清营生脉汤激活Akt信号通路保护H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的作用研究

目的研究清营生脉汤含药血清对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护机制。方法本研究采用H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)方法模拟心肌缺血再灌注损伤(MIRI)细胞模型,细胞实验分组为:空白血清对照组、模型组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组。应用CCK-8法测定心肌细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,Western blotting法检测细胞内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)及p-Akt的蛋白表达。结果与对照组相比,模型组细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高、细胞内SOD水平显著降低,LDH、MDA、CK-MB水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,含药血清低、中、高剂量组细胞的存活率显著升高、凋亡率显著降低、细胞内SOD水平显著升高,LDH、MDA、CK-MB水平显著降低(P<0.01);与对照组相比,模型组细胞中p-Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.01),p-Akt/Akt比值降低(P<0.05);与模型组相比,含药血清高剂量组细胞内p-Akt蛋白表达量显著升高(P<0.01),p-Akt/Akt比值明显升高(P<0.05)。结论清营生脉汤含药血清能够提高缺氧复氧心肌细胞的活性,降低细胞凋亡率,升高SOD水平,降低LDH、MDA、CK-MB水平,提高细胞抗氧化能力,且可能通过促进Akt磷酸化降低缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞损伤程度。

清营生脉汤对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎症因子的影响

目的观察清营生脉汤对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠炎症因子的影响。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组和清营生脉汤高、中、低剂量组,每组10只。灌胃14 d后,结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支后再复灌建立心肌缺血再灌注模型。应用TTC染色法检测心肌梗死面积;ELISA法检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)水平;Western blotting法检测JNK、P-JNK蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组心肌梗死面积增加;与模型组比较,清营生脉汤高、中、低剂量组与阳性药组的心肌梗死面积明显减少;与模型组比较,清营生脉汤高、中、低剂量组CK和CK-MB含量显著降低(P<0.01),IL-2水平显著降低(P<0.01),IL-4水平显著升高(P<0.01),JNK蛋白表达无明显改变(P>0.05),P-JNK蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论清营生脉汤可减轻MIRI大鼠心肌损伤,缩小心肌梗死面积,发挥心肌保护作用,并推测其减轻MIRI炎症损伤的作用可能与抑制JNK通路激活相关。

基于雌激素受体研究氯化锂干预成骨细胞的分化及自噬

背景:临床应用锂治疗造血系统疾病和双极性疾病已经有数十年,并且发现锂可以直接刺激骨髓间充质干细胞的增殖。目的:研究雌激素受体抑制下氯化锂对大鼠成骨细胞增殖分化及自噬的影响。方法:实验选取10只出生72 h的SPF级SD乳鼠(由黑龙江中医药大学提供)。采用酶消化法和茜素红染色法获得和鉴定成骨细胞。取对数生长期成骨细胞,于培养基中加入不同浓度的氯化锂(0,1,2,5 nmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况。另取成骨细胞随机分为空白组(正常培养细胞)、抑制剂组(10^(-7) mol/L ICI182780)、治疗组(5 nmol/L氯化锂+10^(-7) mol/L ICI182780)。采用钙化结节染色及碱性磷酸酶活性检测各组成骨细胞分化情况;Western blot法测定各组成骨细胞中Beclin1和Runx2蛋白表达情况。结果与结论:(1)倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团;(2)CCK-8法检测结果显示不同浓度的氯化锂都能对成骨细胞增殖产生促进作用,呈浓度依赖性;(3)茜素红染色结果显示与空白组比较,抑制剂组成骨细胞矿化能力明显降低,与抑制剂组比较,治疗组成骨细胞矿化结节能力明显增加(P <0.05);活性测定结果显示与空白组比较,抑制剂组中碱性磷酸酶活性明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中碱性磷酸酶活性明显增加(P <0.05);(4)Western blot结果显示与空白组比较,抑制剂组中Beclin1和Runx2蛋白表达明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中Beclin1和Runx2蛋白表达显著增加(P <0.05);(5)结果提示,雌激素受体抑制下氯化锂可以提高大鼠成骨细胞增殖分化及自噬。

乌腺金丝桃与黄芪配伍对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨乌腺金丝桃与黄芪配伍对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用冠状动脉左前降支结扎法,建立心肌缺血再灌注损伤模型,测定大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;采用TUNEL法检测心肌缺血再灌注心肌细胞的凋亡;免疫组化法测定心肌缺血再灌注心肌细胞Caspase-3和TNF-α蛋白表达。结果:与M组比较,P组和H+AM1:2组能够明显提高SOD活性,降低MDA含量;与M组比较,H+AM1:2组明显降低大鼠心肌细胞凋亡指数,P组明显降低大鼠心肌细胞凋亡指数;sham组与M组比较,M组心肌细胞中Caspase-3和TNF-α的蛋白量明显增加,与M组比较,H+AM1:2组和P组能够明显降低Caspase-3和TNF-α的蛋白量。结论:乌腺金丝桃与黄芪配伍对缺血再灌注损伤有一定的保护作用。

