Balb/c小鼠左右两侧大脑皮层IL-1β、IL-6含量的不对称性

为探讨左右侧大脑皮层白细胞介素 1β (interleukine 1β,IL 1β)和白细胞介素 6 (interleukine 6 ,IL 6 )的含量状况及与左右侧大脑皮层免疫调控异质性的关系 ,分别取正常及细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)刺激 2h后的Balb/c小鼠的左右侧大脑皮层 ,制备匀浆液 ,用ELISA法检测匀浆液中IL 1β、IL 6的含量。结果显示 ,正常小鼠大脑皮层IL 1β、IL 6含量均为右侧显著高于左侧 ;LPS刺激后 ,左侧大脑皮层IL 6含量明显升高 ,右侧大脑皮层IL 6含量显著高于左侧大脑皮层 ,而左右侧大脑皮层IL 1β含量无明显差异。该实验结果表明 ,Balb/c小鼠在正常生理状态下两侧大脑皮层IL 1β、IL 6含量存在不对称性 。

小鼠血浆TNF-α、NO、NOS水平与脑不对称的关系

研究脑不对称对单核巨噬细胞 (Mo/MФ)的影响。选用雌性 4周龄Balb/c健康小鼠 ,用伸爪取食法根据右利分将小鼠区分为左利、右利和双利三组。细菌脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)腹腔注射两小时后取血浆检测肿瘤坏死因子 α(TNF α)、一氧化氮 (NO)、一氧化氮合酶 (NOS)水平。结果显示 :( 1)各组间血浆TNF α和NO、NOS水平的变化 :正常生理组NO水平为双利组高于左利组 (P <0 0 5 ) ;LPS刺激后双利组和右利组血浆TNF α水平高于左利组 (P <0 0 5 ) ,NO水平为双利组高于右利组 (P <0 0 1)和左利组 (P <0 0 5 ) ,NOS水平在三组小鼠间无明显差别。 ( 2 )血浆TNF α、NO、NOS与右利分有一定的相关关系 ,各项指标随右利分的变化趋势多为双利>右利和左利 ,形成一以双利分段 (右利分为 2 1～ 2 9)为高峰的弓形向上的曲线 ,随右利分的增加或减少曲线向两侧延伸和下降。上述结果提示 ,脑不对称小鼠单核 /巨噬细胞功能存在差异。脑不对称对免疫功能的影响程度与右利分有关 。

小鼠大脑皮质NO水平与脑不对称性的关系

目的 :通过建立脑不对称动物模型 ,探讨大脑皮质一氧化氮 (nitricoxide ,NO)水平与脑不对称性之间的关系。 方法 :选用雌性 4周龄Balb/c健康小鼠 ,用伸爪取食法根据右利分 (rightpawentry ,RPE)将小鼠区分为左利、右利和双利 3组。细菌脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS)腹腔注射 2h后分别取左右侧大脑皮质制作匀浆液 ,采用Greiss重氮化反应法检测其NO水平。 结果 :1)生理状况和LPS刺激下右侧大脑皮质NO水平均高于左侧大脑皮质 (P <0 .0 1)。 2 )脑不对称小鼠 :正常生理组右侧大脑皮质NO水平为双利组显著高于右利组和左利组 ,左侧皮质为双利组显著高于右利组 (P <0 .0 5 ) ;LPS刺激后左右侧大脑皮质NO水平在左利、双利和右利 3组小鼠间无明显差异。 3)大脑皮质NO水平与小鼠右利分有一定的相关性 ,其随右利分的变化趋势多为双利 >右利和左利 ,形成一以双利小鼠为高峰的倒U形曲线。 结论 :大脑皮质NO水平与脑不对称性有一定的相关性 ,且与脑不对称的程度有关。

危险模式与免疫耐受

传统认为免疫系统具有区分自我与非自我的能力 ,但最近提出的危险模式认为免疫系统只能区分危险信号的有无 ,从而打破了新生期同种耐受理论 ,对肿瘤、移植、自身反应等做出了新的解释。本文就危险模式、危险信号、打破新生期同种耐受理论的实验依据及危险模式的意义作一综述。

转化生长因子β与移植免疫

转化生长因子 β具有促进和抑制细胞增殖的双向作用 ,在免疫系统中表现出负调节因子效应 ,近年TGF β用于器官移植免疫抑制的研究较为活跃 ,其可通过抑制MHC抗原表达、干扰树突状细胞的分化成熟诱导供体特异体的免疫耐受 ,通过影响造血细胞、T细胞、B细胞、巨噬细胞。

