C2C12-GLUT4HA骨骼肌细胞株的筛选

目的筛选过表达带有HA表位的葡萄糖转运子4(GLUT4HA)且具有收缩能力的C2C12骨骼肌细胞株。方法建立稳定过表达GLUT4HA的C2C12骨骼肌细胞株,从中挑选出23个克隆。用光镜观察各个克隆分化为多核肌管的能力和响应电脉冲刺激(EPS)的收缩能力,并用免疫印迹法检测各克隆中GLUT4HA蛋白的表达水平,筛选出分化良好、响应EPS收缩且高表达GLUT4HA的细胞株。将各细胞株进一步分为胰岛素组及其对照组、EPS组及其对照组,用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组细胞膜上GLUT4HA的含量(转位)。结果在选出的23个克隆中,克隆17的GLUT4HA表达量较高,分化和收缩能力良好,且在胰岛素和EPS后GLUT4转位显著升高。结论本研究建立了过表达GLUT4HA的具有收缩能力的C2C12-GLUT4HA骨骼肌细胞株,可用于研究胰岛素调节GLUT4转位和收缩调节GLUT4转位的机制。

PRF辅助的自体脂肪面部移植术后满意率调查

目的探讨富血小板纤维蛋白(PRF)辅助的自体脂肪面部填充的有效性和安全性。方法回顾性分析自体脂肪面部填充的病例共300例,其中PRF组为68例,常规组为232例,所有入组患者得到术后6个月以上随访,并通过对患者的满意率调查来评价有效性,比较并发症发生率。结果 PRF组术后6个月满意率为69.12%,常规组6个月满意率为51.72%;手术次数统计:PRF组术后需2次或多次脂肪填充比例为29.41%,常规组为44.40%;并发症统计:2组患者均未出现脂肪栓塞、出血、感染、坏死等并发症,3例常规组患者脂肪填充区可触及结节,PRF组未触及结节。结结论自体脂肪移植应用于面部是非常安全有效的方法,PRF联合应用可以提高手术效果和满意率。

碱性成纤维细胞生长因子联合血管内皮细胞生长因子促进自体脂肪移植成活的动物实验研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(1bFGF)联合血管内皮细胞生长因子(VEGF)对大鼠自体脂肪移植血管新生及成活的影响。方法建立大鼠自体脂肪移植模型,将腹股沟处脂肪组织与生长因子蛋白溶液或生理盐水混合移植于大鼠背部。大鼠背部随机注射脂肪组织与生理盐水或0.5μg bFGF、1.0μg bFGF、2.0μgbFGF、0.5μg bFGF+0.5μg VEGF、1.0μg bFGF+1.0μg VEGF。12周后,对移植物进行成活率分析、组织学观察以及CD31免疫组织化学染色。结果向0.3 ml脂肪组织中添加2.0 Pg bFGF可显著提高移植物成活率及微血管密度。0.5μg bFGF组及1.0μg bFGF组与生理盐水组相比,差异无统计学意义(P>0.05);但分别联合应用0.5μgVEGF和1.0μgVEGF以后,可显著升高移植物成活率,差异具有统计学意义(P<0.05)。1.0μg bFGF+1.0μg VEGF联合应用组的移植物成活率和血管密度亦高于2.0μg bFGF单添加组。结论相比单独应用bFGF,VEGF与bFGF联合应用可刺激更多的血管生成,从而提高移植脂肪的成活率。