氯化锂促进骨髓间充质干细胞增殖分化的作用途径

背景:寻找促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化的方法,可以为治疗骨质疏松类疾病提供治疗思路。目的:探讨氯化锂调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的机制。方法:实验采用全骨髓细胞接种法和贴壁纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别给予0,2,5 nmol/L氯化锂进行干预;采用CCK-8法检测大鼠骨髓间充质干细胞的增殖情况,茜素红染色法检测钙化结节形成情况,PNPP法测定碱性磷酸酶活性,Western blot法检测大鼠骨髓间充质干细胞中GSK3β,p-GSK3β,β-catenin蛋白含量变化。结果与结论:①2,5 nmol/L氯化锂均能促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,5 nmol/L氯化锂促增殖能力最强;②2,5 nmol/L氯化锂组矿化结节与碱性磷酸酶活性均比0 nmol/L氯化锂组明显,且5 nmol/L氯化锂促成骨分化更为显著;③2,5 nmol/L氯化锂能够显著增加p-GSK3β、β-catenin蛋白表达,而各组GSK3β蛋白表达差异无显著性意义;④结果表明,氯化锂能够促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及向成骨细胞分化,其可能机制是通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达实现的。

氯化锂联合淫羊藿苷对成骨细胞增殖分化的影响

目的研究氯化锂(LiCl)与淫羊藿(ICA)苷联合应用对成骨细胞增殖、分化的影响,为LiCl与ICA联合应用提高成骨细胞矿化能力提供研究基础。方法采用酶消化法和茜素红染色法鉴定并获得大量细胞为成骨细胞,随机分为4组即空白组、ICA组(80nmol/L),LiCl(5nmol/L),ICA(80nmol/L)+LiCl(5nmol/L)组,诱导21d后采用茜素红法及碱性磷酸酶活性测定各组成骨细胞矿化能力及活性。采用CCK-8和Westernblot法测定各组对体外成骨细胞增殖活性及成骨细胞中p-GSK3β,β-catenin水平。结果倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团,茜素红染色将钙化结节染成橘红色;LiCl及ICA单独作用于成骨细胞时,都可以明显促进成骨细胞的增殖,增加ALP活性及矿化能力,同时明显促进p-GSK3β、β-catenin蛋白的表达;但是LiCl与ICA联合应用能够明显促进成骨细胞的增殖,并且在分子水平能够明显抑制p-GSK3β、β-catenin的表达,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论LiCl与ICA联合应用可以通过wnt信号通路促进成骨细胞的增殖、分化。

丹参(冻干)粉针对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的IL-6和IL-10的影响

目的:观察丹参(冻干)粉针对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)中炎症因子白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)对炎症机制的影响。方法:将32只SD大鼠随机分为模型组、假手术组、丹参(冻干)粉针高、低剂量组,每组8只。建立大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,检测血清中IL-6、IL-10水平。结果:模型组与假手术组比较,血清中IL-6,IL-10水平均显著性升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,高剂量组血清中IL-6水平显著性降低,IL-10水平显著性升高(P<0.01);高剂量组与低剂量组有显著性差异(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,低剂量组血清中IL-6水平显著性降低,IL-10水平显著性升高(P<0.05,P<0.01),有统计学意义。结论:丹参(冻干)粉针对心肌缺血/再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制炎症反应有关。

五味子多糖对IR大鼠血清Leptin、TNF-α水平的影响

目的:探讨五味子多糖对IR大鼠血清Leptin、TNF-α水平的影响。方法:通过观察五味子多糖对IR大鼠血清Leptin、TNF-α水平的影响,从而探讨五味子多糖干预IR大鼠的作用机制。结果:与模型组比较,五味子多糖组大鼠血清Leptin、TNF-α水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:五味子多糖明显降低IR大鼠血清Leptin、TNF-α水平,说明五味子多糖可能通过降低IR大鼠血清Leptin、TNF-α的含量来发挥其改善胰岛素抵抗的作用。

五味子多糖对胰岛素抵抗大鼠血清脂联素、抵抗素水平的影响

目的:探讨五味子多糖对胰岛素抵抗大鼠血清脂联素、抵抗素水平的影响。方法:通过观察五味子多糖对胰岛素抵抗大鼠血清脂联素、抵抗素水平的影响,从而探讨五味子多糖干预胰岛素抵抗大鼠的作用机制。结果:与模型组比较,五味子多糖组大鼠血清脂联素水平明显升高,抵抗素水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:五味子多糖能明显升高胰岛素抵抗大鼠血清脂联素水平,降低抵抗素水平,说明五味子多糖可能通过升高胰岛素抵抗大鼠血清脂联素水平与降低抵抗素水平来发挥其改善胰岛素抵抗的作用。

