NKILA-miR-889-3p轴在调控口腔鳞状细胞癌细胞增殖迁移与侵袭中的作用

目的:通过分析长非编码RNA NKILA在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其临床意义,探讨NKILA与其潜在靶向miRNA之间的交互调控机制,以阐明其在OSCC发展中的作用。方法:收集了80例经病理学证实的OSCC患者及相应邻近正常口腔黏膜组织样本,使用qRT-PCR检测NKILA的表达水平及其与预后。利用克隆形成实验和Transwell迁移侵袭实验评估NKILA对OSCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过亚细胞分离实验确定NKILA的亚细胞定位,并使用LncBase预测NKILA的潜在靶miRNA。AGO_(2)免疫沉淀实验用于验证miR-889-3p与NKILA的交互作用。结果:与相应的正常组织相比,NKILA在OSCC组织中的表达显著降低(P<0.0001),且其低表达与OSCC患者的晚期TNM分期、淋巴结转移和远处转移显著相关(P=0.001,P=0.046,P=0.011)。细胞实验结果表明,NKILA的敲低显著促进了OSCC细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),而NKILA的过表达则显著抑制了这些细胞功能(P<0.05)。亚细胞定位实验显示NKILA主要位于细胞质。miR-889-3p被识别为NKILA的潜在靶点,过表达NKILA可显著上调miR-889-3p的表达(P<0.05),反之亦然。AGO_(2)免疫沉淀实验进一步证实了miR-889-3p能特异性结合并调节NKILA(P<0.05)。结论:本研究明确了NKILA在OSCC发展中的下调现象及其潜在的功能机制,揭示了NKILA与miR-889-3p之间的重要交互调控关系,为OSCC的研究和治疗提供了新的见解。

miRNA对口腔鳞状细胞癌化疗耐药性的调控机制研究

目的探讨特征性微核糖核酸(microRNA,miRNA)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)化疗耐药性和肿瘤生物学中的作用。方法在耐药OSCC中SCC084/R、SCC131/R和SCC9/R中选择3个表达异常的miRNA(miR-27b-5p、miR-130a-3p和miR-125a-5p)。评估所选miRNA对OSCC耐药细胞系的细胞毒性、细胞凋亡和细胞周期的影响。随后,通过miRNA靶基因预测数据库TargetScan选择miRNA的潜在靶点,通过Western blotting对相应靶点蛋白表达进行分析。结果miR-27b-5p和miR-130a-3p可提高SCC084/R、SCC131/R和SCC9/R细胞对顺铂的敏感性,而miR-125a-5p仅能提高SCC9/R对顺铂的敏感性(P<0.05)。miR-27b-5p上调可提高SCC9/R细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的敏感性,miR-130a-3p下调可提高SCC084/R细胞对5-FU的敏感性(P<0.05)。相对于单个miRNA转染,共转染miRNA在SCC084/R和SCC131/R耐药细胞系中显示出更强的化疗增敏作用(P<0.05)。所选miRNA均能引起细胞凋亡,除miR-130a-3p外,miR-125a-5p和miR-27b-5p均能引起SCC084/R和SCC131/R细胞的G1期阻滞。耐药调控涉及ErbB2/Her2通路、p38通路、p53通路及通路的多个下游靶点。结论miRNA可能是调控OSCC耐药性的关键因素,且这种调控具有多靶点性。

circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究

目的:探究circVAPA通过miR-125b/HOXA7轴逆转口腔癌细胞化疗耐药的机制研究。方法:将SCC9/DDP细胞分为SCC9/DDP组、si-NC组、si-VAPA组、miR-125b组、miR-NC组、pcDNA-VAPA组、miR-HOXA7组。qRT-PCR检测细胞中circVAPA和miR-125b表达,MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测细胞耐药、增殖、侵袭和凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中HOXA7蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证VAPA、miR-125b和HOXA7的靶向关系。结果:和HOK相比,SCC9和SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显升高,miR-125b表达明显降低(P<0.05);且SCC9/DDP细胞中circVAPA表达明显高于SCC9细胞,miR-125b表达明显低于SCC9细胞(P<0.05)。和SCC9/DDP组相比,si-VAPA组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加(P<0.05)。和miR-NC组相比,miR-125b组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显降低,细胞凋亡能力明显增加(P<0.05)。靶向关系结果显示,miR-125b组荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.05);si-VAPA组细胞中miR-125b表达明显高于si-NC组(P<0.05),miR-125b组细胞中HOXA7表达明显低于miR-NC组(P<0.05)。和miR-125b组相比,pcDNA-VAPA组和miR-HOXA7组细胞IC 50浓度、细胞耐药指数、细胞侵袭能力和细胞中HOXA7蛋白表达明显升高,细胞凋亡能力明显降低(P<0.05)。结论:低表达circVAPA可通过调控miR-125b/HOXA7轴来逆转口腔癌细胞化疗耐药,抑制口腔癌化疗耐药细胞增殖、侵袭并诱导凋亡。

