Northern杂交检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在不同肿瘤细胞中的表达水平

目的:从mRNA水平检测五种不同肿瘤细胞株中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的表达情况。方法:采用Northern杂交方法。结果:Northern杂交结果显示了两条区带,并且pp-GalNAc-T2在不同肿瘤细胞中存在表达差异。结论:pp-GalNAc-T2基因在不同细胞存在差异表达并可能存在着剪切现象。

人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及鉴定

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌细胞株SGC7901,运用RT-PCR方法检测筛选得到其中能高效引起ppGal-NAc-T2基因表达沉默的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA O ligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;构建ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体,酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞并经G418筛选得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,RT-PCR方法检测该转染细胞株ppGalNAc-T2表达水平。结果:采用RNA i技术,将高表达ppGalNAc-T2的SGC7901细胞的T2表达水平明显降低。结论:成功构建稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能奠定了基础。

人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

平面流铸法制备非晶带材过程中气流边界层影响熔潭行为的数值模拟研究

基于连续性方程、动量方程、能量方程和VOF模型建立了平面流铸法制备非晶带材过程中的流动、传热和凝固模型,研究了非晶熔潭周围的气流边界层对非晶熔体流动、热量传递和凝固行为的影响。结果表明：气流边界层在熔潭形成过程中的不同时刻均会对熔潭行为产生影响。在距离辊面0.1 mm区域,气流冲击熔潭上弯月面的非晶熔体,并在下弯月面的熔潭侧部形成漩涡,影响非晶带材边部的等温线分布,降低非晶带材的边部质量。

SD近交系大鼠经电子直线加速器照射后局部与全身自由基的变化

目的 探讨直线加速器放射损伤后自由基的改变情况。方法 采用直线加速器照射制作动物模型 ,同时观察其血清及局部组织中NOS、MDA、SOD、GSH -PX含量的改变。结果 电子直线加速器照射后MDA、NOS在一定剂量范围内上升 ;SOD、GSH -PX则在一定剂量范围内下降。结论 电子直线加速器照射后能产生自由基 ,并引起自由基清除酶系活性下降 ,但局部变化明显小于全身变化 ,这些改变是否可能为引起胶原损伤的原因 ,有待进一步研究。

生物化学小班化教学与创新型医学人才培养

在医学生物化学的教学中,探索实施小班化教学模式,通过多种教学方式的运用,激发学生的自主学习热情;以培养学生团队协作和创新能力为导向,激发创新思维,以科研促教学;搭建开放性实验平台,优化评价体系,推动转化式学习,以培养高素质的研究型临床医学人才。

高校研究型教学和创新人才培养刍议

本文以提高本科生的创新精神和独立科研能力为目的,以提升教师素质为宗旨,从进一步推进高校教学改革的角度,结合教学活动的各个环节,进行科研创新融入大学课堂的深入探索和总结.

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(Polypeptide:N-Acetylgalactosaminyltransferases,pp-GalNAc-T2,E.C.2.4.1.41)的mRNA表达谱研究

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2是O-糖链合成第一步的糖基转移酶,而O-糖基化与血管内皮细胞的功能密切相关。随着近年来人类基因组计划的迅速发展,人们对糖基转移酶的功能也开始有了新的认识。本文采用RT—PCR法观察了六种不同组织中PP-CallNAC-T2的表达水平,发现PP—GalNAc—T2在胃肠道粘膜等呈高表达,在脑组织中也有一定的表达,提示它在不同组织中的分布与组织功能存在相关性,值得进一步研究。

不同浸入式水口250 mm×1800 mm板坯连铸过程模拟

通过水模型物理模拟和数值模拟的方法研究某钢厂3种不同水口在250 mm×1 800 mm板坯连铸过程中对钢液流场、弯月面和温度场的影响。结果表明:1#水口弯月面钢液不够活跃,不利于液渣上浮;2#水口存在结晶器上部温度低,结晶器凝固坯壳薄的问题;3#水口具有能促进液渣层分布均匀,提高结晶器上部温度的优点。250 mm×1 800 mm板坯连铸过程中,3#水口使用效果良好。

转录因子Ets-1与β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因启动子结合活性分析(英文)

