基于染色体短串联重复序列的荧光定量PCR技术在产前诊断中的实际应用

目的本研究旨在探讨基于染色体短串联重复序列(short tandem repeat,STR)的荧光定量PCR(quantitative fluorescence PCR,QF-PCR)在产前诊断中的应用潜力及其价值。方法通过基于STR的QF-PCR技术结合染色体核型分析技术和染色体微阵列分析技术(chromosomal microarray analysis,CMA),我们对635例产前筛查异常的羊水样本进行了筛查,从而有效地排除了母源细胞污染(maternal cell contamination,MCC)(>20%),为后续的产前检测提供了可靠的依据。此外,为了快速诊断胎儿及其相应的孕妇样本,我们检测了包括13、18、21、X、Y在内的五条染色体,并将其与核型分析的结果进行比较。结果通过QF-PCR检测,在635例样本中,发现了3例母源污染,1例三倍体,1例与母亲的亲缘关系不符,12例21三体,6例18三体,1例13三体。除此之外,还有10例性染色体异常和1例21三体嵌合。与CMA结果比较,QF-PCR检测结果均符合试剂盒的检测范围。值得一提的是,QF-PCR检测还额外的发现了5例母亲的性染色体异常,同时若在试剂盒检测范围内发现了三体还可以结合亲本的STR分型结果分析额外染色体的亲本来源并且推测异常染色体减数分裂不分离发生时期。结论基于STR位点的QF-PCR技术是一种快速检测方法,不仅适用于非整倍体倍型的检测,还可用于母源细胞污染检测、亲缘溯源检测以及染色体嵌合体的检测,同时还可以检测染色体三体的亲本来源。QF-PCR技术在产前诊断中具有广泛的应用前景,可以为医生和家庭提供更准确、更可靠的诊断结果。

MAPKs信号通路在牙周炎发生发展中的作用的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是生物体内最重要的信号转导系统之一,包括细胞外信号调控蛋白激酶(extracellular signal-regulated protein kinase,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)/应激激活蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK)、p38、ERK5/大丝裂素活化蛋白激酶1(big mitogen-activated proteinkinase,BMK1)四个家族成员,参与细胞增殖、分化、凋亡的调节,并与炎症、肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关。牙周炎是一种慢性感染性疾病,MAPKs参与了牙周炎发生发展的过程,该文将对近年来相关研究的进展做一综述。

Nd:YAG激光对鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的影响

目的研究Nd:YAG激光对鳞状细胞癌(鳞癌)CAL-27细胞的生物学效应。方法用脉冲1064 nm Nd:YAG激光连续照射体外培养处于对数生长期的鳞癌CAL-27细胞,分组照射后倒置显微镜下观察细胞形态,培养1、3、5 d后利用MTT法测定OD值,以此来研究激光对鳞癌CAL-27细胞增殖的影响。结果低剂量激光照射时,CAL-27细胞的OD值随着激光照射剂量的增加而升高(P<0.05);而高剂量激光照射时,CAL-27细胞的OD值随着激光照射剂量的增加而降低(P<0.05)。结论 1 064 nm Nd:YAG激光低剂量照射鳞癌CAL-27细胞,细胞表现形态规则、密度增大,增殖活跃;而高剂量照射鳞癌CAL-27细胞后,细胞形态不规则、密度降低,增殖受到抑制,对指导临床应用有一定参考价值。

