氧化染发剂的蚕豆根尖细胞微核诱变试验

本实验利用蚕豆根尖细胞微核方法，检测染发剂的诱变效应，结果发现染发剂的各剂量组微核率均明显高于蒸馏水组（Ｐ＜０．０１），提示染发剂有一定的毒性作用。

化疗后肿瘤细胞形态的观察及DNA定量分析

将人食管癌细胞株Ｅｃａ１０９移植于裸小鼠肾包膜下，观察化疗后肿瘤细胞形态及ＤＮＡ含量的改变，结果显示化疗后细胞呈明显的退行性变，ＤＮＡ含量显著降低，提示ＤＮＡ含量的测定，可作为判定肿瘤化疗效果的标准之一。

绿茶提取物对1,2-二甲基肼诱发小鼠大肠隐窝上皮细胞微核与凋谢的拮抗作用

绿茶多酚和绿茶水溶性提取物对1,2-二甲基肼(1,2-DMH)诱发近交系C_(57)BL小鼠大肠隐窝上皮细胞微核与凋谢的影响研究结果显示:提取物的不同剂量对1,2-DMH诱发小鼠大肠隐窝上皮细胞微核和凋谢有明显的拮抗作用,并存在剂量-效应关系。因而测定二甲基肼诱发小鼠大肠隐窝上皮细胞微核和凋谢,可作为抗结肠致癌物的快速筛选方法。

酸牛乳抑制1,2-二甲基肼诱发小鼠大肠癌的实验研究

106只小鼠随机分成5组,每组18至23只。1～3组小鼠皮下注射1,2-二甲基肼(DMH),剂量20mg/kg体重,每周一次,连续20周。实验结束前,动物分别自由饮用自来水(第一组),水加嗜酸乳酸杆菌酸牛乳(第二组)及水加牛乳(第三组)。第4组和第5组为对照组,动物分别皮下注射1mM EDTA和蒸馏水。 27周诱癌期后,对照组小鼠未发生肿瘤。DMH处理动物中,第2组的结肠癌发生率为44.4％,比第1组(80％)和第3组(100％)明显降低(P<0.05)。此外,实验期间第2组动物的存活率(100％) 比第1组(80％)和第3组(74％)都高。结论是喂饲嗜酸乳酸杆菌(Shahani株)制备的酸牛乳能显著降低DMH诱发的小鼠癌肿和死亡率,而单纯牛乳则能增加。本研究的资料提示,食物中添加活嗜酸乳酸杆菌可能有助于预防结肠癌。

树突状细胞在食管癌T细胞抗肿瘤免疫中的作用

目的：了解食管癌组织中树突状细胞（DCs）在肿瘤浸润性T淋巴细胞激活中的作用。方法：采用免疫组化和RT－PCR的方法，对46例食管癌手术标本中DCs（CD1a）、T细胞亚群（CD3、CD4、CD8、CD25）及共刺激因子B7进行检测。结果：癌组织中的DCs与CD3＋、CD4＋T细胞有相关性，与CD8＋、CD25＋T细胞无明显关系，且B7mRNA表达均为阴性。结论：食管癌中DCs不一定能有效地激活T细胞，其中B7基因表达受抑制，可能是不能有效激活T淋巴细胞，产生免疫耐受的原因之一。

氯化镍对大鼠离体肝脏的毒性研究

应用大鼠离体肝灌流技术，研究了氯化镍对大鼠离体肝脏的毒性损害。结果发现：在１０ｍｍｏｌ／Ｌ氯化镍染毒组即可导致离体大鼠肝脏某些生化指标异常改变，流出液丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），总蛋白（ＴＰ）、白蛋白（ＡＬＢ）的含量显著低于对照组（（Ｐ＜０．０１）。不同剂量染毒组间的ＡＬＴ酶活性呈现明显的剂量－效应和时间－效应关系（ｒ＝０．７４２７，ｒ＝０．５４２１，Ｐ＜０．０１）。ＴＰ、ＡＬＢ含量也呈现明显的剂量－效应关系（ｒ＝－０．７７４９，ｒ＝－０．７４０３，Ｐ＜０．０１）。病理学检查发现，肝细胞明显浊肿变性，并有不同程度的灶性细胞坏死，表明较低剂量的氯化镍即可对离体大鼠肝脏产生毒性作用。