幽门螺杆菌及其相关毒素与口腔扁平苔藓关系的研究

目的探讨口腔扁平苔藓与幽门螺杆菌及其相关毒素CagA和VacA之间的关系。方法快速尿素酶检测法检测口腔扁平苔藓患者与正常对照组龈下菌斑中幽门螺杆菌的表达。酶联免疫吸附试验法检测口腔扁平苔藓患者与正常对照组血清中幽门螺杆菌及相关毒素CagA和VacA的表达。结果60例扁平苔藓患者龈下菌斑中Hp的阳性表达数明显高于正常对照组(P<0.05),差异有统计学意义;60例扁平苔藓患者血清中Hp-IgG抗体、CagA-HpIgG抗体、VacA-HpIgG抗体阳性表达数明显高于正常对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论口腔扁平苔藓的发生与可能与Hp感染及CagA、VacA基因相关。

金黄地鼠颊黏膜癌前病变的组织学及超微结构观察

目的:利用光镜及扫描电镜对金黄地鼠颊黏膜癌前病变进行组织学及超微结构观察。方法:借助DMBA建立金黄地鼠颊黏膜癌前病变动物模型,分别进行光镜、扫描电镜观察。结果:实验组在光镜下均表现为不同程度的异常增生;空白对照组在电镜下表现为细胞外形规则,表面呈蜂窝状。实验组在电镜下表现为细胞外形不规则、重叠松解;癌前病变区附近肉眼观正常黏膜组织,光镜下表现为上皮层单纯增生或角化层增厚,电镜下90%表现为蜂窝状结构大量丧失,细胞外形趋于不规则。结论:扫描电镜在口腔黏膜癌前病变的诊疗中具有广阔的应用前景。

人口腔鳞状细胞癌发病节点lncRNA的筛选、验证及意义

目的应用微阵列芯片技术检测长链非编码RNA(long non-codingRNA,lncRNA)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织中的表达谱,筛选OSCC发病过程中节点lncRNA,研究其表达和临床意义。方法利用lncRNA表达谱芯片,对3例OSCC及对应正常组织的转录本进行高通量筛查,确定OSCC中的lncRNAs和mRNAs差异表达谱。利用lncRNA与mRNA特异性表达的标准化信号强度,构建差异基因共表达网络,挖掘节点基因,分析其表达水平与临床病理特征及患者预后之间的关系。选取部分差异表达的lncRNA,借助qRT-PCR技术对芯片结果进行验证。结果实验共筛选出差异表达lncRNAs2 294条和mRNAs 1 938条。LncRNA TMPRSS11BNL、lnc-WRN-10:1是共表达网络的节点基因,在OSCC组织中低表达,并与患者临床分期、淋巴结转移、远处转移和生存状态有关,低表达lncRNA TMPRSS11BNL、lnc-WRN-10:1 OSCC患者有着较短的无进展生存时间和总生存时间。qRT-PCR验证结果与芯片结果相一致。结论LncRNA TMPRSS11BNL、lnc-WRN-10:1有望成为成为OSCC早期诊断、治疗及预后评估的分子标志物。

EZH2和PCNA在金黄地鼠颊囊黏膜癌前病变中的表达

目的探讨EZH2、PCNA在金黄地鼠颊囊黏膜癌前病变中的表达及意义。方法用20只金黄地鼠建立颊囊黏膜癌前病变的动物模型,免疫组化SABC法研究EZH2、PCNA的表达,并探讨EZH2与PCNA的关系。结果 EZH2、PCNA在癌前病变组织中高表达,在正常组织中低表达,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,EZH2和PCNA表达具有相关性。结论 EZH2、PCNA参与口腔黏膜癌前病变的发生与发展,PCNA的表达与EZH2显著相关,它们的异常表达有助于口腔黏膜癌前病变的早期诊断。

