一株鸡源沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

为查明青海省湟源县周边某鸡场疑似细菌病感染的病原,制定合理的治疗方案。从发病鸡场无菌采集病死鸡的样品进行细菌分离纯化、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因扩增、致病性试验和药敏试验。结果显示,从该病鸡场分离菌为两端钝圆、短小的革兰阴性杆菌,其生化特性与沙门菌相符。通过PCR成功扩增出1500 bp大小的16S rRNA基因,测序比对后,显示与沙门菌同源性最高。雏鸡致病性试验结果显示,此株沙门菌对雏鸡的有致病性。药敏试验结果显示,该菌株对阿莫西林、头孢唑啉和丁胺卡那等敏感,对氨苄西林、庆大霉素和链霉素等药物有耐药性,提示该菌对头孢类、喹诺酮类等多种药物高度敏感,而对糖肽类、大环内酯类等多种药物产生了耐药性。上述结果为该地区鸡沙门氏菌病的防治提供了参考。

纳米抗体在动物疫病防控中的应用

纳米抗体(Nb)是一种新型基因工程抗体,因其分子量小、稳定性强、亲和力高、能识别隐蔽表位、组织穿透力强、易于制备、成本低廉且便于进行改造与修饰,是疾病诊断、治疗和研究的理想分子。因此,纳米抗体受到了的各国学者的广泛关注,在癌症、脑部神经性疾病、毒素中毒性疾病、艾滋病以及其它感染性疾病和蛋白质功能、晶体结构解析等领域已有大量的相关研究报道。本文主要就Nb在动物疫病防控中的研究与应用进行了总结,探讨了其在动物疫病诊断、治疗和研究方面的发展潜力,并对未来发展方向做出了展望。

新城疫病毒F蛋白纳米抗体的筛选及活性鉴定

旨在筛选新城疫病毒(NDV)F蛋白的纳米抗体,并对筛选的抗体活性进行初步鉴定。以NDV F蛋白中和表位构建诱饵,利用酵母双杂交技术对双峰驼天然重链抗体可变区(VHH)酵母双杂交文库进行筛选,获得4株VHH抗体序列。挑选其中2株最符合VHH特征的进行原核表达与纯化,并对2株VHH活性进行鉴定。ELISA结果显示,VHH1与VHH2与NDV病毒的反应性显著高于阴性对照(P<0.05),表明VHH与NDV病毒反应活性良好;Western blot结果显示,2株VHH可特异性识别F蛋白;细胞中和试验结果表明,2株VHH抗体均具有一定的中和活性。以上结果提示本研究成功筛选出2株活性较好的抗NDV F蛋白的VHH抗体,为VHH在NDV防控中的应用奠定了基础。

青藏高原放牧家畜小肠结肠炎耶尔森氏菌LAMP检测方法的建立及应用

为了建立特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法,采用分子生物学方法,根据GenBank数据库中该细菌的outL基因,进行了多序列比对和保守区域确定。根据其保守序列,在线设计和筛选了一套LAMP引物。温度优化及特异性和敏感性验证后建立了检测该病菌的LAMP检测方法,并对青藏高原放牧牛、羊临床粪便样品进行了检测。结果表明,LAMP检测方法的最适温度为63℃;检测其与大肠杆菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌及蜡样芽胞杆菌无交叉反应;检测下限为100 fg目的基因;利用建立的方法检测了208份放牧牦牛、藏羊粪便DNA样品,共检测到26份阳性样品,阳性率为12.5%。这表明成功建立了一种检测该病的特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法。

1株鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

[目的]阐明青海省大通县某鸡场病鸡发病原因,为奇异变形杆菌病防控提供参考。[方法]无菌采集病鸡肝脏、脾脏和泄殖腔拭子等样品,接种普通琼脂和SS琼脂平板进行细菌分离纯化培养,挑取平板上生长的疑似菌落进行革兰染色镜检,再将分离的菌落接种生化鉴定管进行生化鉴定,同时通过PCR扩增16S rDNA和tuf特异性基因并测序。将分离菌接种雏鸡进行致病性试验,采用K-B法评价分离菌对27种抗菌药物的敏感性。[结果]分离菌为短杆、长杆状多形性杆菌,生化特性与奇异变形杆菌相符。PCR成功扩增出1400 bp的16S rDNA,序列比对显示与奇异变形杆菌同源性最高,为99.9%。雏鸡致病性试验结果表明,该株奇异变形杆菌对雏鸡有致病性。药敏试验结果显示,该菌株对哌拉西林、头孢吡肟和头孢噻肟等高度敏感,对环丙沙星、奥格门汀中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林和头孢唑啉有耐药性,提示该菌对头孢类药物高度敏感。[结论]分离到的一株奇异变形杆菌对鸡具有较强的致病性,且对多种药物表现出耐药性。

