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农杆菌介导烟草抗真菌β-1,3-葡聚糖酶基因转化洋桔梗
被引量:
3
1
作者
付晓佳
张倩
+3 位作者
李琳
乔宁宁
王转梅
陈崇顺
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第1期44-50,共7页
为获得洋桔梗抗真菌病害新品种,本研究将烟草抗真菌β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu)与质粒p BI121重组,构建了植物表达载体p BI121-Glu,利用农杆菌介导法转化洋桔梗品种Double Mariachi Pink叶块,共获得21个卡那霉素抗性株系。对抗性株系进行...
为获得洋桔梗抗真菌病害新品种,本研究将烟草抗真菌β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu)与质粒p BI121重组,构建了植物表达载体p BI121-Glu,利用农杆菌介导法转化洋桔梗品种Double Mariachi Pink叶块,共获得21个卡那霉素抗性株系。对抗性株系进行PCR扩增,获得10个阳性株系。选取其中生长良好的5个株系进行RT-PCR检测,鉴定出3个株系(EG6、EG11和EG17)为转基因正常转录株系。EG6、EG11和EG17株系及非转基因对照株系的β-1,3-葡聚糖酶的平均活力分别为0.301 U、0.243 U、0.401 U及0.236 U,其中EG6和EG17株系的平均活力显著高于非转基因对照株系。洋桔梗离体叶片的抗灰霉病鉴定显示,EG17病斑面积(0.432 cm2)显著小于非转基因对照株系(2.156 cm2)。此外,EG17对灰霉病的抗性还表现为发病延迟、病斑面积扩大速度减慢等。
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关键词
洋桔梗
Β-1
3-葡聚糖酶基因
农杆菌介导法
灰霉病抗性
下载PDF
职称材料
洋桔梗品种遗传多样性的AFLP分析
被引量:
2
2
作者
王瑞鑫
韦银凤
+3 位作者
李琳
付晓佳
李爽
陈崇顺
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期1325-1330,共6页
该研究以洋桔梗(Eustoma grandi florum)2个品种‘玛丽艾基粉色’和‘圣剑白底紫边’为试材,提取叶片DNA,经过EcoRI /Mse Ⅰ双酶切、连接、预扩增、选择性扩增,建立了洋桔梗的AFLP最佳反应体系;并以64个常用引物组合进行扩增,得到154...
该研究以洋桔梗(Eustoma grandi florum)2个品种‘玛丽艾基粉色’和‘圣剑白底紫边’为试材,提取叶片DNA,经过EcoRI /Mse Ⅰ双酶切、连接、预扩增、选择性扩增,建立了洋桔梗的AFLP最佳反应体系;并以64个常用引物组合进行扩增,得到154个多态性条带,从中筛选出扩增条带较多且多态性较好的4个引物组合(E-ACA/M-CTC,E-ACC/M-CAC,E-AGC/M-CTT,E-ACT/M-CAG),其多态位点百分率均值为24.36%.利用上述4个引物组合,以最佳反应体系为基础,构建了7个常见洋桔梗品种的AFLP指纹图谱,统计7个品种各4个引物组合在1 000~300 bp区间7个区段的扩增条带,并将各个品种的AFLP指纹图谱转换成各品种4组7位数构成的28位特异数字指纹,极大地方便了种质比较及鉴定;7个品种间的遗传相似系数介于0.683 5~0.860 8之间,平均值为0.774 6.研究结果为进一步进行洋桔梗的种质研究及利用奠定了基础.
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关键词
洋桔梗
AFLP
最佳反应体系
引物筛选
指纹图谱
特异数字指纹
遗传相似系数
下载PDF
职称材料
农杆菌介导菜豆几丁质酶基因转化洋桔梗
3
作者
李琳
付晓佳
+2 位作者
杨燕燕
韦银凤
陈崇顺
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015年第3期512-519,共8页
通过农杆菌介导法将抗真菌的几丁质酶基因转入洋桔梗,以提高其对真菌病害的抗性。结果表明,成功克隆了抗真菌活性较强的菜豆几丁质酶基因,构建了植物表达载体,并对洋桔梗Double Mariachi Pink叶块进行转化,获得了卡那霉素抗性植株,对抗...