中国华南地区局部变应性鼻炎患者的临床特征

【目的】探讨局部变应性鼻炎患者在中国华南地区的临床特征,为临床上对局部变应性鼻炎(LAR)诊治提供理论基础。【方法】收集63例临床表现符合鼻炎的患者的病例资料、血清及鼻腔分泌物,并检测血清及鼻腔分泌物中4种变应原特异性Ig E水平,比较LAR在发病情况、病史、相关症状评分、变应原等方面与变应性鼻炎(AR)、非变应性鼻炎(NAR)的异同点。【结果】63位鼻炎患者中有9位(14.3%)能诊断为LAR,患者年龄平均40(S=15)岁,鼻部或/和眼部症状的病史大多超过10年,过敏性结膜炎和支气管哮喘为常见的并发症。LAR比NAR患者的鼻痒症状评分显著性升高(P=0.011),且具有更高的总眼部症状评分(P=0.008)。AR比LAR患者更倾向于对屋尘螨及粉尘螨过敏(P<0.001),而LAR患者比AR患者倾向于对花粉过敏(P<0.001)。LAR患者鼻腔分泌物s Ig E水平比AR患者低,差异有统计学意义(P=0.003)。【结论】在中国华南地区约1/7的鼻炎患者可能存在LAR。通过鼻部及眼部症状评分可初步对LAR与NAR鉴别,对高度怀疑由过敏因素导致的NAR可进行鼻腔分泌物s Ig E检测。

鼻内镜鼻窦手术致眼外肌损伤的临床特征分析

【目的】分析鼻内镜鼻窦手术源性眼外肌损伤的特征和探讨预防措施。【方法】通过临床观察、影像学检查,记录和分析损伤部位、损伤后的临床特征、损伤部位与临床特征的关系、是否伴有解剖学异常等情况,分析5年来因慢性鼻-鼻窦炎行鼻内镜鼻窦开放术造成的眼外肌损害的临床特征。【结果】诊断为鼻内镜手术眼外肌损伤患者共11例,其中右眼损伤8例,左眼损伤3例。7例损伤位置在眶内侧壁纸样板中1/3,3例在后1/3,1例在中、后1/3同时损伤。受损眼外肌依次为内直肌9例,上斜肌1例,内直肌、下直肌同时损伤1例。有5例合并视神经损伤。主要临床表现为:①视力改变:其中复视6例,患眼无光感4例;②活动障碍:眼球向内侧活动障碍7例,向内、下方活动障碍1例,向内上方活动障碍1例,眼球固定2例;③眼球移位:向外侧移位8例,眼球内陷2例,眼球外突1例。【结论】鼻内镜鼻窦开放术后发生的眼外肌损伤并发症,最易受损的是内直肌,右侧较左侧更容易损伤;眶内侧后1/3损伤容易合并视神经损伤;最常见的临床症状是眼球活动障碍。

Balb/c小鼠脑不对称性与其腹腔巨噬细胞分泌IL-1β,NO间关系的研究

通过建立脑不对称动物模型 ,探讨脑不对称性对小鼠单核巨噬细胞产生炎性因子的影响。用伸爪取食法区分出左利、右利、双利小鼠 ,细菌脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)体内刺激 2h后取小鼠腹腔巨噬细胞在体外LPS刺激下培养 ,2 4h后收集培养上清测定巨噬细胞产生白细胞介素 (interlukine 1β,IL 1β)、一氧化氮 (nitricox ide ,NO)水平。体内经LPS刺激的小鼠双利组和右利组IL 1(水平均显著高于左利组 ,双利组IL 1(水平高于右利组 ;未经体内LPS刺激的三组小鼠腹腔巨噬细胞产生NO水平相似 ,经体内LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的量为双利 >右利 >左利 ,其中双利组NO水平明显高于左利组 (P <0 .0 1)。脑不对称可影响下丘脑 垂体 肾上腺 单核巨噬细胞 (HPA MO/Mφ)调节环路。

