STI571及As_2O_3诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的 :探讨比较STI5 71和As2 O3 诱导K5 6 2细胞凋亡及抑制其生长的可能机制 ,为进一步揭示慢性粒细胞白血病 (CML)的发病机制及STI5 71和As2 O3 的临床应用提供理论依据。方法 :采用细胞培养、台盼蓝染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、Westernblot等方法研究STI5 71和As2 O3 分别对K5 6 2细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用 ,检测两种药物在诱导K5 6 2细胞凋亡的过程中某些凋亡相关蛋白的表达。结果 :STI5 71和As2 O3 均可抑制K5 6 2细胞的增殖、诱导其凋亡。两种药物均可下调Bcl-XL的表达 ,并裂解caspase - 3。As2 O3 作用浓度为 2 μmol/L时其下调Bcl-XL的作用与 1μmol/L时没有明显的差别 ,但是其裂解caspase - 3的作用较后者更加明显。 结论 :STI5 71作为凋亡诱导剂 ,可通过抑制Bcl-XL的表达从而激活caspase - 3,诱导K5 6 2细胞凋亡 ;As2 O3 诱导K5 6 2细胞凋亡过程中伴有caspase - 3的激活 。

培哚普利对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨培哚普利 (perindopril)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :雄性Wistar大鼠 2 8只 ,随机分为缺血组 (对照组 )、再灌注组与perindopril组 ,观察心脏活动变化 ,测定动脉血及心肌组织中肾素活性与血管紧张素 Ⅱ含量 ,心肌脂质过氧化代谢指标。结果 :①与对照组 (49% )相比 ,再灌注组室性心率失常发生率 (75 % )较高 (P <0 .0 1 ) ,动脉血及心肌组织中肾素活性和血管紧张素Ⅱ含量均升高 ,心肌丙二醛含量升高 ,心肌组织中谷胱苷肽过氧化物酶活性下降 ;②与再灌组相比 ,perindopril组室性心率失常发生率 (33 % )明显降低 (P <0 .0 1 ) ;动脉血及心肌组织中肾素活性和血管紧张素II含量均下降 ,而以动脉血肾素活性降低为主 (P <0 .0 1 ) ;心肌丙二醛含量降低 ,心肌组织中谷胱苷肽过氧化物酶活性明显升高 (P <0 .0 1 )。结论 :心肌缺血再灌注损伤可能与肾素活性增高、血管紧张素Ⅱ含量增高和脂质过氧化有关 。

PBCA纳米粒介导的hTERT反义寡核苷酸对肺癌A549细胞周期和凋亡的影响

目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(PBCA-NP s)作为端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(A-SODN)载体,转染肺癌A 549细胞,观察其对该细胞周期和凋亡的影响。方法PBCA-NP s携带hTERT A SODN转染A 549细胞后,绘制细胞生长曲线表达细胞生长状态的变化;流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果A SODN转染后A 549细胞增殖减慢;FCM检测结果显示:A SODN转染后细胞周期变化明显,细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率明显增加。结论hTERT A SODN能有效改变A 549细胞的细胞周期,诱导细胞凋亡的发生。

科索亚对心力衰竭大鼠骨骼肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:探讨科索亚对心力衰竭大鼠骨骼肌细胞的凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:将38只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(A组,n=8),心力衰竭组(B组,n=10),心力衰竭科索亚治疗1组(C组,n=10),心力衰竭科索亚治疗2组(D组,n=10)。B、C、D组分别腹腔一次性注射野百合碱30mg/kg。2周后,C组和D组分别用科索亚10mg·kg-1·d-1和30mg·kg-1·d-1灌胃2周,A组和B组则以生理盐水灌胃2周。2周后处死动物,以腓肠肌质量和体质量比作为骨骼肌萎缩的指标。TUNEL法检测腓肠肌细胞凋亡。免疫组织化学和免疫印迹法检测腓肠肌Bcl2、Bax的表达,并计算Bax/Bcl2的比值。结果:与A组相比,B组腓肠肌凋亡指数升高(P<0.01),Bcl2表达减少(P<0.01),Bax表达升高(P<0.05),Bax/Bcl2比值>1。与B组相比,C组和D组腓肠肌细胞凋亡指数降低(P<0.01);且C组和D组Bcl2表达升高(P<0.01),Bax表达减少(P<0.05),Bax/Bcl2比值均<1。结论:细胞凋亡可能是心力衰竭时骨骼肌萎缩的原因之一;科索亚可能通过改变Bax/Bcl2比值减轻心力衰竭时骨骼肌的凋亡和萎缩。