人食管癌癌变过程中细胞核改变的分形分析

目的探索形态定量在病理诊断中的新指标。方法将分形几何引入食管癌研究中，应用“分形分析系统”观察人食管癌癌变发生过程中细胞核的改变。结果发现正常上皮、重增上皮和原位癌细胞核的边界分形维数均大于其拓扑维数，即它们是分形结构，并且重增上皮的分维值大于正常上皮（Ｐ＜００１），原位癌又大于重增上皮（Ｐ＜００１）。结论提示分形维数可定量地描述细胞核形态的不规则程度，分形分析对良。

树突状细胞在食管癌T细胞抗肿瘤免疫中的作用

目的 :研究食管癌组织中树突状细胞 (DCs)在肿瘤浸润性T淋巴细胞激活中的作用。方法 :用免疫组化和RT PCR的方法 ,检测 46例食管癌手术标本中DCs(CD1a)、T细胞亚群 (CD3、CD4、CD8、CD2 5 )及共刺激因子B7。结果 :癌组织中的DCs与CD3(+)、CD4(+)T细胞有相关性 ,与CD8(+)、CD2 5 (+)T细胞无明显关系 ,且B7mRNA表达均为阴性。结论 :食管癌中DCs不一定能有效地激活T细胞 ,其中B7基因表达受抑制 ,可能是不能有效激活T淋巴细胞产生免疫耐受的重要原因之一。

异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法提取组织中的RNA

为寻找一种简便、低消耗、提取高质量ＲＮＡ的方法，基于异硫氰酸胍酚氯仿一步法，省去变性液Ｄ二次溶解ＲＮＡ提取组织中的ＲＮＡ。结果：从２００多例肿瘤组织中提取出高质量的ＲＮＡ，所需费用与购买试剂盒相比节约了７５％。结果提示：异硫氰酸胍酚氯仿一步法是一种简便、经济、适合大量样本的ＲＮＡ提取方法。

人食管鳞状上皮细胞癌变过程中P53基因蛋白产物的表达

选取３５例食管癌手术切除标本，多点取材，使每例中至少含有单纯增生、不典型增生粘膜上皮和癌组织，建立一个食管癌发生的多阶段模型。用免疫组化法检测了Ｐ５３基因蛋白产物在这一过程中的变化，并用ＰＣＲ技术检测了３５例标本中不同病变人乳头状瘤病毒１６、１８和３５型ＤＮＡ的存在状态。结果显示，６０％（２１／３５）的病例存在有Ｐ５３基因蛋白产物的高表达。凡癌组织表达阳性的病例，其对应的单纯增生，不典型增生粘膜上皮也均有不同程度的表达。在Ｐ５３表达阴性的１４例标本中，８例癌旁粘膜上皮显示有ＨＰＶ感染的组织学特征，而Ｐ５３蛋白高表达的２１例标本中仅有４例。但用ＰＣＲ方法３５例中均未检测到ＨＰＶ１６／１８／３５ＤＮＡ的存在。结果表明：Ｐ５３基因蛋白产物的高表达在食管癌的发生中是一个早期生物学标志。