金黄地鼠颊黏膜癌前病变发病机制的研究

目的探讨金黄地鼠颊黏膜癌前病变的发病机制。方法选取叙利亚金黄地鼠25只,随机分为对照组5只,模型组20只。利用0.5%二甲基苯并蒽丙酮溶液,建立口腔黏膜癌前病变动物模型,借助免疫组织化学法、光镜和电镜进行观察研究。结果模型组上皮黏膜在光镜下均表现为不同程度的异常增生;模型组果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)、增殖细胞核抗原(PCNA)高表达率高于对照组(P<0.05)。对照组在电镜下表现为细胞外形规则,紧密相邻,表面呈蜂窝状;模型组在电镜下表现为细胞外形不规则,间隙增宽,重叠松解。癌前病变区附近肉眼观察正常的黏膜组织,光镜下表现为上皮层单纯增生或角化层增厚,扫描电镜下表现为蜂窝状结构大量丧失,细胞外形趋于不规则。结论口腔黏膜癌前病变的基础为超微结构的改变,在早期诊疗过程中电镜发挥着重要的作用。

母系表达基因3通过p53途径抑制口腔鳞癌SCC25细胞生物学活性

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)在口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)组织及细胞系中的表达,研究其对OSCC细胞生物学行为和患者预后的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)检测OSCC组织和细胞系中lncRNA MEG3的表达,分析其表达与患者预后的关系。采用脂质体法将lncRNA MEG3过表达质粒及对照质粒分别转染OSCC SCC25细胞,利用MTT实验检测OSCC SCC25细胞生长增殖能力的变化、划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化、流式细胞术检测细胞凋亡的变化、蛋白质印迹法和qRT-PCR检测p53表达水平的变化。结果LncRNA MEG3在OSCC组织和细胞系中的表达较正常组织和细胞明显降低,其低表达的OSCC患者有着较短的无进展生存时间和总生存时间。lncRNA MEG3过表达,可以抑制OSCC SCC25细胞的增殖、迁移、侵袭的能力,诱导细胞凋亡,并促进p53基因的表达。结论LncRNA MEG3发挥着抑癌基因的作用,并通过调控p53通路显著抑制OSCC SCC25细胞的生物学活性。

应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白

目的:应用双向荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)和质谱技术筛选、鉴定与口腔扁平苔藓(OLP)患者唾液有关的差异蛋白。方法:收集3例OLP患者及3例健康人唾液,提取唾液总蛋白采用2-D DIGE技术分离蛋白质,寻找差异蛋白质点应用液相色谱一质谱联用技术(LC-MS)对差异蛋白质点进行质谱鉴定。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示各样品条带清晰,无明显蛋白质丢失,经2-D DIGE分离蛋白质后,蛋白质点重复性较好。OLP患者组和健康对照组唾液差异蛋白质点数平均为(317±71)个,用质谱技术鉴定了重复性较好的4个差异蛋白质点(分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白)在OLP患者唾液中表达量均上调。结论:分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白在OLP患者唾液中高表达可能参与了OLP的发生、发展。

化湿行瘀清热方剂对口腔扁平苔藓治疗作用的临床研究

目的探讨化湿行瘀清热方剂对口腔扁平苔藓(OLP)的治疗作用。方法选择30例OLP患者和30例正常人,通过全自动生化分析仪进行唾液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)含量的检测,并对OLP患者采用化湿行瘀清热方剂治疗,观察治疗6周后的临床效果以及治疗前后唾液中ALT、AST、LDH含量的变化。结果 OLP患者组经化湿行瘀清热方剂治疗6周后,自觉症状消失或有不同程度的减轻,充血、糜烂、白色病损消失或减轻;OLP患者组治疗前唾液中LDH含量明显高于正常对照组,ALT、AST含量与正常对照组无明显差异,经用化湿行瘀清热方剂治疗6周后唾液中LDH含量明显降低。结论化湿行瘀清热方剂在治疗口腔扁平苔藓上有明显的临床效果;唾液中ALT、AST水平与OLP无明显关系,LDH含量的升高可能与OLP的发生有关。

