小鼠胚胎干细胞建系及GFP标记

目的 :为组织工程提供新型种子细胞 ,建立胚胎干 (ES)细胞系。方法 :取 12 9/svj白色小鼠 4.5d的囊胚 ,分离囊胚的内细胞团 (ICM )细胞 ;在条件培养液及小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)作铺层下 ,细胞扩增传代 ,碱性磷酸酶 (AKP)染色及oct4、ssea 1等特异性抗体鉴定细胞 ,并将细胞注射至裸鼠皮下观察细胞在动物体内的生长变化。结果 :细胞体外培养呈“巢状”生长 ,可以持续传代 ;AKP染色及oct4、ssea 1等特异性抗体免疫反应均阳性 ;裸鼠皮下注射的细胞发育生长为包含各胚层细胞成分的畸胎瘤。在此基础上以基因转染方法将细胞标记绿色荧光蛋白 (GFP)。结论 :从小鼠ICM所分离的细胞为小鼠胚胎干细胞 ,且标记GFP的ES细胞在传代及形成胚体的过程中均能显示GFP 。