,积极打造江苏进境活动物隔离检疫基地的设想,为牢筑"国门生物安全保障体系",圆满完成江苏检验检疫局提出的"打造‘五区’铸强局"等战略目标创造条件。

盐城国家级珍禽自然保护区野鸭、天鹅、丹顶鹤禽流感监测分析

采用常规的血清学试验对江苏省盐城国家级珍禽自然保护区野鸭、燕鸥、天鹅、丹顶鹤中流感病毒的带毒状况和相应的禽流感抗体进行监测。共采集咽拭子和泄殖腔标本144份,在野鸭、丹顶鹤中分离鉴定出H4、H3、H6、H9、H5等亚型禽流感病毒13株,分离率为9.0%,其中泄殖腔标本阳性率为12.5%。野鸭血清中H4、H9、H6、H11等抗体呈阳性,燕鸥血清相应抗体检测为阴性,而天鹅由于免疫过AIVH5、H9油乳剂灭活苗,AIVH5、H9抗体平均效价均较高,同样免疫过的丹顶鹤AIVH5抗体却一直呈阴性。

重组鸡痘病毒首免与灭活疫苗加强免疫对高致病性禽流感免疫效果的影响

用表达H5亚型禽流感病毒(AIV)HA与NA基因的重组鸡痘病毒(rFPV)rFPV-12LSH5NA对10日龄带有H5亚型AIV母源抗体的商品鸡进行了首次免疫,17日龄时再用H5亚型AIV全病毒灭活疫苗加强免疫。免疫鸡分为2个批次,分别在24和31日龄用H5亚型AIV进行致死性攻击。在24日龄攻毒组中,rFPV首免与全病毒灭活疫苗加强免疫组的死亡比例(0/17)显著低于17日龄全病毒灭活疫苗单独免疫组(16/17)。在31日龄攻毒组中,rFPV首免与全病毒灭活疫苗加强免疫组的死亡比例(0/17)显著低于10日龄rFPV单独免疫组(6/17)。结果显示,在鸡群普遍存在针对H5亚型AIV母源抗体的情况下,rFPV首免与全病毒灭活疫苗配合使用能使鸡体快速建立坚强的免疫保护反应,是一种非常有效的免疫策略。

A组轮状病毒极速实时荧光RT-PCR检测方法的建立及临床评价

目的建立一种A组轮状病毒(rotavirus A,RVA)极速实时荧光RT-PCR检测方法。方法根据RVA基因组中非结构蛋白(non-structural rotavirus protein 3,NSP3)基因保守区序列设计一对引物和一条荧光探针,建立RVA极速实时荧光RT-PCR技术检测方法并对其进行灵敏度、特异性、精密度分析,最后采用200例临床粪便样本同时进行该方法检测和测序结果对比分析,以评价本方法的临床应用性能。结果本方法检测RVA的灵敏度达到2.00×102PFU/m L;对种属相近或引起相似症状的其他种属病毒无交叉反应;不同浓度样本的Ct值的变异系数在0.82%～2.28%之间。200例临床样本的研究结果显示本方法与测序方法检测结果的总符合率达到98.5%。结论本研究建立的方法检测RVA具有灵敏、特异、精密度高、快速简便的特点,并与测序方法具有很好的符合率,在病毒性腹泻的快速诊断和疫情监测方面具有很好的应用前景。

应用16S rDNA克隆文库法分析B6-Co小鼠角膜炎细菌组成

目的鉴定B6-Co突变系小鼠角膜的病原菌组成,并与人类细菌性角膜炎病原菌组成进行比较分析。方法选取10 d龄B6小鼠和B6-Co小鼠各6只为实验动物,提取小鼠角膜组织刮取物细菌基因组DNA,通过PCR扩增构建16S rDNA克隆文库,采用随机测序法分析B6-Co小鼠角膜细菌组成,B6小鼠作为对照。结果 B6-Co角膜混浊小鼠中共鉴定出20种细菌,隶属于15个属,包括葡萄球菌属、假单胞菌属、链球菌属、微球菌属、棒状杆菌属等。葡萄球菌属和假单胞菌属为优势群,葡萄球菌属丰度为19.7%~53.1%,假单胞菌属的丰度为17.4%~32.8%。其中葡萄球菌属主要是表皮葡萄球菌,丰度为13.8%~20.9%;缓慢葡萄球菌,丰度为14.0%~30.9%;金黄色葡萄球菌,丰度为7.4%~20.3%。此外,棒状杆菌和微球菌也比较常见。10 d龄B6小鼠未检测出细菌。结论 B6-Co突变系小鼠角膜细菌组成与人类角膜炎病原菌相似,是研究人类角膜炎诊断方法、发病机理及临床用药的很好的动物模型。

进口南美白对虾种虾的检疫程序和注意事项

我国是南美白对虾养殖第一大国，但种虾高度依赖进口，进口种虾存在可能携带疫病的风险，一旦疫病随进口种虾传入我国将会对养殖业带来不可估量的损失，为此国家出入境检验检疫部门制定了一系列进口种虾检疫程序，如隔离场许可、检疫审批、报检和现场检疫、隔离检疫等，以将进口种虾疫病风险降到最低。本文主要介绍种虾进口的检疫程序和需要注意的问题，供广大进口种虾企业参考。

肠衣传统和新型腌制技术研究及应用进展

我国是世界肠衣出口大国。为使国内腌制肠衣企业全面了解国际肠衣腌制工艺更新动态,及时跟踪相关机构的科研方向及研究进展,本文综述了传统氯化钠(NaCl)腌制肠衣技术和新型磷酸盐补充干盐(P-salt)腌制肠衣技术的研究背景、最新进展及其应用范围,介绍了国外更新肠衣加工工艺的操作模式。NaCl腌制技术一直是肠衣防腐杀菌和常温保存的主要方法,目前国际贸易中绝大多数半成品和成品肠衣采用该技术处理。NaCl腌制技术的杀菌能力与腌制肠衣中的盐浓度即水活性、腌制温度和pH等多种因素联系紧密。P-salt腌制技术能显著提高肠衣的卫生状况和机械特性,既可显著提高肠衣灌注内容物时的润滑度,又能提高肠衣携带病毒的杀灭效果。一些相关研究成果已成为当前制定肠衣腌制处理工艺的重要依据。目前国内外的肠衣腌制技术已由单一的NaCl腌制技术,逐渐进入到传统NaCl腌制和新型P-salt腌制共存的局面,并大有向后者倾斜的趋势。本文为国内肠衣腌制技术的研究和储备提供了参考。