醒神通督针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬的作用研究

目的从自噬探讨醒神通督针刺抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组(简称模型组)和脑缺血再灌注+醒神通督针刺组(简称针刺组)。采用大脑中动脉线栓法构建脑缺血再灌注损伤模型,针刺组大鼠造模前5 d开始干预,取穴“百会”“四神聪”“足三里”,每日针刺1次,直至再灌注24 h。另外2组大鼠只抓取不针刺。再灌注24 h后采用氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察脑梗死面积,透射电镜观察神经元及自噬的亚显微结构,Western blot、免疫荧光检测缺血皮层微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3)、肌球蛋白样BCL2结合蛋白(coiled coil moesin like BCL2 interacting protein,Beclin-1)、自噬相关蛋白(autophagy related protein,Atg)12、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)与磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠大脑中动脉供血区梗死面积明显增加(P<0.05),且缺血皮层神经元结构严重破坏,自噬明显激活,自噬蛋白Beclin-1、Atg12表达及LC3Ⅱ/I比值显著升高(P<0.05),p-Akt表达下降(P<0.05)。与模型组比较,针刺组大鼠脑梗死面积减少(P<0.05),透射电镜显示神经元结构较为正常,自噬体较少。此外,针刺组自噬蛋白Beclin-1、Atg12表达及LC3Ⅱ/I比值明显降低(P<0.05),p-Akt表达显著上调(P<0.05)。结论针刺具有抗脑缺血再灌注损伤作用,可能通过抑制自噬的活化实现。

急性脑缺血/再灌注损伤后神经元细胞骨架蛋白的动态变化

目的探讨急性脑缺血/再灌注大鼠神经元细胞骨架蛋白时空动态变化。方法线栓法阻断大鼠大脑中动脉90 min后实现再灌注,在不同再灌注时间点观察及取材。尼氏染色观察神经细胞损伤,采用神经功能缺损评分和前肢放置实验评估神经功能;免疫组化染色、免疫印迹法观察细胞骨架成分微管相关蛋白2(microtubule associated protein 2,MAP2)、神经丝重链(neurofilament heavy chain,NF-H)的变化;透射电镜观察轴突、树突和神经丝亚显微结构。结果随着再灌注时间的延长,脑损伤和神经行为功能损害逐渐加重。纹状体损伤比皮层出现的更早、更严重。缺血区域的MAP2相关免疫反应强度降低,NF-H相关免疫反应强度升高。超微结构观察显示细胞骨架排列受损,密度降低。结论不同脑区对缺血/再灌注损伤的耐受性不同。神经元细胞骨架的主要成分对缺血和再灌注表现出动态反应,这可能进一步促进脑损伤和神经功能缺损。

小续命汤对OGD/R诱导HT22细胞损伤后突触可塑性的影响

目的:探讨小续命汤(XXMD)对缺血性脑卒中后脑缺血再灌注损伤突触可塑性的影响。方法:体外建立小鼠海马神经元(HT22细胞)氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,模拟脑缺血性脑卒中后海马神经元缺血再灌注损伤。采用CCK-8法检测HT22细胞活力,筛选XXMD最佳作用浓度。将HT22细胞随机分为对照组、OGD/R组和OGD/R+XXMD组,倒置荧光显微镜观察各组细胞形态变化,ELISA法测定细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平,透射电镜观察细胞超微结构改变,免疫荧光染色检测神经元标志物Neu N及突触相关蛋白NF200和MAP2的荧光强度,Western blot检测各组细胞中NF200和MAP2蛋白表达水平。结果:XXMD在浓度为100 mg/L时细胞活力最强(P<0.05)。与对照组相比,模型组细胞变圆皱缩,线粒体呈现肿胀甚至空泡样改变,活力明显下降(P<0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α含量升高(P<0.05),NF200和MAP2的荧光强度及蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。而XXMD可改善细胞形态及超微结构,提升生存率(P<0.05),降低炎症因子水平(P<0.05)。免疫荧光染色及Western blot结果显示,与模型组相比,OGD/R+XXMD组可以增强NF200和MAP2平均荧光强度(P<0.05),提升蛋白表达水平(P<0.05)。结论:XXMD可以减轻OGD/R诱导的HT22细胞损伤,其机制可能涉及减轻炎症反应和增强突触可塑性。

