基于“场景词袋”的城市公园游人时空行为与空间增效研究

城市公园游人时空行为研究有助于揭示公园游憩主体的活动偏好与空间需求,指导公园游憩空间增效实践。文章结合“场景”理论与“词袋”模型,建构城市公园游人时空行为“场景词袋”分析方法。该方法以主体、行为、时间、空间为场景模型建构要素,并以观赏、休憩、文娱、运动、纪念、认知6类行为及12项细分亚类为行为解析线索,以围合界面、场地形态、景观元素、环境氛围4组空间属性为空间解析线索。通过样本研究,揭示出城市公园游人时空行为的空间偏好和“时节响应”“时段制约”规律,以及不同源地、性别、年龄人群在游憩导向、知觉倾向和群聚程度方面的分异规律。据此,提出重点场所优化、流态场景组构和人本场域更新的城市公园游憩空间增效策略,以期为城市公园更新实践提供参考。

禽IL-2单克隆抗体的制备与鉴定

为制备禽源IL-2的单克隆抗体,首先构建chIL-2的原核表达载体并进行表达,用HIS-IL-2蛋白免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后,取小鼠脾与骨髓瘤细胞sp2/0融合,应用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤,最终获得3株稳定分泌chIL-2抗体的杂交瘤,分别命名为1C2,2F2和4B5。并对所获得单抗的特性进行了鉴定,结果表明,3株单抗亚型均为IgG1,抗体亲和力解离常数(K_d)分别为4.81×10^(-10)、1.36×10^(-10)、4.15×10^(-9),均为高亲和力抗体,经过Western Blot确定3株单抗分别识别chIL-2的不同区域,且均能特异性识别chIL-2。该单抗的制备为chIL-2的功能研究和应用奠定了基础。

一株传染性法氏囊病毒野毒株的分离与鉴定

笔者从北京延庆地区一鸡场采集发病鸡的肾脏、脾、法氏囊样品,通过鸡胚接种及RT-PCR技术初步诊断其病原为传染性法氏囊病毒,暂命名为BY-2015-1。本文设计IBDV VP2的引物,以反转录得到的cDNA为模板进行扩增,并对扩增得到的序列进行序列分析,序列分析显示该分离株的核苷酸序列与标准强毒株OKYM的同源性为97.7%,分析VP2高变区的氨基酸序列发现,此分离株在VP2高变区关键氨基酸位点的变异符合强毒株的特点,但又不完全相同。该毒株的分离和鉴定,为传染性法氏囊病防控和流行病学调查提供了依据。

布鲁氏菌IV型分泌系统效应蛋白BPE043的功能和致病机制研究

目的研究布鲁氏菌IV型分泌系统效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染和胞内生存过程中的作用。方法以羊种布鲁氏菌104株为起始菌株,通过同源重组的方法构建布鲁氏菌BPE043基因缺失株。将布鲁氏菌野生株104和突变株104ΔBPE043在相同的起始浓度下培养,观察它们生长变化的趋势;用野生株和突变株分别感染小鼠,构建小鼠体内感染模型,测定小鼠脾重并计算脾脏细菌载量;利用免疫共沉淀技术筛选BPE043蛋白的宿主互作蛋白。结果成功构建了布鲁氏菌BPE043基因缺失株。与野生株相比,突变株104ΔBPE043在体外培养的生长趋势和野生株基本相同;小鼠感染实验显示,在感染1周后,两组小鼠脾均肿大,但突变株104ΔBPE043感染组小鼠脾重低于野生株104感染组小鼠脾重;在感染后两周,两组小鼠脾肿大现象开始减轻。在细菌载量方面,在感染1周后,突变株104ΔBPE043感染小鼠的脾脏细菌载量低于野生株104感染小鼠;在感染后2周,突变株感染组的脾细菌载量下降趋势更明显。免疫共沉淀实验显示BPE043蛋白与鼠源小分子GTP结合蛋白Rab4和Rab11存在相互作用。结论布鲁氏菌IV型分泌系统效应蛋白BPE043是布鲁氏菌重要的毒力因子。本研究为进一步探索BPE043基因在布鲁氏菌感染和胞内生存中的作用奠定了基础。

实时荧光定量PCR同时快速检测4类致病性立克次体

为了建立4类常见致病性立克次体的快速检测方法,本研究根据斑疹伤寒群立克次体lgtD基因、斑点热群立克次体ompB基因、恙虫病东方体TSA56基因和贝氏柯克斯体23S rRNA基因序列设计引物和探针,以克隆的基因片段作为DNA模板,建立4模块实时荧光定量PCR检测方法,用不同立克次体和细菌菌株核酸样本评价该方法的特异性和灵敏度。结果显示,4个模块标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数均呈良好的线性关系,并且在检测相应的立克次体核酸样本时具有良好的灵敏度、特异性和重复性,适合于快速检测样本中微量立克次体DNA,可用于临床实验室快速确诊立克次体疾病。