β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-2,-8(β3GnT-2,β3GnT-8)共同参与多聚N-乙酰氨基乳糖([Galβ1→4GlcNAcβ1→3]n)的合成,从而使得细胞表面的相应糖链结构延长进而影响细胞的恶性转化.已有研究表明,在全反式维甲酸诱导人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8的表达上调,但其分子机制不明.本文旨在探讨ATRA诱导HL-60分化过程中,转录因子Ets-1对β3GnT-2,-8表达调控的分子机制.采用10-6mol/L ATRA诱导人白血病细胞株HL-60向粒系分化,RT-PCR检测到细胞中Ets-1的表达明显增加;进一步采用染色质免疫沉淀(ChIP)结合电泳迁移率变动实验(EMSA)检测证实,有活化的Ets-1结合至β3GnT-2/-8基因调控区.以上结果表明,转录因子Ets-1对人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8基因有表达调控作用.

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2在不同肿瘤组织中mRNA的表达差异

目的 :观察三种不同肿瘤组织中ppGalNAc T2的表达差异 ;方法 :本文采用RT PCR方法从mRNA水平上研究其表达 ,同时在同一反应管中进行内对照 β 微球蛋白的扩增以进行半定量分析 ;结果 :ppGalNAc T2在不同肿瘤组织中 ,其在肿瘤部分、癌旁部分与正常部分的表达水平不具有一致性 ;结论 :ppGalNAc T2具有组织特异性 ;不同肿瘤组织的糖基转移酶作为肿瘤标志基因有待进一步的研究。

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在SGC7901细胞中同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊(英文)

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)在高尔基体中催化粘蛋白型O-糖基化的第一步.首先进行了人ppGalNAcT2多克隆抗体的制备和鉴定,进一步通过对分离的亚细胞结构进行蛋白质印迹分析,免疫细胞化学后共聚焦显微镜观察此抗体和两个高尔基体标记GS28(顺面高尔基体的分子标志)和TGN38(反面高尔基体的分子标志)来研究ppGalNAcT2在SGC7901细胞株中的亚细胞定位.结果表明:约有60%的ppGalNAcT2信号和GS28共定位,大约36%的ppGalNAcT2信号和TGN38共定位.约有34%的TGN38和ppGalNAcT2信号重叠,而约38%的反面高尔基体标志和ppGalNAcT2重叠.结论是:在SGC7901中,ppGalNAcT2同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊中,实验证实了在高尔基体中进行粘蛋白型O-糖基化的起始反应.

γ射线对白血病细胞株K562中MMP-2表达的影响及牛磺酸的防护作用

目的 探讨γ射线对白血病细胞中MMP - 2表达的影响 ,以及从细胞水平初步探讨牛磺酸对肿瘤细胞受辐照后MMP - 2表达的抑制作用。方法 6 0 Coγ射线 1 5Gy照射白血病细胞K562作为阳性对照组 ,不照射的作为阴性对照组 (1 -不加药 ,2 -加药 2 0 0mg/L) ,另设三组实验组 (照射 ,加药量分别为 50mg/L、1 0 0mg/L、2 0 0mg/L) ,照后 1 2h收集 ,细胞经处理后采用Western blotting技术分析各组细胞MMP - 2的表达水平。结果 1 5Gy照射剂量阳性对照组细胞MMP - 2表达量明显增加 ,阴性对照组 1中MMP - 2表达量较少 ,实验组细胞MMP - 2表达量随剂量增加而依次减少 ,其中 2 0 0mg/L组与阴性对照组 1细胞MMP - 2表达量基本一致。结论 1 5Gy6 0 Coγ射线照射促进白血病细胞K562中MMP - 2表达 ,电离辐射可引起肿瘤细胞的进一步侵袭和转移 ;加不同剂量牛磺酸后对MMP - 2表达有抑制作用 ,且与剂量呈相关性 。

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2真核表达载体的构建及在SHG-44细胞的表达

目的 :为探讨O 糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用和功能 ,构建pcDNA3/ppGalNAc T2真核表达质粒并转染人神经胶质瘤细胞SHG 4 4。方法 :采用PCR技术从pDONR2 0 1 T2得到ppGalNAc T2全长编码序列 ,亚克隆至真核表达载体pcDNA 3 1,脂质体介导基因转染人神经胶质瘤细胞SHG 4 4细胞 ,采用RT PCR法检测重组质粒的表达。结果 :酶切图谱分析和基因测序证实pcDNA3 1 T2真核表达质粒构建成功。RT PCR显示转染细胞有T2的表达。结论 :成功构建了真核表达载体pcDNA3 1 T2 ,并成功转染入SHG 4 4细胞 ,为进一步研究ppGalNAcT2的功能奠定了基础。