自噬相关蛋白Atg5和LC3在婴幼儿血管瘤中的表达

目的研究自噬相关蛋白在婴幼儿血管瘤中的表达,初探自噬在婴幼儿血管瘤发生发展中的作用。方法根据患儿临床表现判断其瘤体处于增殖期还是消退期;将石蜡包埋的婴幼儿血管瘤(IH)标本经HE染色后,于光学显微镜下观察不同时期IH内血管内皮细胞的增生程度、形态;切片经TUNEL法染色后,根据标记凋亡细胞计数比较不同时期IH凋亡率差异;免疫组化染色观察不同时期IH中Atg5的表达水平差异;免疫荧光标记法分析不同时期IH中LC3-Ⅱ的表达水平变化。结果 Tunel凋亡检测显示,消退期IH细胞凋亡率明显高于增殖期IH(P<0.01);免疫组化结果显示,增殖期IH中Atg5的表达水平高于消退期IH(P<0.01);免疫荧光显示增殖期IH中的LC3-Ⅱ阳性细胞多于消退期IH。结论消退期IH凋亡细胞比增殖期明显增多;增殖期自噬活性较强,消退期自噬下调;自噬的下调有可能促进增殖期IH向消退期转化。

自噬抑制2-DG诱导内皮细胞凋亡

目的探讨2-脱氧.D-葡萄糖(2-DG)诱导人脐静脉血管内皮细胞发生凋亡与自噬及两者之间的关系。方法传代培养人脐静脉血管内皮细胞,在常氧实验条件下,细胞被分为对照组,不同浓度的2-DG组、2-DG联合甘露糖组、阳性对照组(衣霉素组),利用MTS比色法检测2-DG对人脐静脉血管内皮细胞增殖活性的影响;利用Western blot免疫印记技术,检测细胞内质网应激相关蛋白-葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达水平,以反映处理后的细胞内质网应激的水平变化;以Annexin V-PI流式细胞术检测人脐静脉血管内皮细胞凋亡。为了检测2.DG对细胞自噬的影响,引入自噬抑制剂3-MA,采用Western blot免疫印记技术,检测自噬相关蛋白Beclin 1和Atg 5的表达水平,以反映处理后的细胞自噬水平变化。结果 2-DG组细胞增殖活力明显降低,与对照组相比具有统计学意义,且该抑制作用呈剂量依赖性;2.DG联合甘露糖组增殖活力有所增加,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组凋亡率明显增加,与对照组相比具有统计学意义,2.DG联合甘露糖组细胞凋亡减少,与单独2.DG组相比具有统计学意义;2-DG组GRP78蛋白水平增加,与对照组相比具有统计学意义;加入甘露糖后,GRP78蛋白水平减少,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组Beclin1和Atg5蛋白表达均有所增加,与对照组相比具有统计学意义;3-MA预处理细胞抑制自噬后,2-DG诱导的细胞凋亡增多,Beclin1和Atg5蛋白表达也有所减少,与2-DG组相比具有统计学意义。结论 2-DG显著抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖,诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡及自噬;内质网应激可能是介导2-DG诱导细胞凋亡的相关作用机制;2-DG诱导的细胞自噬则能抑制细胞凋亡。

A型肉毒毒素提高脂肪隆乳效果的随机对照研究

目的观察脂肪隆乳术中,A型肉毒毒素(BTX-A)能否提高脂肪移植的保留率,增加脂肪隆乳的效果。方法2018年1月至2019年12月,空军军医大学西京医院整形外科将接受双侧乳房自体脂肪填充女性患者14例,年龄19〜41(28±7)岁,分为对照组和试验组,每组7例,均为双侧乳房。试验组双侧乳房接受自体脂肪和BTX-A联合移植,对照组患者双侧乳房只接受自体脂肪移植,脂肪中加人与试验组BTX-A等体积的生理盐水。用三维重建技术计算双侧乳房脂肪移植物保留体积,评估保留率;第三方医师和患者对脂肪移植效果、恢复时间、并发症等进行评估。结果术后随访3个月,双侧乳房脂肪充盈效果明显,无脂肪栓塞、血管神经损伤、感染、长时间瘀斑等并发症。14例中1例(对照组)右侧乳房脂肪移植后出现液化坏死,经积极处理后恢复正常,3例患者(试验组1例,对照组2例)出现不同程度的包块。三维重建数据及医师和患者评估显示,试验组脂肪移植保留率(51.10±20.56)%明显高于对照组(33.06±14.77)%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组间出现包块及其他并发症概率差异无统计学意义。结论BTX-A联合自体脂肪隆乳明显改善脂肪移植保留率,不减少并发症。