五味子多糖干预胰岛素抵抗大鼠作用研究

目的:探讨五味子多糖改善大鼠胰岛素抵抗的作用。方法:观察五味子多糖对模型大鼠空腹血糖、空腹胰岛素的影响。结果:与模型组比较,五味子多糖组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:五味子多糖可明显降低模型大鼠空腹血糖、空腹胰岛素的水平,说明五味子多糖具有改善大鼠胰岛素抵抗的作用。

滋阴补阳中药对成骨细胞OPG和RANKL表达的影响

目的:研究滋阴补阳中药骨乐冲剂对成骨细胞中生物活性因子OPG和RANKL表达影响,探讨滋阴补阳中药治疗骨质疏松症的作用机制。方法:采用酶消化法和茜素红染色法鉴定获大量细胞为成骨细胞,采用MTT和Western blot法测定不同剂量的骨乐冲剂体外成骨细胞增殖活性及成骨细胞中OPG和RANKL含量。结果:倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团,茜素红染色将钙化结节染成橘红色;高、中剂量的骨乐冲剂能够明显促进成骨细胞的增殖,低剂量骨乐冲剂对成骨细胞无作用;高、中剂量的骨乐冲剂能够明显增加OPG的表达,抑制RANKL的分泌,低剂量骨乐冲剂对OPG和RANKL无作用。结论:滋阴补阳中药骨乐冲剂能够促进成骨细胞的增殖,增加OPG表达,抑制RANKL分泌。

中医药治疗慢性咳嗽的研究进展

慢性咳嗽是临床常见疾病,越来越受到广大医生的关注。中医学认为,五脏六腑皆令人咳,非独肺也,慢性咳嗽属本虚标实之证,发作可因外邪犯肺,内邪干肺,内外合邪。中医药通过内治法,外治法及内外合治疗法能不同程度缓解症状,降低复发率,减少不良反应。但目前相关临床研究存在缺乏高质量的循证医学研究,深层次的中药药理学研究,不良反应报告少见,忽略舒适护理、环境护理、心理护理对迁延不愈的慢性咳嗽的影响等问题。本文通过对近年来中医药治疗慢性咳嗽的研究现状进行综述,旨在为临床诊疗提供更为广阔的思路。

乌腺金丝桃与丹参抗实验性快速心律失常的配伍研究

目的:通过建立氯仿、氯化钙心律失常实验动物模型,进行乌腺金丝桃与丹参抗实验性快速心律失常的配伍研究。方法:采用吸入法建立小鼠室颤模型,以发生心室颤动小鼠数为指标;静脉注射氯化钙(100mg/kg)建立Wistar大鼠心律失常模型,以大鼠心律失常潜伏时间、持续时间、死亡率为指标,比较各实验组预防性给予不同提取物对抗快速心律失常的作用。结果:与模型组比较,乌腺金丝桃与丹参1∶2提取物组小鼠室颤发生数有非常显著性差异(P<0.01),乌腺金丝桃与丹参1∶2提取物组大鼠心律失常潜伏时间、心律失常持续时间、死亡数有非常显著性差异(P<0.01)。结论:乌腺金丝桃与丹参1∶2提取物对快速性心律失常的对抗作用优于其他提取物。

浅析心悸之证治

心悸是因心失所养而引起心中急剧跳动,惊慌不安,不能自主为主要表现的一种病证,为临床常见病。常伴胸闷、气短,甚至晕厥,严重影响人们的生命与健康,故将心悸之病因病机、辨证施治作一浅析,以飱同道。

丹参(冻干)粉针对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的血液流变学影响

目的:观察丹参(冻干)粉针对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)血液流变学的影响。方法:雄性SD大鼠32只,体质量(275±25)g,随机分为模型组、假手术组、丹参(冻干)粉针高、低剂量组,每组8只。建立大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,观察缺血/再灌注损伤后全血黏度和血浆黏度的变化。结果:模型组与假手术组比较,3 s^(-1)、30 s^(-1)切变率下的全血黏度升高极显著(P<0.01),60 s^(-1)、200 s^(-1)切变率下的全血黏度显著性升高(P<0.05)。与模型组比较,低剂量组可显著降低3 s^(-1)、30 s^(-1)切变率下的全血黏度(P<0.05),60 s^(-1)、200 s^(-1)切变率下的全血黏度无显著性差异(P>0.05),但均有降低趋势。与模型组比较,高剂量组可显著降低3 s^(-1)、60 s^(-1)、200 s^(-1)切变率下的全血黏度(P<0.05),30 s^(-1)切变率下的全血黏度降低极显著(P<0.01)。与模型组比较,高剂量组和假手术组血浆黏度显著降低(P<0.05),低剂量组血浆黏度无显著差异(P>0.05),但均有降低趋势。结论:丹参(冻干)粉针对心肌缺血/再灌注损伤有保护作用。