脑缺血/再灌注损伤后大鼠不同时间点神经细胞的动态变化

目的通过建立脑缺血/再灌注损伤模型,探讨急性CIRI后不同时间点神经细胞的动态变化规律。方法将SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,分别为假手术组(Sham)和脑缺血/再灌注损伤(IR)不同时间点组。采用大脑中动脉线栓法(MCAO)建立局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,采用Longa评分法评估大鼠神经行为评分,模型制备成功后,常规方法制作石蜡切片,进行TUNEL染色和免疫组织化学染色观察细胞凋亡,采用NeuN抗体进行免疫染色观察神经元细胞存活率,采用免疫组织化学法对星形胶质细胞标志物GFAP、小胶质细胞标志物IBA-1、内皮细胞标志物CD31进行染色,在不同时间点观察各组不同细胞的变化规律。结果假手术组的大鼠神经细胞在不同时间点未见明显变化,在脑缺血/再灌注损伤不同时间点组,细胞凋亡在IR3h被激活,且随着时间的延长,凋亡细胞数量增多且伴随形态学的破坏;NeuN+神经元在IR3h后出现缺血损伤的迹象,细胞形态异常,在24 h时最为严重;GFAP+星形胶质细胞在IR3h后急剧减少,IR6h标记不良星形胶质细胞数增加,到24、48 h星形胶质细胞在梗死区基本消失。IR3h IBA-1+小胶质细胞阳性细胞数减少,IR6h IBA-1+小胶质细胞体积增大,IR12h梗死区小胶质细胞死亡。CD31+内皮细胞在IR3h后在梗死周围皮层和纹状体明显增加,并持续到48 h。结论脑缺血/再灌注损伤后,凋亡细胞的数量随着时间延长而增加,NeuN+神经元细胞在24 h损伤最重;梗死周围皮层GFAP+星形胶质细胞、小胶质细胞随着时间增长而逐渐死亡;CD31+内皮细胞数量在再灌注3 h后在梗死周围皮层和纹状体明显增加,并持续到48 h。

急性脑缺血/再灌注后细胞病理改变及星形胶质细胞活化规律

目的观察脑缺血/再灌注后不同时间点细胞病理改变及星形胶质细胞活化的规律。方法本实验共采用85只SD雄性SPF级大鼠,将其随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞90 min再灌注不同时间点组,后者分为再灌注3、6、12、24、48 h组。HE染色观察细胞病理改变,采用透射电镜观察脑缺血/再灌注后星形胶质细胞的亚显微结构,免疫印迹联免疫荧光法检测脑缺血/再灌注损伤后的GFAP表达。结果脑缺血/再灌注后不同时间点可导致神经细胞发生不同程度的缺血/再灌注损伤,再灌注后24 h细胞损伤最为严重。透射电镜结果提示星形胶质细胞亚显微结构发生改变,细胞出现不同程度肿胀,线粒体嵴断裂等。脑缺血/再灌注后在缺血区GFAP表达呈时间依赖性逐渐升高,再灌注48 h后表达最高,而在梗死区表达逐渐减少。结论脑缺血/再灌注后24 h神经细胞损伤最重,缺血半暗带区的星形胶质细胞形态发生变化,星形胶质细胞激活,伴随再灌注的推移,梗死区、缺血区边界逐渐清晰,可能出现胶质瘢痕。

