1%盐酸布替萘芬软膏治疗浅部真菌病随机单盲对照多中心临床试验

采用1%盐酸布替萘芬软膏与1%联苯苄唑乳膏治疗219例浅部真菌病,治疗结果表明,二类新药1%盐酸布替萘芬软膏对手足癣和体股癣临床疗效、真菌学疗效、不良反应发生率与对照药1%联苯苄唑乳膏相似。虽然停药后1周试验组手足癣和体股癣治愈率均高于对照组(P<0.05),但两组的有效率均差异无统计学意义(P=1.000)。

医院感染念珠菌菌种分布及耐药情况分析

目的分析两所不同地区三甲综合医院分离的医院感染念珠菌的菌种分布、临床特点以及耐药情况。方法收集发生念珠菌感染住院患者的临床资料、标本。念珠菌显色培养基、ATB-ID 32C酵母鉴定试剂条以及26S rDNA区扩增测序鉴定念珠菌菌种;ATB FUNGUS药敏试剂条测定药物敏感性。结果共收集医院感染念珠菌标本396份,主要为白念珠菌(川北医附院/华西医院:68.1%/70.2%)、热带念珠菌(14.9%/9.0%)、光滑念珠菌(5.7%/12.2%)、克柔念珠菌(3.4%/2.4%)、近平滑念珠菌(2.1%/1.6%)。高发科室主要在ICU、感染科、呼吸科及普外科。感染部位以下呼吸道最常见。对两性霉素B的敏感性最高,而对氟康唑有不同程度的耐药。结论应重视念珠菌耐药的检测、菌种培养鉴定及药敏试验,合理应用抗生素,降低院内念珠菌感染率及耐药株产生。

一种适用于PCR反应的酵母菌、无绿藻及丝状真菌DNA提取方法

目的介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株:未知酵母菌(5株)、真皮毛孢子菌(1株)、糠秕马拉色菌(1株)、季也蒙念珠菌(5株)、未知丝状真菌(6株)、无绿藻(1株)、烟曲霉(2株)、拟青霉菌(1株)、茎点霉(1株)。用溶细胞酶(lyticase)结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,A260/A280检测纯度并计算质量浓度,用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增真菌核糖体基因(rDNA)内转录间区ITS基因,经PCR扩增检验所提取的DNA质量。结果成功提取所有23株真菌基因组DNA,其纯度及质量浓度能满足PCR反应的要求。结论用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒从酵母菌、无绿藻及丝状真菌提取的DNA可用于PCR反应。

疑似红斑狼疮的面部难辨认癣1例

报告1例面部难辨认癣。患者为21岁女性,农民,由于长期外用糖皮质激素软膏而使局部皮损不典型,当地医师怀疑为红斑狼疮建议到我院做全面检查。病损标本真菌镜检发现菌丝,培养分离出须癣毛癣菌。免疫学检查排除红斑狼疮。病理检查在角质层及毛囊周围发现真菌菌丝。内服特比萘芬3周治愈。

常见皮肤真菌病临床及真菌形态学检查

真菌感染所致疾病包括浅部、皮下和深部真菌病,其中浅部真菌主要为皮肤癣菌、马拉色菌,引起毛发、头皮、甲、掌跖及光滑皮肤感染;皮下和深部真菌多为条件致病菌,如念珠菌、孢子丝菌、暗色真菌、接合菌等。一种真菌可致多种临床表现,相似皮损可由多种真菌引起。该文特介绍皮肤科临床常见真菌感染皮损所对应的真菌镜检、培养等形态学特征。

石膏样小孢子菌所致幼儿面部感染1例

报道1例由石膏样小孢子菌引起的面部体癣。患儿为2岁半幼女,因外伤后左面颊部出现浸润性红色斑块2个月就诊。初诊时考虑为孢子丝菌病,给予碘化钾内服1周无效。皮损在外用曲安奈德益康唑乳膏(派瑞松)2周后治愈。痂壳在接种沙堡弱培养基后20d后长出菌落,鉴定为石膏样小孢子菌。

直接从病发提取DNA鉴定菌种诊治万博节皮菌所致脓癣

目的:报告1例由万博节皮菌(趾间毛癣菌有性期)引起的脓癣。在患儿已口服抗真菌药培养生长缓慢的情况下从病发直接提取DNA鉴定菌种,以明确致病菌,指导治疗。方法:病发经KOH涂片真菌镜检阳性后,从病发直接提取DNA,以真菌通用引物ITS1和ITS4做PCR扩增后测序比对;同时做真菌培养,菌落长出后做钢圈小培养进行形态学鉴定。并提取菌落DNA做分子生物学鉴定。结果:病发直接提取的DNA与从培养菌落提取的DNA经PCR-序列分析均鉴定为万博节皮菌.与形态学鉴定相符。诊断万博节皮菌感染所致头癣。予口服伊曲康唑(100mg/d),2%酮康唑洗剂外洗后外擦1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏。治疗4个月后痊愈。结论:在已用抗真菌药培养生长不良的情况下直接提取DNA做PCR-序列分析的非培养法能尽早明确致病菌种,指导用药。待培养菌落长出后再做PCR-序列分析及形态学验证。