2型固有免疫细胞在过敏性及非过敏性哮喘中的临床意义

【目的】观察过敏性及非过敏性哮喘发病过程中2型固有免疫细胞(ILC2)的差异,探讨ILC2与哮喘临床评价指标的相关性。【方法】研究对象来自我院2017年6月至2018年1月的过敏性和非过敏性哮喘患者,收集相应临床基线资料并评估病情、进行血常规、肺功能等检查;应用流式细胞术检测外周血ILC2;通过ELISA和多因子检测分别测定总Ig E及s Ig E和Th2型细胞因子。【结果】哮喘(Asthma)组的ILC2比例和计数与嗜酸性粒细胞(EOS)计数及s Ig E正相关(r=0.37,0.32,0.56,0.57;P<0.01~=0.04);过敏性哮喘(AA)组的ILC2比例和计数为0.04(0.03~0.11)%和338(255~778)cells/m L,均高于非过敏性哮喘(NAA)组的0.01(0.01~0.02)%及89(0~169)cells/m L(P<0.01);中/重度患者ILC2比例为(0.10±0.08)%,高于间歇/轻度患者的(0.04±0.01)%(P=0.04);AA组中ILC2比例和计数与FEV1/FVC呈负相关(r=-0.61,-0.56;P<或=0.01)。【结论】ILC2参与过敏性哮喘的发病机制,与EOS表型、过敏炎症反应和病情严重程度相关,可作为过敏性哮喘的有效评价指标之一,为过敏性哮喘的治疗提供新方向。

成年小鼠嗅觉功能与嗅上皮中成熟嗅觉神经元数量的实验研究

目的探讨成年BALB，C小鼠维持嗅觉功能所需嗅上皮中成熟嗅神经元的数量，研究小鼠嗅上皮中嗅神经元数量与小鼠嗅觉功能的相关性。方法用0．7％的TritonX-100灌注8-10周大小的BALB／C小鼠鼻腔以诱导小鼠嗅觉障碍，分别于灌鼻后第3，7，21，49，56天行觅食实验检测小鼠觅食行为的改变，并联合免疫荧光染色（1FC）的方法，检测小鼠嗅上皮（OE）中成熟嗅神经元（ORNs）的数量与其嗅觉功能的相关性。结果小鼠经TritonX．100灌注鼻腔后第3、7天，其觅食时间明显延长（F=32．04，P〈0．001），Bonferroni法两两比较示第3，7天觅食时间均长于对照组及造模后第21、49、56天组，P〈0．001差异有统计学意义。嗅上皮中成熟嗅神经元（0RNs）的数量亦于第3、7天为低（F=223．97，P〈0．001），觅食时间与嗅上皮成熟ORNs的数量呈负相关（r=-0．757，P〈0．001）。小鼠嗅觉障碍于造模后第21天左右开始恢复，此时嗅上皮中0MP（＋）细胞占28．66％。结论小鼠嗅觉功能与其嗅上皮中成熟ORNs数量具有明显的相关性；当成年BALB／C小鼠嗅上皮中成熟ORNs数量恢复至对照组的28．66％时即可使小鼠嗅觉功能得以恢复。

TritonX-100诱导嗅觉障碍后小鼠嗅上皮结构和嗅觉功能的改变及两者的相关性

【目的】用TritonX-100(TX)诱导一种嗅觉障碍模型,观察不同时点嗅上皮的组织学改变和小鼠嗅觉功能的变化,并对两者进行相关性分析。【方法】用0.7%的TX对8～10周的BALB/C小鼠灌鼻以诱导小鼠嗅觉障碍,分别于灌鼻后第3、7、21、49、56天行觅食实验,以觅食时间的长短评估小鼠嗅觉功能的改变;用免疫组织化学染色(IHC)的方法,检测小鼠嗅上皮(OE)中成熟嗅神经元(ORN)数量、嗅上皮厚度、嗅上皮细胞总数的变化;并对小鼠觅食时间的改变和嗅上皮中成熟嗅神经元数量的变化行相关性分析。【结果】TX诱导小鼠嗅觉障碍后,第3～7天时,小鼠嗅上皮中成熟ORN的数量急剧下降,嗅上皮的厚度变薄,细胞总数明显减少,小鼠觅食时间显著延长。第21天时,嗅上皮中成熟ORN开始增多,嗅上皮厚度开始恢复,嗅上皮中有大量新生细胞形成,以嗅觉标记蛋白(OMP)阴性细胞为主。此时小鼠嗅觉功能部分恢复,但觅食时间仍长于对照组。第49～56天时,小鼠嗅上皮中ORN数量、嗅上皮厚度、细胞总数及觅食时间恢复至正常水平。小鼠觅食时间与其嗅上皮中成熟ORN数量具有明显的相关性(r=-0.757,P<0.001)。【结论】联合运用行为学及组织化学的方法,可有效地评估小鼠嗅觉功能;用TX可成功诱导小鼠嗅觉障碍模型,该模型简便、稳定、可靠,具有可恢复的特点。

