杞参益智方改善D-半乳糖注射亚急性衰老模型小鼠学习与记忆能力的效应评价研究

目的评价杞参益智方对D-半乳糖注射亚急性衰老模型小鼠学习与记忆能力的改善效应。方法小鼠皮下注射D-半乳糖构建亚急性衰老动物模型,分别给予阳性药多奈哌齐(2 mg·kg^(-1)·d^(-1))、杞参益智方低剂量组(1.33 g·kg^(-1)·d^(-1))、高剂量组(2.67 g·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药30 d。通过水迷宫和Y迷宫实验评价模型小鼠学习与记忆行为;采用HE染色考察模型小鼠海马损伤情况;采用TUNEL法检测小鼠海马组织凋亡情况;采用ELISA法检测小鼠海马组织中氧化应激因子与炎症因子表达水平;采用Western blot法检测小鼠海马凋亡、氧化应激与炎性应激相关信号通路蛋白表达。结果杞参益智方水提取物显著缩短模型小鼠水迷宫测试中潜伏期和上台前路程(P<0.01),增加穿越平台次数(P<0.01);增加模型小鼠Y迷宫新臂探索时间和次数(P<0.05);抑制模型小鼠海马TUNEL荧光表达(P<0.01);上调氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)活力(P<0.05)与谷胱甘肽(GSH)含量(P<0.05),下调丙二醛(MDA)含量(P<0.05);下调白细胞介素(IL)-1β、IL-6与肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平(P<0.05,P<0.01);下调凋亡信号通路蛋白Cleaved Caspase-3与Caspase-3表达(P<0.05),上调氧化应激信号通路蛋白Nrf2与HO-1表达(P<0.05),下调炎性应激信号通路蛋白p-NF-κB与NF-κB表达(P<0.05)。结论杞参益智方具有改善D-半乳糖注射亚急性衰老模型小鼠学习与记忆能力的作用,可能与其抑制海马氧化应激与炎性应激作用相关。

菊睛丸改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠视网膜损伤效应评价与作用机制研究

目的评价菊睛丸改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠视网膜损伤效应并探索作用机制。方法采用小鼠皮下注射D-半乳糖构建亚急性衰老模型,分别给予西药阳性药AREDS2、中药阳性药杞菊地黄丸、菊睛丸水提取物低、高剂量组和菊睛丸50%乙醇提取物低、高剂量组。通过光学相干断层成像检查(OCT)检测小鼠视网膜及眼底情况,HE染色法检测视网膜细胞损伤程度,TUNEL染色法检测视网膜细胞凋亡情况,试剂盒检测氧化应激因子表达,Western blot检测小鼠视网膜凋亡和氧化应激通路相关蛋白表达情况。结果菊睛丸提取物显著增加模型小鼠视网膜厚度(P<0.05),改善视网膜损伤并抑制视网膜细胞凋亡(P<0.05)。同时,菊睛丸提取物下调Cleaved Caspase-3与Cleaved Caspase-9凋亡通路蛋白表达(P<0.05),上调Bcl-2/Bax蛋白表达比值(P<0.05)。菊睛丸提取物显著提高抗氧化因子SOD与GSH等表达(P<0.05),减少氧化产物MDA产生(P<0.05),显著上调抗氧化蛋白Nrf2与HO-1的表达(P<0.05)。菊睛丸水提取物和50%乙醇提取物有相似的作用趋势。结论菊睛丸改善D-半乳糖亚急性衰老模型小鼠视网膜损伤,其作用途径与抑制视网膜细胞凋亡并改善氧化应激有关。

枸杞叶改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习与记忆能力的效应部位与作用机制研究

目的研究枸杞叶改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习与记忆能力的效应部位与作用机制。方法建立D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型,制备枸杞叶不同溶剂提取部位,通过Y迷宫实验和新物体识别实验评价枸杞叶不同溶剂提取部位对模型小鼠学习与记忆能力的影响;苏木素-伊红(HE)以及尼氏(Nissl)染色观察小鼠海马区病理形态学变化;酶联免疫吸附法检测小鼠海马组织脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)、胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)的含量;试剂盒检测小鼠海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活力,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量;TUNEL法检测小鼠脑组织海马区细胞凋亡情况;蛋白印迹法检测小鼠海马组织抗氧化蛋白Nrf2、HO-1以及凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达。结果枸杞叶水提部位和80%醇沉上清部位显著改善模型小鼠学习与记忆能力,改善小鼠海马区组织病理损伤,增加小鼠海马区尼氏体数目,并促进神经营养因子BDNF、NGF、GDNF的表达;下调致炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ的表达,上调抗炎因子IL-10表达;提升SOD活力和GSH表达,降低MDA表达;提高Nrf2、HO-1抗氧化蛋白的表达;降低Caspase-3、Caspase-9凋亡通路蛋白的表达;抑制模型小鼠脑组织海马区细胞凋亡。结论枸杞叶水提部位和80%醇沉上清部位是枸杞叶改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习与记忆能力的效应部位,其作用途径与抑制中枢氧化应激与炎性应激导致的神经元凋亡有关。