误诊为头皮脓肿经抗生素及植皮治疗无效的脓癣——附2例报告

目的报道2例误诊为头皮脓肿经长期抗生素及植皮治疗失败的须癣毛癣菌所致的脓癣病患者,分析脓肿和脓癣的鉴别要点。方法例1为9岁男童,头皮外伤后脓肿、溃疡28d,经抗生素治疗无效,行植皮术后5d再发生脓肿溃疡。取皮损处断发行10%KOH涂片镜检、培养,发现并分离出致病真菌,沙堡弱琼脂培养基上呈白色粉状菌落,可使含尿素培养基变红,即尿素酶试验阳性,小培养见螺旋菌丝及分隔棒状大分生孢子,鉴定为须癣毛癣菌。例2为8岁女童,头顶脓肿、溃疡24d,抗感染治疗不愈而接受植皮,术后7d再发脓性丘疹。从皮损处标本中发现、分离出致病真菌,经上述方法鉴定为须癣毛癣菌。结果2例患者结合真菌学检查和临床表现确诊为脓癣,予伊曲康唑100mg/d内服近2个月皮损均痊愈,但供皮区遗留瘢痕和色素改变。结论真菌病原学检查是避免脓癣误诊的关键,伊曲康唑内服治疗脓癣有效、安全。

茄病镰刀菌致小腿慢性溃疡1例报告及病原真菌超微结构的研究

报道1例55岁男性农民,因右小腿溃疡4个月余就诊。取其溃疡组织作真菌培养和病理检查,真菌培养在含氯霉素、放线菌酮和不含氯霉素、放线菌酮的沙堡弱培养基中27℃都长出白色棉絮状菌落,而在不含氯霉素、放线菌酮条件下生长更好;在马玲薯培养基中长出镰刀状大分生孢子,菌种鉴定为茄病镰刀菌。8d后从溃疡处再取标本培养仍为茄病镰刀菌生长。病理切片经银染色后发现念珠状分隔菌丝,用透射电镜对病变组织内的菌体形态进行了超微结构研究。予伊曲康唑口服治疗,但患者未复诊而失访。

须癣毛癣菌所致脓癣病发的扫描和透射电镜观察及菌体外酶活性分析:2例报告

目的报道2例由须癣毛癣菌引起的脓癣,并对病发做扫描和透射电镜观察及菌体外分泌酶活性测定。方法例1为6岁女孩,表现为头顶部炎性肿块、脓血伴脱发;例2为1岁8个月男孩,表现为头部红斑,无脓肿及脱发。家中分别饲养宠物狗和兔。病发真菌镜检均阳性后做真菌培养、生化鉴定及分子生物学鉴定。对2例患儿病发用扫描和透射电镜进行超微结构观察。对2株分离的菌株分别进行细胞外分泌酶测定。结果2株菌均鉴定为万博节皮菌(须癣毛癣菌的有性期)。扫描电镜见例1的病发受累毛干表面大量炎性组织碎屑、红细胞、脓细胞及上皮细胞;透射电镜在毛皮质内发现菌体。扫描电镜见例2的受累毛干表面真菌孢子及炎性渗出物;透射电镜见毛发内外菌体。2株菌的外分泌酶主要为碱性磷酸酶、白氨酸芳胺酶、β-葡萄糖甙酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、α-甘露糖甙酶。经口服伊曲康唑胶囊等综合治疗后2例均痊愈,未见不良反应。结论确诊2例须癣毛癣菌所致脓癣,伊曲康唑胶囊等药物联合治疗有效。

美兰染色法在马拉色菌检测中的应用

目的 评价美兰染色和派克墨水染色在马拉色菌检测中的应用。方法 应用美兰染液、派克墨水染液对花斑癣、马拉色菌毛囊炎、头皮屑三种疾病临床标本进行检测 ,比较两种方法的染色效果、检出阳性率。并应用上述两种染色法对马拉色菌和念珠菌染色 ,比较它们对马拉色菌染色的特异性。结果 美兰染液将孢子或菌丝染为深蓝色 ,派克墨水染液将孢子或菌丝染为浅蓝色 ,两种染色法与背景区分均较明显。美兰染色和派克墨水染色对三种疾病中马拉色菌的检出阳性率分别为 96 %和 94 % ,两种方法对马拉色菌的检出阳性率无显著性差异 (P>0 .0 5 )。美兰对马拉色菌和念珠菌均能染色 ,派克墨水对马拉色菌能染色 ,对念珠菌不能染色 ,具有一定特异性。结论 两种染色方法均可用于马拉色菌的临床检测 。

