靶点特异性抗结核分枝杆菌药物筛选模型的建立及应用

目的构建靶点特异性抗结核分枝杆菌药物筛选模型。方法通过诱变剂和诱变条件的考察,确定筛选新生霉素特异性超敏感菌株和超耐药菌株的最佳方案。利用野生株、超敏感菌株与超耐药菌株的活性差异,建立抗结核分枝杆菌药物筛选模型,并对175个化学合成拟抗结核分枝杆菌化合物进行初筛。结果通过UV-Li Cl、微波等诱变方法处理后,得到新生霉素特异性超敏感菌株和超耐药菌株,其MIC值分别为0.4和200 mg·L^(-1)。应用所构建的模型筛选获得一个阳性先导化合物CZQ-06+。结论成功构建了靶点特异性抗结核分枝杆菌药物筛选模型。

草分枝杆菌亮氨酰-tRNA合成酶的克隆与表达

采用PCR技术从草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)基因组中扩增出亮氨酰-t RNA合成酶基因leu RS,依次克隆入p MD19-T Simple克隆载体及p ET28a(+)表达载体,并在大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达。表达产物用Ni^(2+)螯合的His Trap^(TM) HP亲和色谱纯化,测定纯化所得目的蛋白的酶活力。结果显示,经PCR扩增得到2.8 kb的DNA片段,重组质粒p ET28a(+)-leu RS经酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。SDS-PAGE显示,有与目的蛋白大小相当(相对分子质量约1.10×10~5)的蛋白质表达,表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白的32.8%,纯化后的蛋白质纯度达93.8%,酶活力为13.2 u/ml。