通过农杆菌介导法将抗真菌的几丁质酶基因转入洋桔梗,以提高其对真菌病害的抗性。结果表明,成功克隆了抗真菌活性较强的菜豆几丁质酶基因,构建了植物表达载体,并对洋桔梗Double Mariachi Pink叶块进行转化,获得了卡那霉素抗性植株,对抗性植株进行了2次PCR检测(nptⅡ基因),第1次PCR检测获得了13个阳性株系,培养60 d后再进行第2次PCR检测,获得11个阳性株系,再对生长良好的5个转基因株系进行RT-PCR检测,获得了3个阳性株系。3个阳性株系的几丁质酶平均活性(0.215 U、0.225 U和0.286 U)均显著高于未转化植株(0.133 U),转基因株系几丁质酶粗提液对大豆链霉菌5A、5E和灰葡萄孢菌3种指示真菌的抑菌圈直径均显著大于未转化植株,其中抑菌效果最好的株系对上述3种指示真菌的抑菌圈直径与对照相比,分别增大了106.00%、90.91%和71.53%。
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关键词
洋桔梗
几丁质酶基因
遗传转化
真菌病害
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职称材料
题名
农杆菌介导烟草抗真菌β-1,3-葡聚糖酶基因转化洋桔梗
被引量:
3
1
作者
付晓佳
张倩
李琳
乔宁宁
王转梅
陈崇顺
机构
南京师范大学生命科学学院/江苏省生物多样性与生物技术重点实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第1期44-50,共7页
基金
江苏高校优势学科建设工程资助项目
文摘
为获得洋桔梗抗真菌病害新品种,本研究将烟草抗真菌β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu)与质粒p BI121重组,构建了植物表达载体p BI121-Glu,利用农杆菌介导法转化洋桔梗品种Double Mariachi Pink叶块,共获得21个卡那霉素抗性株系。对抗性株系进行PCR扩增,获得10个阳性株系。选取其中生长良好的5个株系进行RT-PCR检测,鉴定出3个株系(EG6、EG11和EG17)为转基因正常转录株系。EG6、EG11和EG17株系及非转基因对照株系的β-1,3-葡聚糖酶的平均活力分别为0.301 U、0.243 U、0.401 U及0.236 U,其中EG6和EG17株系的平均活力显著高于非转基因对照株系。洋桔梗离体叶片的抗灰霉病鉴定显示,EG17病斑面积(0.432 cm2)显著小于非转基因对照株系(2.156 cm2)。此外,EG17对灰霉病的抗性还表现为发病延迟、病斑面积扩大速度减慢等。
关键词
洋桔梗
Β-1
3-葡聚糖酶基因
农杆菌介导法
灰霉病抗性
Keywords
Eustoma grandiflorum
β-1
3-glucanase gene
Agrobacterium-mediated transformation
resistance to Botrytis cinerea
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
洋桔梗品种遗传多样性的AFLP分析
被引量:
2
2
作者
王瑞鑫
韦银凤
李琳
付晓佳
李爽
陈崇顺
机构
南京师范大学生命科学学院/江苏省生物多样性与生物技术重点实验室
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期1325-1330,共6页
基金
国家基础科学人才培养基金(J1103507)
文摘
该研究以洋桔梗(Eustoma grandi florum)2个品种‘玛丽艾基粉色’和‘圣剑白底紫边’为试材,提取叶片DNA,经过EcoRI /Mse Ⅰ双酶切、连接、预扩增、选择性扩增,建立了洋桔梗的AFLP最佳反应体系;并以64个常用引物组合进行扩增,得到154个多态性条带,从中筛选出扩增条带较多且多态性较好的4个引物组合(E-ACA/M-CTC,E-ACC/M-CAC,E-AGC/M-CTT,E-ACT/M-CAG),其多态位点百分率均值为24.36%.利用上述4个引物组合,以最佳反应体系为基础,构建了7个常见洋桔梗品种的AFLP指纹图谱,统计7个品种各4个引物组合在1 000~300 bp区间7个区段的扩增条带,并将各个品种的AFLP指纹图谱转换成各品种4组7位数构成的28位特异数字指纹,极大地方便了种质比较及鉴定;7个品种间的遗传相似系数介于0.683 5~0.860 8之间,平均值为0.774 6.研究结果为进一步进行洋桔梗的种质研究及利用奠定了基础.
关键词
洋桔梗
AFLP
最佳反应体系
引物筛选
指纹图谱
特异数字指纹
遗传相似系数
Keywords
Eustoma grandiflorum
AFLP
optimized AFLP reaction system
primer selection
fingerprint
specific digital fingerprint
genetic similarity
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
农杆菌介导菜豆几丁质酶基因转化洋桔梗
3
作者
李琳
付晓佳
杨燕燕
韦银凤
陈崇顺
机构
南京师范大学生命科学学院
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015年第3期512-519,共8页
文摘
通过农杆菌介导法将抗真菌的几丁质酶基因转入洋桔梗,以提高其对真菌病害的抗性。结果表明,成功克隆了抗真菌活性较强的菜豆几丁质酶基因,构建了植物表达载体,并对洋桔梗Double Mariachi Pink叶块进行转化,获得了卡那霉素抗性植株,对抗性植株进行了2次PCR检测(nptⅡ基因),第1次PCR检测获得了13个阳性株系,培养60 d后再进行第2次PCR检测,获得11个阳性株系,再对生长良好的5个转基因株系进行RT-PCR检测,获得了3个阳性株系。3个阳性株系的几丁质酶平均活性(0.215 U、0.225 U和0.286 U)均显著高于未转化植株(0.133 U),转基因株系几丁质酶粗提液对大豆链霉菌5A、5E和灰葡萄孢菌3种指示真菌的抑菌圈直径均显著大于未转化植株,其中抑菌效果最好的株系对上述3种指示真菌的抑菌圈直径与对照相比,分别增大了106.00%、90.91%和71.53%。
关键词
洋桔梗
几丁质酶基因
遗传转化
真菌病害
Keywords
lisianthus
chitinase gene
transformation
fungal disease
lisianthus
chitinase gene
transformation
fungal disease
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
农杆菌介导烟草抗真菌β-1,3-葡聚糖酶基因转化洋桔梗
付晓佳
张倩
李琳
乔宁宁
王转梅
陈崇顺
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2016
3
下载PDF
职称材料
2
洋桔梗品种遗传多样性的AFLP分析
王瑞鑫
韦银凤
李琳
付晓佳
李爽
陈崇顺
《西北植物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
下载PDF
职称材料
3
农杆菌介导菜豆几丁质酶基因转化洋桔梗
李琳
付晓佳
杨燕燕
韦银凤
陈崇顺
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
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