H9N2禽流感病毒纳米抗体酵母双杂交文库的构建

【目的】构建H9N2禽流感病毒(AIV)纳米抗体(Nbs)酵母双杂交文库,为后期筛选H9N2 AIV Nbs奠定基础。【方法】以H9亚型禽流感疫苗(F株)免疫双峰驼,当血凝抑制(HI)抗体滴度大于1∶2~4时,颈静脉采集血液,分离淋巴细胞并提取淋巴细胞总RNA,用反转录试剂盒合成第一链cDNA,再以此为模板,通过巢式PCR扩增Nbs基因片段。将Nbs基因与pGADT7-Rec载体共转至Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30℃倒置培养约4 d,收集平板上的全部菌落,构建H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,并对文库库容、滴度、重组效率和多样性进行鉴定。【结果】经H9亚型禽流感疫苗连续免疫4次后,双峰驼HI抗体滴度可达1∶2~9;通过巢式PCR成功扩增出400 bp的Nbs基因。对构建的H9N2AIV Nbs酵母双杂交文库的鉴定表明,其库容为2.4×10~8,滴度为4.2×10~9 CFU/mL,插入重组率为95.6%;随机挑取10个克隆测序,结果显示均符合Nbs序列特征,且为独立克隆,表明文库多样性良好。【结论】成功构建了H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,且文库各项指标均达到了要求。

新城疫病毒感染性克隆全长cDNA转录载体的构建

以pEGFP-N1和pAdTrack-CMV质粒为模板,通过PCR扩增分别获得GFP基因序列和Kan基因序列;以胶回收的目的序列为模板,通过Overlap PCR扩增获得GFP-Kan基因序列。回收GFP-Kan基因序列,插入至pCI-neo载体上,酶切和测序鉴定正确的重组载体命名为pCI-GFP/Kan。再将设计合成的linker基因序列通过酶切、连接克隆至pCI-GFP/Kan载体上,涂布Kan抗性平板进行阳性克隆筛选,酶切和测序鉴定正确的重组载体命名为pCI-infect,即为新城疫病毒全长cDNA双启动子克隆载体。酶切和测序鉴定结果显示,pCI-infect载体构建成功。

新城疫病毒V蛋白C端酵母双杂交诱饵质粒的构建与鉴定

为构建新城疫病毒(NDV)V蛋白C端酵母双杂交诱饵质粒,用RNA试剂盒提取NDV F48E9株的RNA,通过反转录试剂盒将抽提的RNA反转录,以反转录合成的c DNA为模板,通过PCR扩增,获得V蛋白C端基因(VCTD)。通过酶切连接的方法将V蛋白C端基因克隆至p GBKT7载体上,命名为p GBKT7-VCTD。将p GBKT7-VCTD转化酵母Y2H Gold酵母感受态细胞,转化产物涂布营养缺陷型平板,观察平板上菌落生长情况,判定诱饵质粒有无自激活能力;同时挑取平板上的生长的菌落接种液体培养基培养,绘制生长曲线,判定p GBKT7-VCTD诱饵质粒有无毒性。酶切和测序结果表明,成功构建p GBKT7-VCTD诱饵质粒,且该诱饵质粒在酵母细胞中无毒性和自激活能力。本研究成功构建了p GBKT7-VCTD诱饵质粒,为筛选NDV V蛋白C端纳米抗体奠定基础。

建构主义理论下“互联网+中学化学”融合教学探究

基于建构主义理论的特征,将互联网与化学教学相融合,构建了包含创设情境、解决问题、交流评价三个主要环节的教学模式。针对各项教学环节,提出了相应的教学策略,以期在一定程度上优化化学教学。

2株蛋鸡源基因Ⅸ型新城疫病毒全基因序列测定及遗传进化分析

为分析鸡源基因Ⅸ型新城疫病毒的分子特征及遗传进化关系,对两株蛋鸡源NDV进行部分生物学特性测定及全基因测序分析。参考基因Ⅸ型NDV毒株的序列设计10对引物,采用RT-PCR的方法对NDV分离株Layer/China/Yulin/10和Layer/China/Changan/10分段进行扩增及测序,拼接获得全基因序列。结果表明,2株病毒的MDT分别为37.2和56.5h,ICPI分别为1.838和1.603,F基因的裂解位点序列均为112 R-R-Q-R-R-F117,HN基因均编码571个氨基酸,均符合NDV强毒株的特征;2株病毒的基因组全长均为15 192bp,同源性高达99.9%;F基因和全基因系统进化树显示2株NDV均属于ClassⅡ中的基因Ⅸ型,和其他基因Ⅸ型和基因Ⅲ型毒株的亲缘性较高,与野鸟源NDV同源性为99.9%,遗传距离为0.001 1,以上结果表明,这两株鸡源NDV与野鸟源NDV的亲缘关系较近。提示野鸟可能在基因Ⅸ型NDV的扩散与传播中有重要的作用。

不考的内容也有教的价值——“化学是认识和创造物质的科学”教学实践与思考

高考化学是对学生学科知识、能力、价值观念等综合素养的考查,而部分化学教师却将目光聚焦于化学学科的知识属性,因而出现“考什么就教什么”的不良教学倾向。其实无论从高考的人才选拔视角,还是学科的价值追求,甚至就化学知识本身而言,都不能以考定教。尤其是在新一轮基础教育改革背景下,指向立德树人育人目标的化学教学已经由知识中心转向素养本位,积极发挥学科育人价值。

人文情怀与科学思维相融合的教学实践研究——以“金属钠的性质与应用”为例

《普通高中化学课程标准(2017年版)》在课程性质中指出化学在"人类文明可持续发展"以及"科学文化的传承"中发挥着不可替代的作用。从这个意义讲,化学学科不仅是科学探究的工具,也是文化传承和发展的载体,这极大地丰富了其内涵和外延。因此在化学教学中,不仅要重视学生科学思维的发展,也要凸显对其人文情怀的关照。