马云枝从脾胃升降论治脑动脉狭窄经验

脑动脉狭窄最常见的病因为动脉粥样硬化。全国名老中医马云枝教授认为本病为本虚标实之证,提出脾胃虚弱、升降失职为发病之源,痰浊、瘀血、热毒为致病之标,三焦功能失常为发病的关键环节;治疗上以升清降浊、健脾和胃、调畅三焦为基本治法,佐以化痰、祛瘀、清热解毒,为本病治疗提供了新思路。

基于表观遗传学调控的中医药治疗中风研究进展

表观遗传学是分子生物学的一个分支,表观遗传修饰在缺血性卒中病理学进展中起着核心作用。表观遗传机制参与调节中风后基因表达、细胞损伤反应、运动功能和认知能力的复杂而动态的过程,是阐释中医药治疗缺血性卒中的靶点及其作用机制的有效途径。目前,缺血性卒中的病因病机尚未完全明确,现代医学治疗尚有不足,而中药在治疗缺血性脑卒中方面具有独特的优势,具有多层次、多靶点的整体调节作用。最新研究发现,中医药能参与调控异常表观遗传修饰治疗中风。本文主要围绕中风病中医理论基础,从DNA甲基化、非编码RNA及组蛋白修饰三个方面在中风治疗及中医药研究中的应用入手,阐释中医药治疗中风的表观遗传作用,以期为今后抗脑缺血中药的研究开发提供参考依据。

脑缺血后突触可塑性与神经胶质细胞相互调控在神经修复中的作用

脑卒中是具有较高病死率和致残率的疾病,呈现逐年上升和年轻化趋势,严重危害健康。缺血性卒中主要是由于缺血和缺氧造成神经细胞的损伤,最终导致大脑功能的丧失,且治疗选择有限。目前认为突触可塑性是局灶性缺血后神经恢复的重要过程,神经胶质细胞与突触可塑性密切相关,若能深入了解神经元突触可塑性的作用、神经胶质细胞与突触可塑性相互调控机制,则可能对脑缺血后功能恢复提供一定的帮助。本文就突触可塑性、神经胶质细胞与突触可塑性相互调控作用进行综述,以期为治疗脑缺血后神经功能损伤提供理论支持。

星形胶质细胞外囊泡在缺血性脑卒中的保护作用

缺血性脑卒中是指各种脑血管病变所致脑部血液供应障碍,导致局部脑组织缺血、缺氧性坏死,而迅速出现相应神经功能缺损的一类临床综合征,对病人本身、其家庭和社会造成很大的负担。星形胶质细胞外囊泡中包含有细胞生长因子、蛋白质、miRNAs等多种成分,通过与内皮细胞受体结合、转移至神经元及被神经元摄取等方式参与脑细胞间通讯,促进脑缺血后神经发生、血管新生,对脑缺血后损伤的神经元有着保护作用,成为中枢神经系统疾病潜在的治疗和预防靶点。本文对星形胶质细胞外囊泡的内容物以及其对缺血性脑卒中的保护作用进行综述,以期为临床研究新的治疗策略提供理论依据。

缺血性脑卒中神经元死亡机制

脑卒中为全球第二大死亡原因,其中60%~80%为缺血性脑卒中。缺血性脑卒中发生后会不可避免引起核心区域神经元的损伤,随着缺血时间的增加,缺血半暗带的其他神经元也会因失去“信号连接”而死亡,并进一步引发机体功能障碍。鉴于缺血性脑卒中发生后神经元死亡机制的复杂性,了解死亡机制的作用原理,可以更好地挽救缺血半暗带神经元细胞。该综述针对几种主要的缺血性脑卒中神经元死亡机制及其潜在治疗靶点进行阐述,为作用机制研究的进一步完善和药物的开发提供依据和帮助。