ILC2通过激活STAT6和分泌IL-13调节慢性肾功能衰竭患者的免疫功能

目的:探讨Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)在慢性肾衰发生发展中的作用及其可能机制。方法:选择中山大学附属第一医院2016年3月~2016年12月入院的慢性肾功能衰竭患者36例,选取同期健康体检者32例为对照。流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中ILC2的比例;ELISA技术检测血浆中白细胞介素(IL)-13的浓度;提取慢性肾衰患者及健康对照者PBMC后分别分为3组(对照组、细胞因子刺激组、干预组)进行体外培养3 d后,ELISA法测定上清液中IL-13浓度;Western blot法对健康对照者PBMC在刺激前及刺激后15 min、30 min、1 h、2 h的转录活化因子6(STAT6)的磷酸化水平进行检测。结果:慢性肾功能衰竭患者PBMC中ILC2比例及血浆IL-13浓度均较健康人高(P<0.05);体外培养上清液中,慢性肾功能衰竭患者的3个亚组中IL-13浓度均较健康人高(P<0.05),且2类人群中均呈现出细胞因子刺激组较对照组升高,干预组较细胞因子刺激组降低的现象;Western blot结果显示p-STAT6的蛋白水平随时间的延长逐渐增高。结论:慢性肾衰患者外周血中ILC2的比例升高,同时ILC2内STAT6活化并分泌大量IL-13,介导Th2细胞的极化而调节免疫。

Balb/c与DO11.10小鼠哮喘模型的建立

背景:哮喘的发病率逐年增高,建立和完善可以反映这种疾病的动物模型对于疾病研究具有重大意义。目的:探讨Balb/c与DO11.10小鼠哮喘模型的诱导方法,比较两者的差异。方法:24只Balb/c小鼠按随机数字表法等分为A-D组;用同样的方法把24只DO11.10小鼠等分为E-H组。A和E组小鼠第1天以PBS致敏,第8-11天以PBS雾化;B和F组小鼠第1天以卵清蛋白致敏,第8-11天以卵清蛋白雾化;C、G组小鼠第1,7,14天以PBS致敏,第22-25天以PBS雾化;D和H组小鼠第1,7,14天以卵清蛋白致敏,第22-25天以卵清蛋白雾化。结果与结论:1次致敏加上4次雾化只能引起Balb/c小鼠轻度的炎症反应,在经历3次致敏和4次雾化后Balb/c小鼠出现了气道反应性增高,肺部炎症细胞浸润,支气管杯状上皮黏液分泌增加,肺泡灌洗液炎症细胞和嗜酸性粒细胞数量显著上升,同时肺泡灌洗液中Th2型细胞因子水平也升高。DO11.10小鼠经过1次致敏和4次雾化即出现了显著的炎症反应,值得注意的是,其肺泡灌洗液中性粒细胞的数量也显著上升;而在经过3次致敏和4次雾化后,DO11.10小鼠炎症反应反而明显减轻。提示卵清蛋白可成功诱导出Balb/c和DO11.10小鼠的哮喘模型,不过两者在诱导方案和病理表现上有所差异。

间充质干细胞对哮喘模型小鼠的免疫调节作用:局部与全身应用效果不同

背景:研究显示间充质干细胞移植可以减轻呼吸道变应性炎症的相关症状,然而尚无不同移植途径下间充质干细胞对哮喘疗效的比较。目的:观察间充质干细胞不同应用方式对小鼠哮喘模型的免疫调节作用的区别。方法:Balb/c小鼠72只进行3次独立的实验,每次24只。将24只小鼠按随机数字表法等分为对照组、模型组、全身应用组和局部应用组。模型组、全身应用组和局部应用组小鼠分别在第1,7,14天以进行3次卵清蛋白腹腔注射致敏,第22-26天卵清白蛋白溶液持续雾化吸入30 min,连续激发5 d。全身应用组和局部应用组小鼠于雾化前1 d分别经尾静脉注入200μL间充质干细胞混悬液(5×109 L-1)和气管注入50μL间充质干细胞混悬液(2×1010 L-1)。结果与结论:与正常组相比,模型组小鼠气道炎症反应显著增强,间充质干细胞的全身应用可以下调气道高反应,降低肺泡灌洗液中炎症细胞数量,减轻肺组织中的炎症浸润,抑制血清中卵清白蛋白特异性IgE的分泌,降低肺泡灌洗液中Th2型细胞因子的水平;而间充质干细胞的局部应用对上诉症状无改善。间充质干细胞的全身应用可有效减轻哮喘小鼠的气道炎症反应,而其局部应用无改善作用。提示间充质干细胞不适合采用经气管内注射的应用方式,可能需经全身血循环发挥免疫调节作用。