谷胱甘肽硫转移酶同功酶基因在食管癌组织中的表达

采用ＲＮＡ斑点杂交分析方法，对４０例食管癌组织和相对应的正常粘膜组织中谷胱甘肽硫转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴｓ）同功酶基因ＧＳＴπ、ＧＳＴα和ＧＳＴμ基因的表达情况进行研究，结果食管癌组织中ＧＳＴπ基因表达阳性率为７７．５％，在相应的正常粘膜组织中表达的阳性率为９０．０％。在食管癌组织中ＧＳＴα和ＧＳＴμ基因表达水平较低，表达阳性率分别为３５．０％和２０．０％，而正常粘膜组织中ＧＳＴα和ＧＳＴμ基因表达的阳性率分别为２０％和１５％，ＧＳＴｓ在癌组织中表达阳性率与正常粘膜组织相比，Ｐ＞０．０５。ＧＳＴπ基因表达阳性率明显高于ＧＳＴα和ＧＳＴμ基因，Ｐ＜０．０５。结果提示：ＧＳＴｓ同功酶基因在食管癌发生发展中基因转录水平增高，ＧＳＴπ是食管癌中ＧＳＴｓ同功酶存在的主要形式。

食管鳞癌发生过程中p16蛋白表达的变化

为探讨ｐ１６基因在食管癌发生中的意义，用免疫组织化学方法检测了７０例鳞状细胞癌患者的癌旁正常粘膜上皮、不典型增生和癌组织中的ｐ１６蛋白。结果发现：不典型增生组织中的ｐ１６蛋白表达较正常上皮明显下降（Ｐ＜０．０５），而癌组织中的ｐ１６蛋白表达又较不典型增生显著减低（Ｐ＜０．０５）。并且，随着癌分化程度的下降，ｐ１６蛋白阳性率呈下降趋势。低分化者阳性率显著低于高分化者（Ｐ＜０．０５）。结果表明：ｐ１６蛋白表达的变化是食管癌发生中的早期事件，并可能与癌的进展密切相关。

食管鳞癌组织中CD44v4/5的表达及其与浸润转移的关系

用免疫组化ＬＳＡＢ法检测了４２例食管鳞癌中ＣＤ４４ｖ４／５的表达，结果发现：淋巴结转移组的阳性表达率为７６．１９％（１６／２１），而非转移组的阳性表达率为４２．８６（９／２１），两组间差异显著（Ｐ＜０．０５）。从Ⅰ级鳞癌到Ⅲ级鳞癌，其阳性率依次为６９．２３％（９／１３）、６４．７１％（１１／１７）和４１．６７％（５／１２），彼此间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。癌巢周边的癌细胞，肌间浸润的癌细胞，有核分裂的癌细胞和癌栓中的癌细胞及浸润脉管壁的癌细胞均呈强阳性表达。提示：ＣＤ４４ｖ４／５表达与食管鳞癌的浸润和淋巴道、血道转移有关。

原发性食管癌组织中多药抗药性基因1的表达

用ＲＴＰＣＲ方法，定量检测了３０例食管癌和相应切断正常粘膜组织中多药抗药（ＭｕｌｔｉＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）性基因１的表达。结果：癌组织中３３．３％的病例存在ＭＤＲ１基因的表达，而相对应的切断正常粘膜组织中，仅有１３．３％的病例存在ＭＤＲ１基因的表达，皆为低中度表达。Ｐ＜０．０５，２者间差异有显著性。但ＭＤＲ１基因的表达与食管癌临床病理资料如性别、年龄、肿瘤大小、分级、淋巴结转移、ＴＮＭ分期等无关。结果提示：ＭＤＲ１基因的表达在食管癌的发生中起一定的作用，它可能与食管癌的原发性耐药有关。

RT-PCR检测食管鳞癌组织中GST-π基因的表达

为了解原发性食管癌组织中ＧＳＴπ基因的表达情况，用ＲＴＰＣＲ方法定量检测了食管癌组织及相对应的正常食管粘膜组织中ＧＳＴπ基因的表达。结果：在癌组织中ＧＳＴπ基因表达的阳性率为８０．０％，在癌旁正常粘膜组织中为８６．６％。但在癌组织中ＧＳＴπ基因表达的强度大于正常粘膜组织。食管癌组织分化越差，ＧＳＴπ基因阳性表达率越低，Ｐ＜０．０５。结果提示：在原发性食管组织中ＧＳＴπ基因存在较高频率的阳性表达，在食管癌的发生发展中可能起着重要作用。

