鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂的提取工艺研究

目的研究鹰嘴豆中胰蛋白酶抑制剂的最佳提取条件。方法以提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标,采用正交实验法对提取温度(A)、溶剂用量(B)、pH值(C)、提取时间(D)4个因素进行优选,并对优选的提取方案进行验证。结果在所选水平范围内,因素C和B对提取效果有显著的影响,因素D和A影响不显著。结论该文属国内首次关于鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂成分的研究报告,其有效部位的最佳提取工艺为C1B3D1A3。

鱼腥草蛋白酶抑制剂的分离和纯化

目的以鱼腥草为材料,研究鱼腥草蛋白酶抑制剂(HCTI)的分离提取工艺。方法 HCTI的最佳粗提条件是采用pH7.0的双蒸水为提取溶剂,在体积比为1:30,45℃条件下浸提2.0h,提取2次。硫酸铵部分沉淀后,再经DEAE-52离子交换层析柱纯化。结果粗提液经45%～60%饱和度的硫酸铵沉淀比活力最高,经过DEAE-52离子交换层析柱梯度洗脱后,检测到HCTI活性峰。结论用DEAE-52离子交换层析柱可分离纯化HCTI,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,计算出该HCTI的分子量约为28KDa。

鹰嘴豆种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与鉴定

为了寻找具有药物作用的天然胰蛋白酶抑制物,采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析(DEAE-纤维素52)及Sephadex G-100凝胶层析等方法,从鹰嘴豆种子中分离出一种鹰嘴豆胰蛋白酶抑制剂(CPTI).研究表明:CPTI对胰蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率达80%,而对胰凝乳蛋白酶抑制作用较弱,抑制率为32%,对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶及枯草杆菌蛋白酶均无抑制作用;用SDS-PAGE测得CPTI近似分子质量为25.7 kD;CPTI具有较高的热稳定性,在100℃下加热60min,对胰蛋白酶活性仍保持78%抑制率;Lineveaer-Burk作图得知该抑制剂属竞争性抑制类型.动力学测定显示,来自鹰嘴豆中的CPTI对胰蛋白酶的抑制作用常数(Ki)为3.99×10-7 mol/L.