藓化饮治疗金黄地鼠颊黏膜癌前病变前后EZH2、PCNA的表达及意义

目的探讨EZH2、PCNA在金黄地鼠颊黏膜癌前病变藓化饮治疗前后的表达及意义。方法按完全随机设计方法,将动物分为空白对照组5只和实验组50只。实验组用于建立金黄地鼠颊黏膜癌前病变模型,其中30只为藓化饮治疗组;10只为癌前病变对照组;10只为生理盐水治疗对照组。治疗8周时,各组同步取材。采用免疫组化方法,光镜下观察EZH2、PC-NA在金黄地鼠颊黏膜癌前病变藓化饮治疗前后的表达情况。结果癌前病变对照组EZH2、PCNA高表达率与空白对照组相比,有显著性差异(P<0.05);藓化饮治疗组EZH2、PCNA高表达率与癌前病变对照组相比,有显著性差异(P<0.05);而藓化饮治疗组EZH2、PCNA高表达率与空白对照组相比,无显著性差异(P>0.05);生理盐水治疗对照组EZH2、PCNA高表达率与藓化饮治疗组相比,有显著性差异(P<0.05)。结论中药藓化饮对金黄地鼠颊黏膜癌前病变具有明显的逆转作用。

乙二胺四乙酸和透明质酸对牙周膜成纤维细胞活力和细胞因子表达的影响

目的:研究乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)和透明质酸(hyaluronic acid,HA)对牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)活力和细胞因子表达的影响。方法:选取因正畸拔除的智牙12颗,制备成5 mm×4 mm大小根片,按照处理方式不同分为EDTA组、HA组、EDTA+HA组和未处理组。将其置于孔板中并在根片上接种PDLFs,于接种24、48 h后,采用MTT法检测各组细胞增殖活力,显微镜下观察PDLFs的黏附情况。利用ELLISA法和Western免疫印迹法测定PDLFs产生的炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α水平,采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计分析。结果:接种24、48 h后,与未处理组相比,各处理组均能促进PDLFs增殖和黏附,且联合处理促细胞增殖和黏附效果优于单一处理,差异均具有统计学意义(P<0.05);EDTA组和HA组促细胞增殖和黏附效果随接种时间的延长而增加,但组间相比无显著差异(P>0.05)。ELLIS A法和Wes tern免疫印迹检测结果显示,各处理组较未处理组均能抑制炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达,促进IL-8表达,且EDTA+HA组的作用效果更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EDTA+HA能显著促进牙周膜成纤维细胞生长和抑制炎性细胞因子表达,可能与其增强成纤维细胞黏附力、提高其生存能力有关。

食物不耐受检测在复发性阿弗他溃疡诊治中的作用

目的探讨食物不耐受检测在复发性阿弗他溃疡诊治中的作用。方法应用食物过敏原IgG试剂盒,对30例复发性阿弗他溃疡患者的血清进行食物不耐受检测。结果 30例患者中,有26例患者存在食物不耐受现象,常出现过敏的食物为牛奶、虾、螃蟹、鸡蛋。结论食物不耐受检测对复发性阿弗他溃疡患者的诊治具有一定的实用性和指导意义,发现并限制接触过敏食物有助于治疗复发性阿弗他溃疡。

细胞外囊泡协同递送维替泊芬/TRAIL诱导口腔鳞癌细胞凋亡及增殖抑制实验研究

目的制备细胞外囊泡(EVs)共载体系,以协同递送肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)/维替泊芬(VPF)组合用于诱导口腔鳞癌细胞凋亡及增殖抑制。方法通过超速离心、过滤法分离纯化TRAIL/VPF共载EVs(MSCT-EVs/VPF)。通过BCA法检测CD63、CD9和TRAIL表达,确认EVs来源。用高效液相法检测VPF载药量,绘制体外释放曲线。使用MTT法检测细胞毒性和半数抑制浓度(IC50)。通过流式细胞仪检测细胞凋亡,最后Western blot被用于检测MSCT-EVs/VPF对SCC25细胞中凋亡相关蛋白和YAP表达的影响。结果MSCT-EVs/VPF颗粒圆整,分散性良好,直径约为100 nm;纳米体系载药量为(15.43±0.44)%,在10 h内释放57.8%的VPF,45 h释放约82.5%;MSCT-EVs和VPF均可抑制SCC25肿瘤细胞生长,呈剂量依赖性,MSCT-EVs和VPF的质量比(wt%)在10∶1~5∶1的比例范围内显示出最佳抑制效果;在100∶5~100∶15(wt%)比例下,MSCT-EVs/VPF的半抑制浓度(IC50)低于游离MSCT-EVs+游离VPF组(P<0.05),显示出更高效的抑制作用。MSCT-EVs/VPF对鳞癌细胞的高效抑制作用部分源自对Caspase-3、Bax、Bcl-2、mTOR、p-mTOR和YAP的调控。结论通过EVs递送固定比例的TRAIL/VPF,对口腔鳞癌细胞展现出高效抑制作用,为多药耐药肿瘤的治疗提供了新思路。

