巢式-荧光定量PCR技术快速检测生殖支原体

目的建立生殖支原体巢式-荧光定量PCR快速检测技术。方法针对生殖支原体MgPa基因的保守片段(1414~1561bp),利用Primer express3.0设计引物及探针,巢式PCR扩增临床样本,纯化后克隆到载体,制备阳性标准品。优化PCR反应条件,研究其特异性、灵敏性和重现性。结果构建了含MgPa基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在101~109拷贝数之间有较好的线性关系。该方法检测阳性率高达15.4%,能特异性检测生殖支原体,而人型支原体、解脲脲原体、沙眼衣原体等检测为阴性;灵敏度高,可检测到10个拷贝数;3组重复试验的变异系数均小于3%。结论本研究建立了生殖支原体的快速检测技术,具有检测阳性率高、特异性强、灵敏度高、重现性好等特点。

沙眼衣原体荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立沙眼衣原体实时荧光定量PCR检测技术,以期用于沙眼衣原体的感染检测。方法针对沙眼衣原体ompA基因序列保守区域设计引物和TaqMan探针,构建标准质粒并制作标准曲线,建立沙眼衣原体实时荧光定量检测方法,通过对人型支原体等的检测评价方法的特异性。结果建立的沙眼衣原体荧光定量PCR体系能特异性检测沙眼衣原体,与人型支原体、解脲脲原体、淋球菌、大肠埃希菌EDL933、金黄色葡萄球菌无交叉反应;标准曲线在3.9×109～3.9×103 copies/μl之间线性关系良好(r2=0.99);方法的灵敏度高,检测最低拷贝数为3.9copies/μl;组内及组间变异系数均<5%。结论建立的检测沙眼衣原体实时定量PCR方法特异、灵敏,可用于沙眼衣原体感染的早期筛查和临床快速诊断。

植物耀素凝胶对阴道常见微生物生长的影响

目的研究植物耀素凝胶对阴道常见微生物生长增殖的影响,为阴道炎症的预防提供理论依据。方法将植物耀素凝胶加入培养基中,采用比浊法和菌落计数测定其对微生物生长的影响;采用3,5-二硝基水杨酸法测定不同微生物对培养基中的碳源消耗量;通过菌落计数测定植物耀素凝胶对混合培养的鼠李糖乳杆菌和致病菌生长的影响。结果单独培养条件下,植物耀素凝胶可促进鼠李糖乳杆菌生长,其活菌浓度由(1.79±0.42)×10^(9) CFU/mL增加至(8.27±1.80)×10^(9) CFU/ml(P<0.01);抑制其他微生物生长,其中大肠埃希菌活菌浓度由(3.06±1.54)×10^(9) CFU/ml降至(9.40±0.07)×10^(3) CFU/ml(P<0.01),阴道加德纳菌活菌浓度由(3.34±1.02)×10^(7) CFU/ml降至(1.98±0.98)×10^(5) CFU/ml(P<0.01),白色假丝酵母菌生长活菌浓度由(3.00±1.17)×10^(7) CFU/ml降至(75.00±0.11)CFU/ml(P<0.001),干燥棒状杆菌无单菌落生长。鼠李糖乳杆菌对培养基中碳源相对消耗量为50.26%,呈中等消耗程度,其余菌对碳源消耗量为低或基本无消耗;混合培养条件下,植物耀素凝胶促进鼠李糖乳杆菌生长(P<0.05),进而抑制其他微生物生长:金黄色葡萄球菌活菌浓度由(4.39±0.45)×10^(15) CFU/ml降至(2.05±0.22)×10^(12) CFU/ml(P<0.01),大肠埃希菌活菌浓度由(1.27±0.70)×10^(9) CFU/ml降至(6.95±2.75)×10^(5) CFU/ml(P<0.01),干燥棒状杆菌无单菌落生长,白色假丝酵母菌活菌浓度由(3.95±1.72)×10^(7) CFU/ml降至(1.95±0.26)×10^(5) CFU/ml(P<0.01)。结论植物耀素凝胶能促进鼠李糖乳杆菌生长,从而抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、干燥棒状杆菌和白色假丝酵母菌的生长,有利于维持阴道微生态平衡,可应用于阴道炎症预防。