PBL联合CBL教学模式在整合课程基础医学模块教学中的应用探索

整合课程模块教学中,基础医学模块作为基础医学和临床医学衔接的桥梁,具有非常重要的学科地位,如何使医学生打好医学基础,并且更好更早地衔接临床学科,PBL结合CBL模式的教学具有重要作用,同时也面临严峻的挑战。合理的课程构建,优化的案例选择及强大的导师队伍都至关重要。

电子射线局部辐照大鼠Ⅰ/Ⅲ型胶原表达及基质金属蛋白酶改变的研究

目的探讨电子射线(模拟β射线)局部辐照大鼠致放射损伤后胶原表达及相关基质金属蛋白酶(MMPs)变化的情况。方法采用直线加速器局部照射制作SD大鼠的辐射损伤模型,观察Ⅰ/Ⅲ型胶原表达及MMP1、MMP2、MMP9表达的变化情况。结果β射线照射引起的皮肤损伤可以引起胶原含量和分型的改变,MMP-1有不同程度的提高,MMP2与MMP9的表达随辐射剂量的增加,由强变弱再上升变强。结论β射线照射皮肤损伤引起的创面难愈合可能与胶原含量和结构的改变相关,其又与胶原的降解酶MMP1活性增强有关；MMP2与MMP9参加基底膜的溶解、血管形成和坏死组织的清除,有助于创面的重建,促进创面的愈合。

γ射线对白血病细胞K562 ppGalNAcT2 mRNA表达的影响及中药多糖的防护作用

目的 探讨γ射线对白血病细胞株K562中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2,E.C2.4.1.41)基因mR-NA表达的影响,并探讨中药多糖对此种影响的防护作用。方法 以不同剂量的^(60)COγ射线照射K562细胞,并设加中药多糖实验组,观察不同剂量(5Gy、10Gy、15Gy)γ射线对K562细胞ppGalNAcT2 mRNA表达影响,及加入不同剂量中药(50mg/L,100mg/L,200mg/L)后对10Gy照射K562细胞组中T2 mRNA表达的防护作用。以RT-PCR法检测ppGalNAcT2 mRNA的表达差异变化。结果 γ射线照射K562细胞后ppGalNAcT2 mRNA表达明显减少,且与剂量呈负相关,而中药多糖则可对抗此种作用,使加中药多糖组细胞在照射后ppGalNAcT2 mRNA表达水平维持在正常细胞水平。结论 5～15Gyγ射线照射抑制白血病细胞ppGal-NAcT2 mPNA表达,可能与肿瘤细胞受照后分化抑制有关,而中药多糖明显对抗此种抑制作用。

高能电子线皮肤辐射损伤大鼠自由基的变化

为探讨电子射线放射损伤大鼠局部与全身自由基的改变情况与机理,采用直线加速器局部皮肤照射制作SD大鼠的放射损伤模型,观察全血与局部皮肤MDA、NOS、SOD、GSH-PX含量的改变。 结果表明,电子射线损伤后大鼠血清自由基含量发生明显变化,其中MDA、NOS在实验剂量范围内呈上升趋势;SOD、GSH-PX则呈下降趋势。而局部皮肤受照后以上指标虽有改变但呈不规则变化。结果提示,电子射线损伤后能产生自由基,但其作用效应主要在全身,对受照局部皮肤组织自由基改变的作用不明显。

重组人骨形成蛋白-2在诱导C3H10T1/2干细胞成骨中对MMP-9 mRNA表达的影响

目的 :测定MMP 9mRNA在C3H10T1/ 2clone 8(10T1/ 2 )中的表达 ,探讨rhBMP 2诱导 10T1/ 2产生成骨细胞时对MMP 9mRNA表达的影响。方法 :取 10T1/ 2培养至细胞完全贴壁 ,加入rhBMP 2培养 2 8天 ,同时利用Real timePCR检测MMP 9在 10T1/ 2中不同时间段的表达。结果 :10T1/ 2经rhBMP 2的诱导 14天出现钙化点 ,MMP 9mRNA也随着rhBMP 2的加入表达降低 ,而对照组几乎不变化。结论 :rhBMP 2在诱导 10T1/ 2产生成骨细胞的同时抑制着MMP