胶质瘤C6肿瘤干细胞蛋白质组学初步分析

目的:运用蛋白质组学的方法,对C6脑肿瘤干细胞(BTSC)和非BTSC细胞进行配对研究,建立差异性蛋白文库,为探讨胶质瘤病因提供初步线索。方法:在C6细胞中,参照神经干细胞(NSC)培养条件进行培养。出现典型的神经球后,利用免疫荧光染色检测细胞标记,包括nestin,神经元特异性烯醇化酶(NSE),神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等,以及诱导分化等方法,鉴定神经球细胞是否为BTSC。收集神经球和非神经球细胞,进行配对,利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)检测细胞总体蛋白,分析差异性蛋白点。结果:C6细胞在NSC培养条件下,出现比较典型的神经球。神经球细胞nestin阳性,NSE和GFAP阴性。经诱导发生分化,分化后细胞形态与C6相似,能够表达NSE和GFAP等多种表型细胞标记,证实这种神经球细胞为肿瘤干细胞。在2D-PAGE结果中,C6肿瘤干细胞和非干细胞配对比较,有统计学差异(P<0.05)的蛋白点共有84个,大于2倍差异蛋白点有50个,大于3倍的有17个,大于4倍的有6个,最大差异倍数为11.607 2。在BTSC中,有55个差异蛋白表达增多(上调),29个蛋白表达下降(下调)。结论:胶质瘤C6细胞系中存在肿瘤干细胞,在蛋白质组学方面与非BTSC细胞有明显差异。

维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥疗效的影响

目的探讨维拉帕米对裸鼠胶质瘤U251模型卡氮芥(BCNU)疗效的影响。方法制作裸鼠胶质瘤U251模型,分别给予BCNU和BCNU+维拉帕米进行治疗,测量肿瘤大小,用免疫荧光染色检测肿瘤中P-糖蛋白(P-gp),多药耐受蛋白1(MRP1)和肺耐药相关蛋白(LRP)的表达。结果 BCNU+维拉帕米组中,肿瘤大小明显比BCNU组减小,尤其是第一至四周更加明显(P<0.05)。肿瘤细胞中LRP,P-gp和MRP1均为阳性,主要在细胞膜表达,从形态学上两组差别并不明显。结论维拉帕米在体内有明显增加胶质瘤U251对BCNU的敏感性,逆转耐药的作用。

骨髓间充质干细胞对胶质瘤C6细胞增殖的影响

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对胶质瘤C6细胞体外增殖的影响。方法从大鼠骨髓中分离MSCs,体外培养和鉴定。取MSCs培养上清液,按照1/5,2/5,3/5的比例加入到C6培养基中,用MTT实验和BrdU标记指数(BrdU LI)评估C6细胞增殖。将MSCs与C6按照1∶1,1∶2,2∶1比例共培养。结果大鼠MSCs贴壁生长,有较强的增殖能力。经硫代甘油和巯基乙醇诱导分化后,分化为神经元或胶质细胞样细胞。C6培养基中加入MSCs培养上清液后,活性受到明显抑制,BrdU LI明显减低(P<0.05)。C6与MSCs共培养后,生长明显受到抑制,BrdU LI明显降低,尤其在MSCs周围,表现更加明显。结论大鼠MSCs在体外有明显的抑制胶质瘤C6增殖作用。

骨髓间充质干细胞在胶质瘤研究中的应用

骨髓间充质干细胞（MSC）在体内具有向肿瘤部位定向迁移能力，是比较理想的基因治疗“细胞载体”。通过转染或转导的方法，在体外使MSC携带目的基因，并获得稳定表达，然后将它们移植到宿主体内，发挥治疗作用。这种先体外后体内的过程在胶质瘤等多个系统肿瘤中进行了研究，获得阳性结果。MSC移植的安全性值得关注，其中与宿主肿瘤细胞的相互作用目前尚无定论。

胶质瘤U251细胞化疗过程中MGMT表达改变与耐药的关系

目的探讨胶质瘤U251细胞中MGMT表达与卡莫司汀(BCNU)和替莫唑胺(TMZ)化疗耐药的关系。方法细胞生长情况用MTT进行评估,细胞周期采用流式细胞仪检测,MGMT表达用western-blot检测。结果 U251细胞对BCNU和TMZ存在耐药现象。在化疗过程中,处于G0/G1期细胞比例明显增加,MGMT表达无显著变化。结论利用BCNU和TMZ对U251进行化疗过程中,不能通过消耗MGMT,来达到逆转耐药现象的目的 。