开心散联合氟西汀改善慢性压力应激小鼠抑郁样行为的效应评价研究

目的考察中药复方开心散联合用药氟西汀改善慢性压力应激小鼠抑郁样行为的效用与作用机制。方法采用慢性压力应激构建抑郁小鼠模型,通过糖水偏嗜实验评价开心散与氟西汀联合用药改善模型小鼠抑郁样行为的效用。采用ELISA法测定受试动物血清、海马组织和下丘脑组织中皮质醇(Cortisol)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的表达。采用HE染色、尼氏染色和TUNEL染色法,观察模型小鼠海马神经元损伤情况。采用Western blot法考察小鼠海马组织中Caspase-3和Caspase-9等凋亡信号通路关键蛋白的表达情况。结果开心散与氟西汀联用能显著上调模型小鼠糖水偏嗜率;同时,联合用药可抑制脑内和血清中压力应激因子的上调,减少小鼠海马区因抑郁导致的细胞凋亡,调控海马区的凋亡信号通路。结论开心散联合氟西汀可有效改善抑郁模型动物的抑郁样行为,减少氟西汀临床用量。两者联用后抑制压力应激轴激活可能是联合用药抗抑郁的作用环节。

杞参益智方改善Aβ_(1-42)海马区注射小鼠学习与记忆能力的效用评价与作用机制研究

目的评价杞参益智方对Aβ_(1-42)海马区注射小鼠学习与记忆能力的改善作用,初步探索作用机制。方法小鼠海马区注射b淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))构建拟阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)动物模型,给予杞参益智方水提取物。通过Morris水迷宫实验和Y迷宫实验评价模型小鼠的学习与记忆能力。采用HE染色观察小鼠海马组织损伤情况。采用TUNEL法检测小鼠海马组织细胞凋亡情况。检测痴呆模型小鼠海马组织中氧化因子、炎症因子的表达和相关的抗氧化蛋白及凋亡蛋白的表达。结果杞参益智方水提取物低剂量组和高剂量组均可显著改善海马A1-42注射小鼠学习与记忆能力,抑制模型动物海马组织细胞凋亡,抑制模型小鼠氧化应激并下调炎症因子IL-6、IL-1β与TNF-α的表达,上调抗氧化蛋白Nrf2与HO-1蛋白的表达并调节凋亡信号通路相关蛋白Caspase-9、Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达。结论杞参益智方改善痴呆模型小鼠的效用可能与其调控中枢氧化应激、抑制炎症因子表达并且增加抗氧化蛋白的表达有关。

中药复方开心散调控慢性压力应激小鼠海马神经新生抗抑郁作用机制研究

目的评价开心散调控慢性不可预知压力应激模型小鼠海马神经新生抗抑郁效用,探讨作用机制。方法采用慢性不可预知压力应激构建抑郁小鼠模型,给以开心散水提取物。通过糖水偏嗜率检测、强迫游泳实验、悬尾实验等评价模型小鼠抑郁样行为。采用免疫荧光法检测模型小鼠海马区神经新生情况。采用蛋白免疫印迹法检测小鼠海马神经干细胞标志物巢蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。采用ELISA法检测相应组织中压力应激因子如促肾上腺皮质激素释放因子、促肾上腺皮质激素、皮质醇与神经营养因子如脑源性神经营养因子、神经生长因子的表达。采用小鼠原代神经干细胞,采用免疫荧光法检测开心散对原代神经干细胞增殖情况,采用蛋白免疫印迹法检测巢蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果开心散水提取物显著增加抑郁模型小鼠糖水偏嗜率,降低强迫游泳与悬尾不动时间;同时促进海马组织神经元新生,降低压力应激因子表达,提高神经营养因子表达,上调巢蛋白表达并调控Wnt/β-catenin信号通路。开心散提取物还可促进小鼠原代神经干细胞增殖及蛋白表达,并促进β-catenin入核,调控Wnt/β-catenin信号通路。结论开心散具有改善小鼠抑郁样行为效用,促进海马神经新生以及调控Wnt/β-catenin通路可能是其抗抑郁的重要作用环节与机制。