LncRNA-NKILA靶向miR-3195对口腔癌细胞活性及血管生成的作用机制

目的:探讨LncRNA-NKILA靶向miR-3195对口腔癌细胞活性及血管生成的作用机制。方法:通过qRT-PCR方法检测LncRNA-NKILA在人正常口腔上皮细胞及人口腔鳞癌细胞中表达水平。按照随机数字表法分为空质粒组(SCC25细胞株+pcDNA)、NEAT1组(SCC25细胞株+pcDNA-NKILA)、NC-组(SCC25细胞株+miR-3195-NC-mimics);miR-3195组(SCC25细胞株+miR-3195-mimics)、联合1组(SCC25细胞株+pcDNA-NKILA+miR-3195-NC-mimics)及联合2组(SCC25细胞株+pcDNA-NKILA+miR-3195-mimics)。采用CCK-8方法检测细胞增殖;流式细胞仪检测凋亡率,免疫印迹检测细胞VEGF及VEGF-C蛋白;荧光素酶方法检测LncRNA-NKILA对miR-3195调控作用。结果:SCC25细胞株转染pcDNA-NKILA使细胞增殖降低,凋亡增加,VEGF及VEGF-C蛋白降低,与空质粒组比较存在差异(P<0.05);与NC组相比,miR-3195组SCC25细胞株增殖降低,凋亡率升高,VEGF及VEGF-C蛋白降低(P<0.05),与联合1组相比,联合2组SCC25细胞株增殖降低,凋亡率升高,VEGF及VEGF-C蛋白降低(P<0.05);荧光素酶实验显示miR-3195是LncRNA-NKILA靶基因。结论:LncRNA-NKILA可通过调控miR-3195表达抑制口腔癌细胞增殖,促进其凋亡,研究机制可能抑制VEGF表达相关。

人口腔鳞癌差异表达谱的全基因组分析

目的口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)及正常组织的差异表达谱进行全基因组分析。方法采用全基因组表达谱芯片检测3例OSCC及正常组织的转录本,确定OSCC的lncRNA和mRNA差异表达谱。通过构建差异表达基因的lncRNA-mRNA共表达网络,挖掘网络节点基因。利用GO及KEGG富集分析,探究差异表达lncRNA潜在的生物学功能。通过cis和trans调控角度,预测差异表达lncRNA潜在的靶基因。选取部分差异表达lncRNA,进行qRT-PCR验证。结果芯片筛选出差异表达lncRNA 2294条和mRNA 1938条;lncRNA TMPRSS11BNL、lnc-WRN-10∶1是共表达网络的节点基因;GO分析显示,差异表达mRNA富集度的前三GO term是interleukin-1 binding、response to interferon-alpha和establishment of epithelial cell apical/basal polarity;KEGG分析显示,差异表达mRNA主要富集在38种生物学途径,包括许多癌症相关通路;靶基因预测表明,1470条差异表达lncRNA具有cis或trans调控靶基因的潜能;qRT-PCR验证与芯片结果相一致。结论lncRNA在OSCC与正常组织中具有差异表达,节点lncRNA是OSCC发病的潜在关键基因。

老年患者阻生第四磨牙1例

多生牙是指正常牙数之外多生长的牙齿,据文献记载,此病在现代社会人类的患病率很低,约为3%左右^([1,2])。多生牙常见于恒牙列,但乳牙列偶有发生^([3])。第四磨牙,即远端磨牙,是指位于第三磨牙远中的多生牙,临床上极其罕见^([4])。第四磨牙可萌出或阻生于颌骨内,多数是在口腔放射检查时被发现,如有阻生现象,经常导致邻牙位置发生改变.