间充质干细胞注射液关节腔及静脉单次注射给药急性毒性及局部刺激性

目的 选取兔和大鼠,通过关节腔及静脉单次注射评价间充质干细胞(MSC)注射液的急性毒性及刺激性,以期为其临床安全用药提供参考依据。方法 (1)急性毒性试验:SD大鼠,关节腔注射和静脉注射MSC注射液(给药剂量分别为5.0×107和1.0×108kg^(-1)),单次给药,同时设正常对照组,每组10只,雌雄各半,给药后观察30 d。试验期间每日进行1次临床观察,给药前(d 0)及给药后d 1(给药当天),3,7,14,21和28测体重,恢复期结束次日(d 31)解剖,对体表及皮下、头部、颈部、胸腔及胸腔脏器、盆腔及盆腔脏器、腹腔及腹腔脏器及给药部位等采用肉眼逐项进行详细大体观察。(2)刺激性试验:4只日本大耳白家兔,雌雄各半,采用同体左右侧对比法分为正常对照侧和给药侧,用关节腔注射及静脉注射(给药剂量分别为4.0×106和6.0×106kg^(-1))单次给药,给药后观察14 d。试验期间每日观察全身及注射部位,d 3和d 14进行解剖检查及组织病理学检查。结果 (1)急性毒性:与正常对照组相比,静脉注射给药组SD大鼠临床观察和体重均未见明显异常;关节腔注射给药组出现给药侧后肢蜷缩,呈跛行,并给药部位逐渐出现膝关节肿胀,恢复期后可陆续恢复;关节腔注射给药组雄性大鼠给药后d 1和d 3体重显著降低(P<0.05),其余各检查时间点平均体重无明显差异,雌性大鼠体重无差异。试验期间无动物死亡;静脉注射及关节腔注射组动物解剖检查均无异常。(2)刺激性试验:与正常对照侧比较,关节腔注射给药家兔膝关节周围组织可见明显的充血、红肿,经恢复期可陆续恢复;3 d解剖检查可见关节腔内有淡粉色浓稠积液溢出,组织病理学检查可见滑膜中度病变,对局部组织有一定的刺激性;14 d,病变程度明显减轻,但未完全恢复正常。静脉注射给药组家兔临床观察及组织病理学检查均未见明显异常。结论 大鼠单次关节腔及静脉注射给予MSC注射液未出现明显毒性。兔单次关节腔注射给予MSC注射液对注射部位关节腔局部组织有一定刺激性,停药后有明显的恢复趋势。兔单次静脉注射给予MSC注射液对注射部位静脉血管无刺激性。

多柔比星、二甲双胍对干细胞心肌样分化的代谢组分研究

目的结合代谢组学技术和胚胎干细胞心肌定向诱导分化方法,对多柔比星和二甲双胍造成代谢组分的变化进行研究。方法以小鼠胚胎干细胞体外心肌定向诱导分化为模型,分化培养液中添加不同剂量的多柔比星(3.40、0.17μmol·L^(-1))以及二甲双胍(905.7μmol·L^(-1))。通过对诱导形成拟胚体的一般观察,统计自主节律跳动、拟胚体的数量、频率等;免疫细胞化学法检测心肌特异性蛋白—心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达;应用代谢组学技术初步筛选差异代谢图谱,以多柔比星和二甲双胍共同影响的代谢组分为目标,尝试寻找心脏毒性敏感标志物。结果一般观察和免疫细胞化学结果显示,多柔比星高浓度明显抑制向心肌细胞分化,cTnT表达明显增加,低浓度组拟胚体自主节律明显增快,cTnT表达变化不明显;二甲双胍未见明显变化。代谢组学结果显示,多柔比星和二甲双胍可致细胞内同型半胱氨酸(Hcy)、铁卟啉(FeTMPyP)、叶酸、半胱氨酸(Cys)、cAMP等组分明显降低。结论氧化应激在心脏分化发育过程中起重要作用,Hcy、FeTMPyP、Cys等具有成为心脏毒性敏感标志物的潜力。

肠炎宁颗粒对幼龄小鼠的抗炎止泻作用及体外抗菌作用研究

目的研究肠炎宁颗粒作用于ICR幼龄小鼠的止泻抗炎药效及体外抑菌作用,为其临床儿童用药提供参考。方法以ICR幼龄小鼠为考察对象,ig给予高、中、低剂量(2.500、1.250和0.625 g/kg)肠炎宁颗粒及蒙脱石散(阳性药,4.2 g/kg),连续给药3 d后,采用番泻叶浸出物和蓖麻油致泻模型、肠推进实验、冰醋酸致腹腔毛细血管通透性增加模型考察肠炎宁颗粒的止泻、抗炎作用;体外培养表皮葡萄球菌和大肠埃希菌,加入571.00、285.50、142.75、71.38、35.69、17.84、8.92、4.46、2.23和1.12 mg/m L的肠炎宁颗粒,观察其抑菌作用。结果与模型组比较,0.625、1.250和2.500 g/kg的肠炎宁颗粒可以显著减少番泻叶浸出物、蓖麻油作用0~5 h内的腹泻样便数(P<0.05、0.001);与对照组比较,2.5 g/kg的肠炎宁颗粒可以显著降低肠推进系数(P<0.05);0.625、1.250和2.500 g/kg的肠炎宁颗粒可以显著减少冰醋酸所致的幼鼠腹腔毛细血管通透性增加(P<0.05、0.01)。8.92 mg/m L的肠炎宁颗粒即可在体外抑制表皮葡萄球菌和大肠埃希菌的生长,为最低抑菌浓度。结论肠炎宁颗粒具有止泻、抑制肠胃推进及对抗急性渗出性炎症的作用;体外可以抑制表皮葡萄球菌和大肠埃希菌的生长。