酪氨酸激酶抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨酪氨酸激酶(TPK)抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响。方法:取对数生长期K562细胞,分4组培养。Ⅰ组不加任何药物,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别加0.5μmol/L、1μmol/L和2μmol/L的STI571,继续培养5d。每d行细胞计数,台盼蓝拒染法检测细胞活力,连测5d。培养36h时,取细胞,双缩脲法检测细胞蛋白含量,采取蛋白免疫印迹法进行Procaspase-3及Bcl-xL检测。结果:Ⅱ组、Ⅲ组细胞数低于同一时间段Ⅰ组细胞数(P<0.05),但高于Ⅳ组细胞数(P<0.05)。与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组Procaspase-3和Bcl-xL蛋白表达降低(P<0.01);与Ⅱ组和Ⅲ组比,Ⅳ组2者表达量更低(P<0.01)。结论:STI571通过下调Bcl-xL,激活Procaspase-3,诱导K562细胞凋亡,从而抑制K562细胞的生长。

氯沙坦通过减少细胞凋亡减轻心肌肥大大鼠的骨骼肌萎缩

目的探讨细胞凋亡在心肌肥大大鼠骨骼肌萎缩中的作用及氯沙坦对心肌肥大大鼠骨骼肌萎缩的影响.方法雄性SD大鼠42只随机分成3组(n=14)Ⅰ组(对照组),Ⅱ组(心肌肥大组),Ⅲ组(心肌肥大氯沙坦治疗组).Ⅱ组和Ⅲ组分别一次性腹腔注射野百合碱(30mg/kg)以诱导心肌肥大.2wk后,Ⅲ组大鼠用氯沙坦[10mg/(kg·d)]灌胃.再过2wk后全部处死动物,以腓肠肌(GAS)的质量和体质量比作为骨骼肌萎缩的指标.TUNEL法检测GAS细胞凋亡.免疫组化和Western Blot法检测GAS Bcl-2,Bax的表达,并把Bax/Bcl-2值作为凋亡的程度.结果与Ⅰ组比,Ⅱ组的GAS细胞凋亡率明显增加[(147.6±32.6)‰vs(4.1±1.8)‰,P<0.05],并且GAS出现了萎缩.与Ⅱ组比,Ⅲ组的GAS细胞凋亡率明显减少[(46.2±12.3)‰vs(147.6±32.6)‰,P<0.05],GAS萎缩减轻.Bcl-2的表达Ⅱ组比Ⅰ组明显减少(P<0.05),Bax的表达明显升高(P<0.05).而Ⅲ组与Ⅱ组相比Bcl-2的表达明显升高(P<0.05),Bax的表达明显减少(P<0.05).Ⅱ组GAS的Bax/Bcl-2值明显升高,而Ⅲ组Bax/Bcl-2值明显下降.结论细胞凋亡在心肌肥大大鼠骨骼肌萎缩中发挥着重要的作用,可能是骨骼肌萎缩的原因之一,氯沙坦可能通过改变Bax/Bcl-2值减轻心肌肥大大鼠骨骼肌的凋亡和萎缩.

应激反应对心肌缺血再灌注损伤的影响

探讨应激反应对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：按改良的Ｋａｎｅ方法，制备 心肌缺血再灌注损伤模型。观察结扎左冠状动脉前、后的 １、５、１０ｍｉｎ及再灌注１０ｍｉｎ内心功能指标及再灌注期 间的室速（ＶＴ）、室颤（ＶＦ）发生率及动物死亡率（Ｍ），并测定心肌丙二醛（ＭＤＡ）含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的活 性与对照组比较。结果：实验组的心功能明显的得到了改善；ＶＴ、ＶＦ及Ｍ均明显降低；心肌内ＭＤＡ含量明显减 少，而ＳＯＤ的活性则明显增加.结论：应激反应具有抗心肌缺血再灌注损伤作用，主要作用机制与其增强心肌内 源性抗氧化能力有关。