内毒素耐受对人中性粒细胞抗炎反应的影响

目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的耐受对人中性粒细胞分泌抗炎因子白介素(interleukin,IL)-10及细胞凋亡水平的影响。方法:采用1μg/m L牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis)LPS或者1μg/m L大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS刺激人中性粒细胞12 h,诱导细胞耐受。洗脱后,分别采用2种LPS再次刺激20 h,采用ELISA技术检测细胞分泌IL-10水平。同法诱导细胞耐受,洗脱后,再次刺激3 h,采用AV-PI法检测细胞凋亡水平。结果:P.gingivalis LPS或E.coli LPS单次刺激人中性粒细胞后,IL-10分泌水平均较刺激前明显增加(P<0.05),凋亡水平则无明显改变(P>0.05)。2种LPS分别重复刺激之后,IL-10分泌水平均较单次刺激后显著增加(P<0.05)。P.gingivalis LPS重复刺激3 h后,中性粒细胞短期内凋亡水平与单次刺激后无明显改变(P>0.05),而E.coli LPS重复刺激3 h后,细胞短期内凋亡水平较单次刺激后明显下降(P<0.05)。结论:内毒素耐受能促进人中性粒细胞分泌IL-10,但不同LPS诱导的耐受对细胞凋亡水平的影响可能存在差异。

快肌与慢肌失神经支配后的形态学变化

目的:探讨快肌(胫前肌)与慢肌(比目鱼肌)在失神经支配过程中的形态学差异。方法:本研究拟采用大鼠坐骨神经离断模型,通过组织病理学系统分析失神经支配过程中胫前肌与比目鱼肌在形态学方面的变化。结果:在坐骨神经损伤后不同时间点,将比目鱼肌的萎缩程度与胫前肌相比,显示比目鱼肌的萎缩程度较胫前肌严重,主要表现在比目鱼肌的肌肉湿重比较小、肌纤维截面积比率较低、超微结构较不完整、运动终板破损较严重。结论:失神经支配后慢肌萎缩程度较快肌严重。

虾青素通过抑制氧化应激延缓失神经肌萎缩

目的:探讨抗氧化剂虾青素(astaxanthin,AST)对失神经肌萎缩的影响及其分子机制。方法:构建小鼠失神经肌萎缩模型,观察虾青素处理后胫前肌湿重比和肌纤维横截面积,采用透射电镜观察线粒体自噬,qRT-PCR和Western Blot方法检测氧化应激、蛋白水解以及自噬等相关基因的表达变化。结果:虾青素可以显著抑制靶肌由于失神经支配引起的湿重比和肌纤维横截面积的减小,抑制效果与虾青素剂量存在量效关系,高剂量虾青素(50 mg·kg-1·d-1)的效果最好。高剂量虾青素可显著抑制靶肌中肌肉特异性泛素连接酶MuRF1和MAFbx的高表达,减轻肌球蛋白重链MyHC的降解。失神经支配后靶肌大量线粒体出现空泡变性和自噬,同时伴随自噬相关蛋白ATG7和BNIP3显著高表达,AST处理能明显抑制靶肌线粒体空泡变性和自噬,同时ATG7和BNIP3表达下降。在失神经支配胫前肌中抗氧化相关基因NRF2、NQO1表达显著下降,而与ROS产生相关基因Nox2、Nox4表达显著上升,AST处理可显著逆转NRF2、NQO1基因表达的下降和Nox2、Nox4基因表达的上升。结论:虾青素可能通过抑制氧化应激反应来缓解失神经引起的骨骼肌萎缩和线粒体自噬,为虾青素作为防治肌萎缩药物提供科学依据。

