统计学方法在麻疹疫苗生产工艺改进中的应用

目的以适用生物统计学方法指导麻疹疫苗生产工艺改进,提高疫苗质量。方法总结疫苗病毒滴度分布规律,确定疫苗标准参考品使用参数及改进麻疹疫苗生产工艺设计。细胞维持液中加入蔗糖明胶病毒稳定剂,提高疫苗病毒原液滴度,改进冻干保护剂配方,减少疫苗冻干过程滴度损失,过滤并稀释高滴度病毒原液,提高疫苗产量。结果同一条件下生产疫苗病毒滴度为对数正态分布数据。病毒培养阶段加入稳定剂可提高麻疹疫苗原液病毒滴度,山梨醇可明显降低疫苗冻干过程滴度损失,并有效降低疫苗水分,疫苗的热稳定性未受原液稀释加工影响。结论疫苗病毒滴度属于对数正态分布资料,据此设计麻疹疫苗生产工艺改进实验,可以优化生产条件,并为其它疫苗生产提供参考。

细胞工厂在麻腮风系列疫苗生产中的应用

目的利用细胞工厂培养麻疹、腮腺炎和风疹病毒,并制备麻腮风各单价及联合疫苗。方法应用40层细胞工厂培养原代鸡胚细胞和2BS细胞,制备麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液(同时以15 L转瓶培养工艺作为对照),并制备麻腮风各单价及联合疫苗,按照《中国药典》三部(2015版)方法进行病毒滴度检测。结果细胞工厂制备的麻疹、腮腺炎和风疹病毒原液滴度分别为大于5.2、6.1和5.7 lgCCID_(50)/mL,高于转瓶工艺,且符合《中国药典》三部(2015版)相关规定;1个40层细胞工厂制备的病毒原液量相当于1个转瓶的4至8倍,产量较高。细胞工厂制备的多批次麻腮风各单价及联合疫苗的病毒滴度均符合《中国药典》三部(2015版)相关标准,且病毒滴度热稳定性下降均不超过1个lg。结论利用细胞工厂制备麻腮风各单价及联合疫苗的工艺稳定,重复性好,质量可控,可用于规模化生产。

新生牛血清的质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响

目的考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响。方法选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养。待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率。根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度。结果SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5×10~6个/mL,活细胞数不低于2.1×10~6个/mL,细胞存活率不低于60%;2BS细胞总细胞数不低于7.0×10~5个/mL,活细胞数不低于4.2×10~5个/mL,细胞存活率不低于60%。腮腺炎病毒原液滴度在6.1～6.6 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为6.28 lgCCID_(50)/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5～6.2 lgCCID_(50)/mL之间,平均值为5.8 lgCCID_(50)/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致。结论新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小。

腮腺炎减毒活疫苗工作代毒种工艺优化

目的优化腮腺炎毒种制备工艺,控制麻腮风联合减毒活疫苗(measles,mumps and rubella combined vaccine,live,MMR)中腮腺炎分型基础滴度和稳定性。方法应用全自动细胞计数仪提高鸡胚活细胞计数精度,确定MOI并按最适MOI制备腮腺炎病毒工作种子批,选取病毒最适收获时间,优化腮腺炎病毒工作种子批制备工艺。采用优化后的毒种连续制备3批次腮腺炎病毒原液,检测原液病毒滴度及由其制备的MMR中腮腺炎病毒分型基础滴度与(37±1)℃1周热稳定性。结果优化后的毒种制备的腮腺炎病毒原液滴度稳定在6.5～7.0 lg CCID_(50)/m L,较优化前提高了0.5～0.7个log。采用优化后腮腺炎病毒原液制备的MMR中的腮腺炎病毒分型基础滴度在5.2～5.8 lg CCID_(50)/m L,热稳定性在4.8～5.5 lg CCID_(50)/m L;80%的MMR中麻腮风各组分病毒比均能达到1∶>20∶1。结论优化后的腮腺炎病毒工作种子批制备的MMR中腮腺炎病毒分型基础滴度和稳定性均显著提升。

麻腮风水痘联合减毒活疫苗的稳定性观察

目的观察中试阶段制备的麻腮风水痘（measles,mumps,rubella and varicella,MMRV）联合减毒活疫苗的稳定性。方法将检定合格的3批中试阶段制备的MMRV联合减毒活疫苗分别置-20℃、2-8℃、室温（25℃）和37℃,定期对其病毒滴度进行检测;在0和18月进行鉴别试验、物理检查、水分检测、无菌检查、异常毒性检查、牛血清白蛋白残留量检测、抗生素残留量检测。结果 -20℃放置18个月,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于4.55 lg CCID（50）/ml、5.05 lg CCID（50）/ml、3.80 lg CCID（50）/ml和4.65 lg PFU/ml;2-8℃放置18个月,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于4.05 lg CCID（50）/ml、4.93 lg CCID（50）/ml、3.80 lg CCID（50）/ml和4.32 lg PFU/ml;25℃放置6周,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于3.80 lg CCID（50）/ml、4.43 lg CCID（50）/ml、3.93 lg CCID（50）/ml和3.87 lg PFU/ml;37℃放置4周,MMRV联合减毒活疫苗中麻疹、腮腺炎、风疹及水痘病毒滴度分别不低于3.80 lg CCID（50）/ml、4.43 lg CCID（50）/ml、3.93 lg CCID（50）/ml和3.84 lg PFU/ml。其他各项指标检测结果均符合制造及检定规程要求。结论冻干MMRV联合减毒活疫苗稳定性良好。

清洁消毒新方法的建立及在腮腺炎疫苗车间的应用

目的 以酸性/碱性苯酚盐作为常规消毒剂,在腮腺炎疫苗生产车间建立新的清洁消毒方法.方法 每月轮换使用酸性/碱性苯酚盐溶液进行擦拭,且每周使用杀孢子剂进行熏蒸.检测新消毒方法的消毒效果,并与原消毒方法进行比较.结果 新方法的消毒效果好于原方法,使用新方法消毒后,腮腺炎疫苗车间的沉降菌检出率下降,而且腮腺炎疫苗单收液和原液的污染率分别降至0.1％和0.0％.结论 新消毒方法可用腮腺炎疫苗生产车间的日常清洁消毒.