心肌肥大和心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Bax和Bcl-2的表达

目的:探讨心肌肥大和心力衰竭(心衰)大鼠心肌细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。方法:24只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(对照组)、心肌肥大组、心衰组,每组8只。心肌肥大组和心衰组均采用缩窄腹主动脉构建模型。假手术组和心肌肥大组大鼠于第4周处死,心衰组大鼠于第12周处死。分别检测各组血流动力学和左室肥大指标,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测心肌Bcl2和Bax的表达。结果:心力衰竭组与心肌肥大组比较,左室收缩末压、左室舒张末压、心室内压变化最大速率差异均有统计学意义(P<0.01或0.05)。心衰组较心肌肥大组心肌细胞凋亡增加,Bax表达增加,Bcl-2表达减少(P<0.01)。结论:心肌细胞凋亡在心脏由心肌肥大向衰竭的转变过程中起着重要的作用,并与凋亡蛋白Bax和Bcl-2表达改变有关。

氯沙坦对心力衰竭大鼠骨骼肌萎缩中细胞凋亡、抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax表达的作用

目的:观察氯沙坦对心力衰竭大鼠骨骼肌萎缩程度的影响,分析抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax在该影响中的作用。方法:实验于2003-04/2004-04在郑州大学病理生理学教研室完成。①选用清洁级健康成年SD大鼠24只,雄性。按随机抽签法将大鼠分为3组:对照组、模型组和治疗组,每组8只。通过颈部一次性皮下注射野百合碱30mg/kg建立心力衰竭模型。治疗组:造模2周后灌胃氯沙坦混悬液10mg/(kg·d),共2周;对照组和模型组(造模)以等量生理盐水灌胃2周。②计算右心室肥大程度判定指标右心室壁质量/左心室+室间隔质量、右心室壁质量/体质量。计算骨骼肌萎缩程度的判定指标腓肠肌质量/体质量。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法原位标记法计算凋亡指数。采用蛋白免疫印迹法检测腓肠肌Bcl-2和Bax蛋白的表达,并计算Bax/Bcl-2。③组间计量资料差异比较采用单因素方差分析和独立样本t检验。结果:SD大鼠24只均进入结果分析。①模型组右心室壁质量/左心室+室间隔质量和右心室壁质量/体质量明显高于对照组(t=4.64,5.63,P<0.01);模型组腓肠肌质量/体质量明显低于对照组(t=3.72,P<0.01);治疗组右心室壁质量/体质量明显低于模型组(t=2.48,P<0.05)。治疗组腓肠肌质量/体质量虽与模型组比较,差异不明显,但有增高的趋势。②模型组大鼠腓肠肌细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显高于其他2组(t=3.75～17.48,P<0.05～0.01),模型组Bcl-2蛋白表达明显低于其他2组(t=6.19,4.49,P<0.01)。结论:氯沙坦可明显提高Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达和骨骼肌细胞凋亡,从而达到减轻心力衰竭大鼠骨骼肌萎缩的趋势。

拟缺香茶菜的化学成分研究

目的研究拟缺香茶菜Rabdosia excisoides的化学成分。方法利用硅胶柱色谱法进行分离和纯化,通过谱学分析鉴定单体化合物结构。结果从拟缺香茶菜分离鉴定2个化合物,化合物Ⅰ命名为拟缺香茶菜甲素(excisoidesinA);化合物Ⅱ鉴定为齐墩果酸。结论化合物Ⅰ为首次发现的新二萜成分。

经鼻腔-蝶窦垂体手术入路的解剖学观察

目的 :寻找经鼻腔 蝶窦垂体手术确定垂体窝的解剖学依据。方法 :矢状锯开成尸头 6 0例、成人颅骨 30例和完整成人颅骨鼻腔 70例 ,观测经鼻腔 蝶窦垂体手术入路形态结构。结果 :鼻中隔后缘上端与垂体窝中部垂直相对 ,由此上端垂直向上平均 15 (11～ 2 1)mm为垂体窝。前鼻棘至鼻中隔后缘上端距离 x±s为 (76 .0± 2 .1)mm ,前鼻棘经蝶窦口至垂体窝距离 x±s为 (76 .2± 2 .3)mm。自蝶窦口向下内接近鼻中隔后缘上端扩大手术野即可安全显露并靠近垂体窝。结论