食管鳞癌组织中抑癌基因p16突变的检测

应用ＰＣＲＳＳＣＰ银染技术检测了４０例食管鳞状细胞癌及癌旁组织中ｐ１６基因的突变情况。结果：１１例（２７．５％）癌组织中有ｐ１６基因突变，其中９例发生在第２外显子，突变率随癌分化程度减低及浆膜浸润和淋巴转移有增高趋势。癌旁粘膜中未发现ｐ１６基因突变。提示：食管鳞癌中存在ｐ１６基因突变，是食管癌发生中的晚期事件，并可能与食管癌的进展与转移有关。

人食管癌发展过程中细胞核分形维数的研究

目的 为了探索形态定量在病理学诊断中的有效指标参数。方法 将分形分析理论引入食管癌研究中，应用“分形分析系统”观察人食管癌发展过程中细胞核的变化。结果 发现各级食管癌细胞核边界的分形维数均大于其拓扑维数，即它们都具有分形特征，并且除原位癌与Ⅰ级鳞癌细胞核分维值之间差异无显著性外，其余各级癌之间分维值的差异都有显著性。结论 提示分形维数可定量地描述细胞核形态的不规则程度，分形分析为肿瘤细胞的病理学鉴别诊断提供了一种定量指标，具有一定实践意义。

食管癌发生中不同标志Langerhans细胞的比较

分别采用组织化学和免疫组织化学方法，观察５７例人食管癌切除标本中ＡＴＰ酶阳性和ｓ１００蛋白阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的形态和分布。结果２种方法均可清晰地显示食管正常粘膜上皮、不典型增生上皮、原位癌及鳞状细胞癌组织中的ＬＣ。ＬＣ的形态随所处组织的病变不同而有所改变。部分与ＬＣ密切接触的癌细胞呈现变性的形态改变。除形态变化外，在不同的病变组织中，ＬＣ的数量均不相同，但２种标志的ＬＣ分布趋势基本吻合，唯ＡＴＰ酶阳性ＬＣ数量更多（Ｐ＜０．０５）。提示ＡＴＰ酶、ｓ１００蛋白２种标志均可较好地显示食管癌发生过程中的ＬＣ，ＬＣ在抗肿瘤免疫过程中起一定的作用。

5-Fu诱导Eca-109细胞凋亡过程中白介素1β转化酶的表达

用５氟尿嘧啶（５Ｆｕ）在体外诱导人食管癌Ｅｃａ１０９细胞凋亡，并用免疫细胞化学方法检测了白介素１β转化酶（ＩＣＥ）在５Ｆｕ作用前后的表达情况。结果表明：①光镜及电镜的形态学方法证实，５Ｆｕ引起细胞死亡的形式为凋亡；②未用药处理的对照细胞ＩＣＥ呈阴性表达，而５Ｆｕ作用后阳性表达的细胞数目增加，表达强度增强。结果提示：ＩＣＥ基因可能参与５Ｆｕ诱导细胞凋亡的调节，ＩＣＥ蛋白介导５Ｆｕ引起的细胞凋亡。

食管癌发生发展过程中c-myc基因表达的原位杂交研究

目的 :探讨食管癌发生发展过程中c myc基因表达的变化。方法 :用原位杂交方法 ,研究 2 1例食管鳞癌和相应癌旁粘膜中c myc基因的表达。结果 :食管正常粘膜、单纯增生、不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级和原位癌的杂交阳性率分别为 12 5 % ,4 4 4 % ,5 2 9% ,5 3 8% ,5 8 3 %和 61 1% ,鳞癌Ⅰ、Ⅱ级分别为 5 0 0 %和 4 0 0 % ,其中单纯增生、不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级、原位癌和鳞癌Ⅱ级的杂交阳性率较正常粘膜差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;正常粘膜阳性杂交信号低于单纯增生至原位癌各病理组织类型 ,癌组织的杂交信号多明显高于相应癌旁粘膜。结论 :c myc基因在食管癌发生发展过程中的单纯增生阶段激活 ,c