神经细胞缺氧/复氧体外模型的研究进展

缺血性脑卒中是世界人口第二大死亡原因和第三大致残原因,发病率在全球范围内逐年增加。缺血性脑卒中经过血液再通治疗后会引起缺血/再灌注损伤,而缺血/再灌注损伤的机制目前仍不是十分明确,因此,构建具有其特性的临床前模型十分必要。鉴于动物模型研究的复杂性和体外脑切片培养的局限性,体外细胞模型成为了简化而有价值的工具。该文对目前常用的神经细胞以及缺血/再灌注体外模型的构建方法、构建原理及相关研究进展进行阐述,以期为合理选择缺氧/复氧细胞模型进行脑缺血/再灌注的基础研究与药物筛选提供参考和依据。

基于网络药理学和分子对接分析小续命汤治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的:基于网络药理学和分子对接探讨中药复方小汤治疗阿尔茨海默病的有效成分、潜在靶点及作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)收集小续命汤中药物的有效化学成分及蛋白质靶点,并在UniProt数据库中进行基因名称转换,从在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、基因名片(GeneCard)数据库中寻找阿尔茨海默病相关的疾病靶点。取小续命汤和阿尔茨海默病的交集靶点,并利用STRING数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络,通过Cytoscape 3.7.2拓扑方法分析并获得关键靶点。在Metascape数据库对交集靶点进行基因本体(GO)分析与京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,构建药物-成分-作用靶点-疾病网络图,将关键活性成分与关键靶点利用AutoDock Vina软件进行分子对接验证。结果:筛选出小续命汤活性成分182种,基因272个,其中,槲皮素、山柰酚、木樨草素、汉黄芩素、β-谷甾醇是其治疗阿尔茨海默病的关键活性成分,信号转导和转录激活因子3(STAT3)、丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、肿瘤坏死因子(TNF)、血管内皮生长因子A(VEGFA)是该方治疗阿尔茨海默病的关键靶点。GO富集分析显示,小续命汤治疗阿尔茨海默病主要通过膜筏、囊腔等部位。KEGG富集分析显示,小续命汤治疗阿尔茨海默病主要与脂质与动脉粥样硬化、晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体信号通路(AGE-RAGE)、神经退行性病变等通路有关。结论:本研究揭示了小续命汤多成分、多靶点、多通路治疗阿尔茨海默病的机制,为小续命汤的临床开发利用提供了依据。

环状RNA在缺血性脑卒中领域的研究进展

环状RNA(circRNA)是一种非编码RNA,其3’和5’端连接在一起,构成了一种共价闭合的环状结构。缺血性脑卒中后,机体发生了包括氧化应激、线粒体功能障碍、炎症、内质网应激、细胞凋亡和自噬在内的多种病理生理机制。circRNA主要通过海绵吸附微小RNA(microRNA),调节缺血性脑卒中相关基因表达水平,参与脑卒中的调控。在缺血性脑卒中发生后,部分circRNA对大脑发挥保护作用,而另一些circRNA则对大脑有损害作用。研究表明circRNA很有潜力在未来为缺血性脑卒中提供新的诊疗方法。本文就circRNA在缺血性脑卒中领域的研究进展进行综述,并对circRNA的未来应用进行展望。

自动电位滴定法测定微量氯化物

在硝酸、硝酸锌介质中 ,用硝酸银自动电位滴定法测定亚铁氰化钾、亚铁氰化钠中微量氯化物 ;其测定结果的准确度。

miRNA在缺血性脑卒中神经保护领域的研究进展

缺血性脑卒中是一种具有高残疾率和死亡率,严重者可危及生命的脑血管疾病,在全球范围内具有沉重的社会经济负担。缺血性脑卒中的病因及病理过程是由多种分子过程介导,这些分子机制部分转录后被动态调节。越来越多证据表明,微小RNA(micro-ribonucleic-acid,miRNA)作为转录后基因沉默的重要介质在基因表达和缺血性脑卒中病理过程中起着至关重要的作用。在本综述中,我们介绍了miRNA在缺血性脑卒中不同机制中的神经保护作用。由于通过特定的药物和非药物治疗促进或抑制miRNA的表达可能有益于缺血性脑卒中的恢复,本文还详细论述了关于miRNA在缺血性脑卒中的临床诊断和治疗相关作用,旨在对本领域临床和基础研究提供一定的参考。