内折香茶菜素D抗肿瘤作用的研究

目的:研究内折香茶菜素D(以下简称内折素D)对动物移植性肿瘤的作用以及对机体免疫状态的影响。方法:以动物移植性肿瘤艾氏腹水癌(ECA),肉瘤S180,肝癌(HCA),Lewis肺癌为模型,以5_Fu为阳性对照组,以生理盐水为阴性对照组,观察12.5 mg/kg和25 mg/kg内折素D的抗肿瘤作用,并采用小鼠溶血素实验和小鼠迟发性变态反应实验观察内折素D对机体免疫状态的影响。结果:内折素D与阴性对照组相比在体外对ECA肿瘤细胞有较强的杀伤力,在体内对S180实体型和腹水型肿瘤,HCA实体型和腹水型肿瘤以及Lewis肺癌实体型肿瘤均有较强的抑制作用,与阳性对照组相比,对机体免疫状态无明显影响。结论:内折素D具有较强的抗肿瘤作用,且对机体免疫状态无明显影响。

PBCA纳米粒介导的hTERT反义寡核苷酸对A549细胞的抑制作用

目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(polybutylcyanoacrylate nanopartic les,PBCA-NPs,NPs)作为端粒酶逆转录酶(hum an telom erase reverse transcriptase,hTERT)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynuc leotide,ASODN)载体转染A549细胞,研究其对A549细胞的影响。方法采用MTT法检测NPs的细胞毒性和细胞增殖情况;流式细胞仪(flowcytom etry,FCM)检测5-′FITC标记的ASODN(FASODN)转染细胞后胞内荧光强度和ASODN各组(ASODN1-NP,ASODN2-NP和ASODN3-NP)转染细胞后细胞周期的变化;倒置显微镜观察A549细胞生长状态;免疫细胞化学法检测hTERT蛋白表达。结果NPs质量浓度超过2.5 g.L-1时细胞毒性较大。转染24 h后,FASODN-NP组较FASODN组胞内荧光明显增强(P<0.01)。与空白对照组和正义寡核苷酸(sense oligodeoxynuc leotide-nanopartic le,SODN-NP)组相比,ASODN-NP处理后A549细胞形态改变,细胞增殖减慢;各组细胞生长抑制率随时间延长而增高,72 h时ASODN1-NP,ASODN2-NP,ASODN3-NP各组最高抑制率分别可达62.4%,44.6%和36.4%;细胞周期改变,细胞被阻滞于G1期,S期细胞明显减少(P<0.01);且hTERT蛋白表达明显减少。结论NPs介导的hTERT ASODN能有效抑制A549细胞增殖、改变细胞周期及降低hTERT蛋白表达,对该细胞生长有明显抑制作用。

小檗胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗胺(BBM)对K562细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法:K562细胞分为5组,前4组为实验组,分别加入终浓度为0.8、8.0、40.0、80.0 mg/L的BBM,对照组加入等量RPMI 1640,分别作用不同时间后,采用MTT法检测BBM对K562细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测各组Caspase-3蛋白和Survivin蛋白的表达。结果:BBM能呈时间剂量依赖性地抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡;免疫细胞化学结果显示BBM作用24 h后K562细胞Caspase-3蛋白表达升高,Survivin蛋白表达降低(P均<0.05)。结论:BBM能抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与Caspase-3蛋白的表达增高及Survivin蛋白的表达降低有关。

脑性瘫痪高患病率胎尸脑血管临床解剖学特征

目的:观察6～7月龄早产儿脑血管的解剖特征,探讨早产儿脑性瘫痪发病率高的形态学基础。方法:解剖观测6月龄和7月龄死亡1h胎尸脑血管各60例。均剪除颅盖和部分脑膜用水冲去脑浆,保留相应的动脉和静脉结构,用手术显微镜观测之。结果:胎尸6～7月龄脑血管,按血管吻合网的部位,脑动脉可分为大脑皮质动脉网;间脑、基底核动脉网和脑干、小脑动脉网。大脑深部髓质的动脉细小稀少又处于动脉网终支交界处。结论:6～7月龄胎儿大脑深部髓质供血较差,易受缺氧伤害。