变应性鼻炎患者血浆细胞外囊泡对树突状细胞和巨噬细胞的调控作用

【目的】树突状细胞(DCs)和巨噬细胞(Mφ)在变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的发病过程中起重要调控作用。本研究主要探讨AR血浆细胞外囊泡(EVs)对DCs和Mφ分化的调控作用。【方法】招募健康志愿者(HC)和AR患者各6人,应用超速离心法制备HC-EVs和AR-EVs;将磁珠分选所得人CD14^(+)单核细胞在体外分别诱导分化成DCs和Mφ,并用5×10^(8)/mL HC-EVs和AR-EVs分别对单核细胞、DCs和Mφ进行刺激,通过ELISA、聚合酶链反应(PCR)或流式分析的方法进行分析。【结果】流式分析表明,与HC-EVs相比,AR-EVs刺激CD14^(+)单核细胞5天后,单核细胞表面CD14、CD68、CD80和CD86表达水平均无显著差异。用AR-EVs刺激不成熟DCs(iDC)2天后,iDC表面HLA-DR、CD40和CD80表达水平亦无显著差异。用AR-EVs刺激Mφ2天后,PCR显示Mφ中IL-6(P<0.001)和TNF-α(P<0.05)的表达水平显著下降,TGM2的表达水平显著上升(P<0.05),而MRC1和IL-10的表达水平则无显著变化。【结论】AR-EVs可显著促进Mφ向促炎的M2型极化,抑制Mφ向M1型极化,但AR-EVs对CD14^(+)单核细胞向DCs和Mφ分化及DCs的成熟均无明显作用,这提示血浆EVs可能通过调控Mφ的极化促进AR的发生发展。

2型固有淋巴细胞主导的小鼠呼吸道变应性炎症模型的建立

【目的】应用野生型C57BL/6小鼠和T/B细胞缺陷的Rag1-/-小鼠建立以2型固有淋巴细胞(ILC2)为主导的小鼠呼吸道变应性炎症模型。【方法】分别将雌性C57BL/6小鼠和Rag1-/-小鼠随机平均分为对照组和实验组,并分别于第1、3、5天经气道滴注给予20μL ddH2O或含1μg IL-33的ddH2O。第6天处死小鼠后收集肺泡灌洗液和肺组织,通过病理染色及流式检测炎症细胞浸润,通过酶联免疫吸附实验检测细胞因子水平及应用流式检测ILC2水平。【结果】C57BL/6和Rag1-/-模型组小鼠较对照组小鼠均表现出显著的以嗜酸性粒细胞浸润为主的肺部炎症(P<0.05)和气道杯状细胞化生(P<0.05)。支气管灌洗液中嗜酸性粒细胞(P<0.05)和嗜中性粒细胞(P<0.05)的数量,以及Th2型细胞因子IL-5(P<0.05)和IL-13(P<0.05)的表达水平也显著升高。此外,肺组织中ILC2的水平均较对照组明显升高(P<0.05)。【结论】本研究成功地在C57BL/6小鼠和Rag1-/-小鼠中建立了以ILC2为主导的小鼠呼吸道变应性炎症模型,为研究ILC2在哮喘及变应性鼻炎中的作用提供了重要途径。

医学微生物学实验教学实践与体会

医学微生物学是一门连接基础医学与临床医学的桥梁课程,是实践性较强的基础学科之一。实验的目的在于加强学生能力的培养,通过实验课进行专业基本技能训练,培养学生发现问题、分析问题和解决问题的能力;同时,通过实验加深和巩固对理论内容的理解和体会。实验课教学亦是学生将理论知识转化为临床实验应用的关键。但医学微生物学实验较基础医学其它实验课又有着份量重、内容繁琐等特点,这也赋予了本学科实验教学一定的特殊性。本文就本校实验教学安排状况、如何有效提高实验课效率及学生学习过程中存在的问题做一分析概括。