中药有效组分配伍研究新进展

中药的组分配伍研究包括方剂组分配伍、单药有效成分组分配伍以及标准物质组分配伍等三类模式。目前,方剂组分配伍多以单一药效指标进行最佳配伍剂量、配伍关系的研究。近两年,组分配伍研究进展到单味药及标准物质的组分配伍研究后取得了很多新进展,但仍存在药代动力学研究不够深入的缺憾,研究缺乏足够的中医理论支持。

解析茶在古方剂中之配伍意义

茶乃天地之精华,有水中之君子的美誉,作为药用历史悠久。在方剂中的主要配伍意义表现在清利头目、清热解毒、祛风解表、疗疮治瘘、祛痰消积等各方面,本文就茶的作用以方为例进行阐述。

丹参(冻干)粉针临床应用新进展

丹参(冻干)粉针在临床上应用广泛,近几年多用于治疗心脑血管系统、呼吸系统、代谢、风湿等多方面的疾病,还可用于辅助治疗癌症。查阅近5年有关丹参(冻干)粉针临床应用研究文献,对其进行综述,为临床合理应用丹参(冻干)粉针提供依据,进一步挖掘其新的作用靶点,明确其新的临床适应症。

清热燥湿中药治疗冠心病之免疫炎症机制探讨

冠心病是指冠状动脉发生粥样硬化性病变后导致的一系列心肌缺血、缺氧甚至坏死所引起的心脏疾病,是动脉粥样硬化导致的最常见的器官病变。近些年来对于冠心病的研究逐渐增多,中药对于冠心病的作用及相关机制逐渐成为中医工作者研究的重点。“冠心病”从中医学的角度来看可归纳至“胸痹”范畴,其所对应的胸痹属本虚标实之证。所谓本虚对应的是气、血、阴、阳诸虚,而标实则对应血瘀、气滞、痰浊、寒凝诸般实邪,而血瘀、痰浊为诸般实邪之首。清热、燥湿、祛痰为清热燥湿类中药共同具备的特性,部分药物还有凉血止血之效,近些年来清热燥湿类中药在冠心病临床治疗中的应用也逐渐受到现代中医学者的重视,关于其具体作用机制的研究也随之增多。在动脉粥样硬化的发病过程中,免疫炎症机制占据着重要的地位[1],并且已成为现代医学的研究热点之一[2-3]。因此本文从免疫炎症角度对清热燥湿类中药对于冠心病的作用进行探讨,希望对于探究中医药治疗冠心病的实质有些许的帮助。

尖叶假龙胆含药血清对H/R损伤H9c2细胞自噬及凋亡影响的研究

目的 探究尖叶假龙胆含药血清对H9c2细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型的保护作用及其对自噬与凋亡水平的调节。方法 通过缺氧3 h、复氧3 h建立H9c2细胞H/R模型。实验分为Control组、H/R组、GEN+H/R组、GEN+Rap(自噬激活剂)+H/R组。应用CCK-8法观察尖叶假龙胆含药血清对心肌细胞活力的影响,ELISA法测定血清中LDH含量;采用Annexin V-FITC双染法流式细胞技术,进行H9c2细胞凋亡情况检测;采用Western Blot技术检测心肌细胞Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平。结果 (1)CCK-8及LDH结果显示:与Control组比较,H/R组细胞活力明显下降,细胞培养液LDH漏出量增加(P<0.01);与H/R组比较,GEN+H/R组细胞活力明显上升,LDH漏出量下降(P<0.01);与GEN+H/R组比较,GEN+Rap+H/R组细胞活力明显下降,细胞培养液LDH漏出量增加(P<0.01)。(2)Annexin V-FITC双染法流式细胞术的实验结果显示:与Control组比较,H/R组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);与H/R组比较,GEN+H/R组可明显降低H/R诱导的H9c2细胞凋亡率(P<0.01);与GEN+H/R组比较,GEN+Rap+H/R组细胞凋亡率增加(P<0.01)。(3)Western Blot结果显示:与Control组相比,H/R组的Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平均明显升高;GEN+H/R组Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平与H/R组相比明显降低;与GEN+H/R组比较,GEN+Rap+H/R组Beclin1、LC3Ⅱ、Caspase3蛋白表达水平均明显升高。结论 (1)尖叶假龙胆含药血清能够改善H9c2细胞缺氧/复氧损伤程度,降低细胞凋亡率。(2)尖叶假龙胆含药血清可能通过降低自噬过表达从而抑制凋亡发挥对心肌细胞的保护作用。