肿瘤坏死因子受体相关因子6在大鼠失神经支配后胫前肌与比目鱼肌中的表达变化

目的通过蛋白质组学方法分析失神经支配后胫前肌与比目鱼肌的蛋白表达变化,探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在失神经支配后胫前肌与比目鱼肌中的表达变化及其意义。方法制备大鼠坐骨神经离断模型,通过同位素相对标记与绝对定量(i TRAQ)技术方法分析胫前肌与比目鱼肌在失神经支配后的蛋白表达变化,比较差异表达的蛋白在胫前肌与比目鱼肌中的差异,筛选出在胫前肌与比目鱼肌中的表达变化差异显著的关键蛋白,并通过免疫印迹法验证其表达,进一步通过体外方法验证关键蛋白的生物学作用。结果失神经支配后比目鱼肌萎缩速度和程度明显大于胫前肌(P<0.05,n=20),蛋白质组学研究发现有30个蛋白在胫前肌与比目鱼肌中表达变化差异较为明显,这些蛋白主要包括代谢相关蛋白、伴侣蛋白、收缩蛋白以及信号分子等,其中TRAF6在失神经支配后比目鱼肌中表达显著上升,蛋白免疫印迹法检测结果也证实了蛋白质组学的结果,TRAF6的靶基因肌肉环状指蛋白1(MuRF1)和肌肉萎缩盒F基因(MAFbx)在失神经支配后比目鱼肌中的表达也高于其在胫前肌中的表达(P<0.05,n=6);为了进一步探讨TRAF6对肌萎缩的影响,在肌管中转染TRAF6 siRNA和对照siRNA,然后用地塞米松诱导C2C12肌管萎缩,发现TRAF6 siRNA转染组肌管的直径明显大于转染对照siRNA组(P<0.05,n=6);TRAF6、MuRF1和MAFBx在TRAF6 siRNA转染组肌管中的表达显著低于转染对照siRNA组(P<0.05,n=6),结果提示TRAF6 siRNA有效抑制了靶基因TRAF6的表达,也同时抑制了其下游靶基因MuRF1和MAFBx的表达。结论 TRAF6在失神经支配后比目鱼肌中的表达量显著高于其在胫前肌中的表达,抑制TRAF6的表达可以减轻地塞米松引起的肌管萎缩,由此推测失神经支配后比目鱼肌萎缩较胫前肌严重可能与失神经支配后比目鱼肌中TRAF6的升高更显著有关。

Nd：YAG激光对口腔鳞癌CAL-27细胞迁移的影响

目的探讨1064 nm Nd:YAG激光对口腔鳞癌CAL-27细胞迁移的影响。方法体外培养鳞癌CAL-27细胞,取处于对数生长期的细胞接种于24孔板中并继续培养24 h,分0、120、240、360、480 s五组接受激光照射,对应剂量为0、44.4、88.8、133.2、177.6 J/cm^2,划痕后分别于0、12、24、48 h在倒置显微镜下观察划痕变化并拍照,以研究激光照射对细胞迁移影响。结果低剂量激光照射后细胞划痕区域愈合程度提高,而高剂量激光照射后,细胞划痕区域愈合程度降低。结论低剂量Nd:YAG激光照射对鳞癌CAL-27细胞迁移有一定促进作用,而高剂量Nd:YAG激光照射则会对鳞癌CAL-27细胞的迁移产生明显抑制作用。

染色体微阵列分析在流产物检测中的应用与意义

目的 本研究旨在通过染色体微阵列分析(CMA)探究流产绒毛或胚胎组织中染色体异常的分布,及其与孕周和孕妇年龄的相关性,以评估CMA在自然流产遗传学诊断中的应用价值。方法 研究收集了2021年2月至2023年11月南通市妇幼保健院处理的891例流产女性样本,进行染色体微阵列分析和荧光定量PCR(QF-PCR)检测。样本根据CMA结果分为染色体数目异常、致病性拷贝数变异(CNV)、意义不明的变异(VOUS)和未见明显异常四类,比较不同年龄和孕周孕妇的CMA结果。结果 891例流产样本中,366例(41.08%)出现染色体数目异常,54例(6.06%)检出致病性CNV,67例(7.52%)为VOUS。孕早期(1~12周)样本中染色体数目异常比例为46.60%,孕中期(13~27周)降至38.35%,孕晚期(28周以上)的样本中未见染色体数目异常。非整倍体异常,尤其是常染色体三体或单体最多,以16号染色体三体较多见。致病性CNV中约75.93%为非平衡染色体异常。数据还显示孕妇年龄增长与遗传异常风险正相关,40岁以上孕妇遗传异常发生率显著增加。结论 CMA是胎儿流产遗传学诊断的重要工具,能检测染色体数量异常和基因组拷贝数变异,对评估再次怀孕风险提供重要指导。