贝氏柯克斯体Ⅳ型分泌系统效应蛋白研究进展

贝氏柯克斯体是重要人兽共患病——Q热的病原,Dot/IcmⅣ型分泌系统(T4BSS)是其重要致病因素。贝氏柯克斯体T4BSS分泌的效应蛋白参与调控柯克斯体寄生泡发育成熟,以及宿主细胞的物质分泌运送、自噬与凋亡、转录与翻译、炎性反应等信号通路,为贝氏柯克斯体的宿主细胞内生长繁殖提供必要的场所和物质。

湖北省东北部地区蜱携立克次体的调查

目的调查湖北省东北部地区蜱携带的立克次体。方法对采集的蜱种类进行鉴定,提取单个蜱总DNA,采用巢式PCR对DNA样本做斑点热群(SFGR)、无形体属(Anaplasma spp.)和埃立克体属(Ehrlichia spp.)、柯克斯体属(Coxiella spp.)、贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)种特异性基因扩增;测定扩增产物DNA序列,通过特异基因序列鉴定分析蜱携菌种类。结果与结论共采集152只蜱,形态学鉴定均为长角血蜱(Haemaphysalis longicornis。PCR扩增斑点热立克次体ompA基因获得1份(0.66%)蜱DNA阳性样本,扩增柯克斯体属16S rRNA基因获得75份(49.34%)蜱DNA阳性样本,所有样本均未扩增出无形体属和埃立克体属特异基因和贝氏柯克斯体种特异基因。将扩增阳性样本基因片段的DNA序列通过GenBank进行同源性比较,发现检出的1份斑点热立克次体ompA基因序列与劳氏立克次体(Rickettsia raoultii)同源性为100%;检出的75份柯克斯体属16S rRNA基因序列为两种类型,与血蜱属的2种柯克斯体样内共生菌(Coxiella-like endosymbiont)同源性最高,分别为99.73%和100%。本研究证实湖北省东北部地区的长角血蜱可携带劳氏立克次体和柯克斯体样内共生菌。

siRNA下调20S蛋白酶体β5亚基抑制立氏立克次体细胞内增殖

【目的】探究宿主20S蛋白酶体β5亚基(proteasome 20S subunit beta 5,PSMB5)对革兰氏阴性专性胞内寄生菌立氏立克次体胞内生长繁殖的影响。【方法】利用小干扰RNA转染Vero和THP-1宿主细胞,设置未转染细胞为空白对照组、无义小干扰RNA转染组为阴性对照组、PSMB5特异性小干扰RNA转染组为实验组,采用SYBR定量PCR和蛋白印迹法评价宿主细胞PSMB5变化水平;随后利用立氏立克次体以感染复数为0.1感染转染后细胞系,采用光镜观察、荧光显微镜观察和PCR定量方法检测细菌胞内繁殖变化水平。【结果】与si-NC阴性对照和空白对照相比,si-PSMB5能够显著降低宿主细胞PSMB5 mRNA转录水平和蛋白表水平;在随后立氏立克次体感染过程中,能够降低立氏立克次体的胞内细菌载量。【结论】下调宿主PSMB5基因表达能够抑制立氏立克次体胞内生长繁殖。

丘陵地区传统村落防御性空间价值挖掘与保护——以菏泽市巨野县前王庄村为例

丘陵地区传统村落的防御性空间具有较高的历史、人文和科学价值。随着历史变迁和社会环境变化,其防御性特色销蚀严重,对其防御性空间价值的研究与保护紧迫而必要。本文以菏泽市巨野县传统村落前王庄村为例,追溯其历史渊源,从宏观区域防御性空间布局、中观村落防御性空间结构和微观院落防御性空间及建筑工艺三个维度,对其防御性价值加以深入探究。在此基础上,研究相关保护文件与条例的不足之处,提出了"区分层次管理,合理规划保护;依法依规保护,活化利用开发"的建议措施,以期为国内防御性传统村落的遗产价值挖掘提供实践基础,同时唤起人们对防御性聚落活化及保护利用的思考。

下调自噬相关蛋白ATG4B抑制贝氏柯克斯体细胞内增殖

目的研究宿主细胞自噬相关基因4B(ATG4B)对贝氏柯克斯体胞内生长繁殖的影响。方法用ATG4B特异小干扰RNA(siRNA)处理宿主细胞(THP-1和Vero),以非特异siRNA和无siRNA处理的细胞为对照;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测抑制效果;Western印迹分析细胞自噬标识蛋白(p62和LC3)的量变;qRT-PCR检测贝氏柯克斯体感染细胞中细菌增殖水平;共聚焦显微镜观察贝氏柯克斯体感染细胞中细菌寄生囊泡发育状况。结果与对照组比较,ATG4B特异siRNA处理组的细胞自噬标识蛋白p62和LC3-Ⅱ明显增多,细菌繁殖量更低,细菌寄生囊泡为散在分布小囊泡而不是单一成熟大囊泡。结论宿主细胞ATG4B表达下调可部分阻断自噬,自噬的部分阻断使贝氏柯克斯体寄生囊泡发育受阻,进而抑制贝氏柯克斯体胞内生长繁殖,为阐明宿主细胞的自噬促进贝氏柯克斯体繁殖的致病机制提供了新的依据。