六经头痛片治疗大鼠偏头痛的作用及机制研究

目的探讨六经头痛片治疗偏头痛的作用及可能的机制。方法通过sc硝酸甘油复制大鼠偏头痛模型,观察大鼠搔头次数和搔头反应潜伏期;采用酶联免疫实验(ELISA)检测脑组织中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)水平及血清中β-内啡肽(β-EP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素(ET)的量,采用生化法测定血清中一氧化氮(NO)量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果模型组大鼠在sc硝酸甘油后1~3 min即出现搔头,且次数频繁。与模型组比较,六经头痛片1.4、0.7 g/kg组可显著减少偏头痛模型大鼠的搔头次数(P<0.001),并呈剂量相关性,能够明显延长大鼠搔头反应的潜伏期(P<0.01);六经头痛片1.4、0.7 g/kg组可显著升高模型大鼠血清β-EP、ET及脑内DA的量,显著降低血清CGRP的量和NOS活性,六经头痛片1.4 g/kg组可明显降低血清NO的量,对脑内5-HT、NE的量基本无影响。结论六经头痛片有显著的治疗偏头痛作用,可以升高血清β-EP、ET、DA的量,降低CGRP、NO的量及NOS活性,其作用机制与收缩血管及中枢镇痛有关。

疏风解毒胶囊口服给药14 d对幼鼠的毒性作用研究

目的观察10日龄健康SD大鼠重复ig给予疏风解毒胶囊(SFJD)后所产生的毒性反应,为SFJD的婴幼儿临床应用提供参考。方法取10日龄健康SD大鼠30只,分为SFJD组(4 g/kg)和对照组,每天给药1次,连续14 d。每天观察动物的死亡率及一般体征,每周2次监测动物体质量变化,观察门齿萌出、张耳、睁眼和腹部出毛的发生时间,考察幼鼠的自主活动及学习记忆能力;在给药结束时进行血液学、血清生化检测及血清睾酮、雌二醇、胰岛素样生长因子含量测定,分析T、B淋巴细胞亚群的变化;并进行系统尸检、脏器质量及系数检查,测定幼鼠麻醉状态下的体长和尾长。结果给药后幼鼠出现稀便及药物颜色相关的橙色尿液;体质量增长前期减缓,后期改善;尿密度略增加;脾脏质量及肝脏、脾脏、肾脏的脏体系数与脏脑系数增加;有2只幼鼠红细胞计数(RBC)和网织红细胞数(Ret)较对照组显著降低。结论 4 g/kg的SFJD ig给药后,幼鼠耐受性较好,临床大剂量长期应用时需关注可能出现的稀便及RBC、Ret降低等情况。

六经头痛片对离体大鼠主动脉收缩及三叉神经降钙素基因相关肽表达的影响

目的观察六经头痛片对大鼠离体血管平滑肌收缩活动及三叉神经降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。方法制备大鼠离体主动脉血管环,采用麦氏浴槽法观察六经头痛片对血管平滑肌收缩活动的影响;培养三叉神经节组织,观察六经头痛片对三叉神经节CGRP表达的影响。结果六经头痛片可以减弱KCl及去甲肾上腺素(NE)引起的胸主动脉环收缩反应,对KCl收缩的半数抑制浓度(IC_(50))为0.97 mg/m L,对NE收缩的IC_(50)为0.55 mg/m L。而且,六经头痛片在1.4、0.14mg/m L时可明显减少离体培养24、48 h后三叉神经节CGRP阳性细胞的数量(P<0.05)。结论六经头痛片既可以对抗血管平滑肌的收缩,又可以降低三叉神经具有扩张血管作用的CGRP的量,说明六经头痛片具有稳定血管舒缩的作用。

茯神散加减方对小鼠学习记忆的影响及机制初探

目的观察茯神散加减方对正常小鼠及学习记忆障碍模型小鼠的影响，探索其可能机制，为治疗轻度认知障碍提供实验依据。方法将健康成熟的昆明种小鼠随机分成正常组、模型组、吡拉西坦组（0．6g／kg）和茯神散加减方低、中、高剂量（5．6、11．2、22．4g／kg）组。从行为学方面应用自主活动仪、Morris水迷宫、避暗法、跳台法，考察茯神散加减方对小鼠自主活动及化学物质造成的记忆获得、记忆巩固和记忆再现障碍的作用，用比色法测定小鼠皮层乙酰胆碱酯酶（AchE）、过氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果与正常组比较，茯神散加减方低、中剂量组可明显增加小鼠进入新环境0～15min内的探索行为（P〈0．01）而对之后15～30min内的活动没有显著影响，并可以提高正常小鼠在水迷宫测试中的学习记忆成绩。与模型组比较，茯神散加减方各剂量组能明显改善记忆获得障碍小鼠的学习记忆能力（P〈0．01），中剂量组可以显著改善记忆再现障碍小鼠的学习记忆表现（P〈0．01），显著降低小鼠脑皮层AchE活性，增加SOD活性，减少MDA的生成（P〈0．01）。结论茯神散加减方可以改善由东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇造成的小鼠记忆获得、巩固、再现障碍，并能增加小鼠对新环境的探索行为，对其自主活动无明显影响。其改善记忆障碍的作用机制可能与降低脑组织AchE活性及MDA含量、增加SOD活性有关。