心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的变化及氯沙坦的影响

目的探讨慢性压力负荷性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡、凋亡蛋白Bcl-2、Bax的变化及氯沙坦对心肌细胞的影响。方法缩窄鼠的腹主动脉复制慢性压力负荷性心力衰竭模型,28只大鼠随机分为心力衰竭组(心衰组)10只、氯沙坦治疗组(治疗组)10只、对照组8只。手术后6周,充血性心衰模型形成。治疗组给予氯沙坦10mg·kg-1·d-1灌胃,心衰组和对照组给同量生理盐水灌胃。在3月末测量血流动力学指标后,处死大鼠。原位脱氧核糖核酸酶末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;免疫组化法测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达。结果心衰组与对照组相比,心功能明显的减退(P<0.01),心肌细胞凋亡指数明显增加(P<0.01),心肌细胞Bcl-2表达减低、Bax表达增加。治疗组与心衰组相比,心室重构改善(P<0.05);心肌细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2的表达增加、Bax减少。结论压力负荷诱导的心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡与降低Bcl2蛋白、增加Bax蛋白的表达有关;氯沙坦可能通过改变Bcl-2和Bax在心肌细胞中的表达,减轻心肌细胞凋亡来改善心功能。

丹皮酚联合5-FU对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨丹皮酚(paeonol,Pae)单独及联合5-FU对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:采用6种浓度的Pae(7.81、15.63、31.25、62.50、125.00、250.00mg/L)、3种浓度的5-FU(12.50、25.00、50.00mg/L)及Pae(31.25mg/L)和5-FU(12.50mg/L)联合分别处理EC9706细胞24、48、72h,同时设对照组(细胞不做处理),采用MTT法检测各个时间段细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测4种浓度的Pae(31.25、62.50、125.00、250.00mg/L)处理EC9706细胞72h后细胞周期的变化;倒置显微镜下观察各Pae组细胞各时间段形态学变化,HE染色光镜下观察凋亡细胞;采用免疫细胞化学法检测经Pae(31.25mg/L)、5-FU(12.50mg/L)单独和联合作用48h后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达.结果:Pae、5-FU可明显抑制EC9706细胞增殖,并随着浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05),Pae与5-FU联合用药比单用Pae或5-FU抑制效果更明显(P<0.05);Pae作用后EC9706细胞中G0/G1期和G2/M期细胞比例下降,S期细胞比例上升(Pae125.00mg/L组:G0/G1期21.18%±2.28%vs62.17%±5.23%、G2/M期0.76%±0.54%vs9.92%±3.10%、S期78.06%±2.82%vs27.91%±2.13%,均P<0.05);HE染色光镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变;Pae、5-FU可下调EC9706细胞中Bcl-2蛋白表达,同时增强EC9706细胞中Bax蛋白的表达,联合用药组较单药组作用更为明显(2.21±0.14vs5.67±0.30,4.22±0.34;8.55±0.33vs3.90±0.27,6.28±0.26,均P<0.05).结论:Pae可明显抑制人食管癌EC9706细胞的增殖,促进其凋亡,Pae联合5-FU作用更为明显.

氢气预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的:探讨氢气对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及其机制。方法:原代培养的SD乳鼠心肌细胞,随机分3组即对照组、缺氧/复氧组、氢气预处理组。对照组常规培养;缺氧/复氧组预先在100%N2环境中培养60min,复氧30min;氢气预处理组预先在2%H2+98%N2环境中培养60min,复氧30min。采用TUNEL法、MDA试剂盒法和MTT法分别检测乳鼠心肌细胞细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量和细胞活力。结果:氢气预处理能够降低乳鼠心肌细胞的凋亡率(P<0.05),减少MDA的生成(P<0.05),增强细胞活力(P<0.05)。结论:氢气预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,可能机制是抗脂质过氧化抑制细胞凋亡提高细胞活力。

小鼠cyclin A2正义和反义真核表达载体的构建及鉴定

目的构建小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体。方法采用小鼠胚胎组织取材,提取总RNA。设计引物,采用RT-PCR方法扩增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA,将此DNA插入pGEM-T载体,转化入JM109感受态细菌。将鉴定得到的重组质粒进行扩增,EcoRⅠ酶切后,回收cyclin A2目的片段亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体。酶切筛选鉴定重组的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2。结果将小鼠基因的开放阅读框(ORF)重组到真核表达载体pcDNA3.1内,用EcoRⅠ酶切重组质粒后可得到一接近1660 bp的DNA条带,核酸测序证实和GenBank所公布序列相符。HindⅢ酶切鉴定重组质粒后,证明分别为正向和反向插入载体的质粒。DNA测序证明构建的真核表达载体pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正确的。结论成功构建了小鼠cyclin A2的正义和反义真核表达载体。