淀粉存在下分光光度法测定亚氨基二乙酸中微量氯

在硝酸介质中 ,微量氯离子与银离子反应 ,生成氯化银悬浮体 ,在淀粉 乙醇体系中可用光度法测定氯离子含量。测定波长为 42 0nm ,摩尔吸光系数ε=1.2 4× 10 3,氯离子含量在 0～ 160 μg/ 10mL范围内服从比尔定律。用于亚氨基二乙酸中微量氯的测定 。

探寻知识本质,促进深度学习

知识可以分为陈述性知识、程序性知识和策略性知识。知识的本质在知识的“生长点”,结论的“生疑点”,方法的“生根点”。探寻并凸显知识本质的教学,能锻炼学生思维,启迪学生智慧,促进深度学习,有利于发展学生核心素养。一、知识本质“知多少”(是什么?)知识是对客观事物的比较可靠的认识成果。本质是现象背后的结论和规律,通过现象把握其本质是科学的基本任务之一。在本质上讲,知识内在于人的主观创造,是建基于客观性上的主观构建。

光度法测定亚铁氰化钾中微量SO_4^(2-)

在盐酸介质中 ,微量 SO4 2 -与 Ba2 + 反应 ,生成硫酸钡悬浮体 ,在明胶保护下可用光度法测定 SO4 2 -,测定波长为 42 0 nm,SO4 2 -浓度在 0 - 1 40 μg/2 5m L范围内符合比耳定律。用于亚铁氰化钾中微量 SO4 2 -的测定 ,结果令人满意。

基于网络药理学研究丹参-川芎抗脑缺血再灌注损伤作用机制及试验验证

【目的】通过网络药理学研究丹参-川芎药对治疗缺血性脑卒中的有效性成分及相应基因靶标,探讨其作用机制。【方法】应用中药系统药理学计数平台(TCMSP)、GeneCards、OMIM数据库,筛选出丹参-川芎药对治疗缺血性脑卒中的潜在靶点并进行GO功能和KEGG通路富集分析。分别设置假手术组、模型组、丹参-川芎低、中、高剂量组,采用预防和治疗给药方式对线栓制备的脑缺血再灌注模型大鼠进行干预,采用Zea-longa评分法对脑缺血再灌注24 h模型大鼠进行神经功能评分,苏木素-伊红(HE)染色法观察脑组织病理学变化进行初步验证。【结果】本研究共筛选到丹参-川芎药对主要有效活性成分共72个,其中川芎7个,丹参65个,缺血性脑卒中的靶点基因1 972个,有效活性成分与缺血性脑卒中共同作用靶标94个,包括IL6、IL10、TNF、MMP9、VEGFA、CASP3等;GO功能和KEGG通路富集结果提示,丹参-川芎药对治疗缺血性脑卒中与PI3K-Akt、cGMP-PKG、VEGF等多个信号通路有关。动物试验结果表明,丹参-川芎可减轻脑组织病理改变,减轻神经功能缺损,改善脑缺血再灌注损伤。【结论】丹参-川芎药对可能是通过PI3K/Akt信号通路改善脑缺血再灌注损伤,发挥抗细胞凋亡的作用。

改善生活方式治疗胃食管返流病临床分析

我们对１９９６年１月至１９９８年１２月所接诊的胃食管返流（ＧＥＲ）共２６０例，通过改善生活方式、药物及联合应用，进行疗效对比分析，以探索改善生活方式在治疗ＧＥＲ中的重要性。１资料与方法１．１对象：ＧＥＲ２６０例，临床均有不同程度反酸、嗳气、烧心、胸痛...