转化医学真菌学实例——直接提取DNA鉴定菌种及体外药敏试验指导诊治面部难辨认癣

目的报道1例由万博节皮菌(趾间毛癣菌有性期)所致面部难辨认癣,取皮损鳞屑直接提取真菌DNA做菌种鉴定,并与真菌培养鉴定结果比较,对培养的菌落直接用抗真菌乳膏做药敏实验指导治疗。方法病变部鳞屑经KOH涂片真菌镜检阳性后,取鳞屑直接提取DNA,以真菌通用引物ITS1/4做PCR扩增后测序;同时从培养生长的菌提取DNA做分子生物学鉴定;并将抗真菌乳膏加入含菌平板孔中观察抑菌圈大小。结果鳞屑直接提取的DNA与培养获得菌落提取的DNA经PCR-测序均鉴定为万博节皮菌,诊断万博节皮菌感染所致面部难辨认癣。镜检阳性后即给予特比萘芬口服(250mg/d)及1%萘替芬-0.25%酮康唑乳膏外用,每周复诊并取鳞屑镜检和培养,基于药物抑菌实验结果指导治疗5周,至临床治愈和真菌培养转阴。结论鳞屑直接提取DNA做PCR-测序能及早明确菌种,待培养菌落长出后做PCR-测序验证,直接用成品抗真菌乳膏做体外药敏实验指导临床选药,动态培养鳞屑以确定疗程。此个体化诊治方案为从临床到实验室、从实验室到临床转化医学真菌学的成功实例。

马拉色菌菌丝相培养研究

目的 :探讨马拉色菌菌丝相形成的条件。方法 :用由酵母浸膏、牛磺胆酸钠、角鲨烯、甘氨酸、吐温- 80等多种成份组成菌丝培养基 (pH 5 6 ) ,接种花斑癣患者鳞屑后置 30℃孵箱内培养。肉眼和镜下观察菌落和菌丝生长情况 ,并用形态学和生理生化学方法鉴定菌种。结果 30例患者中有 8例的标本 (2 6 7% )初代培养长出菌丝 ,其中 2株初代培养菌丝生成率为 10 %～ 2 0 % ,次代培养可提高到 2 5 % ,经菌种鉴定发现产生菌丝的均为糠秕马拉色菌 [占糠秕马拉色菌 6 6 6 % (8/ 12 ) ],而未产生菌丝的菌种包括全部合轴马拉色菌 (8/ 8)、球形马拉色菌 (4/ 4 )、限制性马拉色菌 (2 / 2 )、钝形马拉色菌 (2 / 2 )和部分糠秕马拉色菌 (4/ 12 )。结论 :使马拉色菌体外产生菌丝的条件除与培养基成分有关外 ,还与菌种有关。

鼻甲切除术后发生鼻脑毛霉病的诊治——附1例报告

目的报道1例罕见的继发于鼻甲切除术后的鼻脑毛霉病。临床经过患者为32岁女性,2年前因鼻甲肥厚接受下鼻甲部分切除术。术后3d鼻部皮肤出现红斑,继而出现结节、溃疡。本次就诊的9个月前在门诊取分泌物镜下发现真菌菌丝,考虑为皮肤毛霉病而间断内服伊曲康唑和氟康唑。近半月病情迅速恶化,皮损坏死、发黑并伴剧烈头痛以鼻脑毛霉病收入院治疗。结果取鼻腔分泌物培养2d后长出棕褐色絮状菌落。镜下见无囊托的孢子囊,囊梗直立无分支,鉴定为毛霉属真菌。静脉两性霉素B治疗后头痛及皮损改善,但因低钾、心动过缓等副作用被迫停药。患者住院第7d放弃治疗,后失访。

须癣毛癣菌致儿童脓癣1例

报道由须癣毛癣菌引起的儿童头部脓癣1例。患儿为4岁幼女,因头皮部丘疹1个月,脓肿4d就诊。内服青霉素V钾无效。取断发镜检查见发外真菌孢子,培养鉴定为须癣毛癣菌,细菌培养为棒状杆菌。经内服和外用特比萘芬抗真菌,静脉输入头孢噻肟钠联合克林霉素及万古霉素抗细菌治疗,12d后脓肿减轻,细菌培养阴转,但真菌培养仍阳性,继续抗真菌治疗2个月后皮损消退,真菌检查阴性。

特比萘芬治愈儿童鼻翼孢子丝菌病1例

目的报道1例发生在4岁儿童鼻翼的孢子丝菌病。方法刮取病变组织接种到沙堡弱培养基培养,并对培养出的病原菌进行形态学鉴定和ITS区序列分析。结果病变组织在沙堡弱培养基25℃培养长出黑褐色菌落,25℃小培养后光镜及扫描电镜下见菌丝细长,分枝分隔,合轴式产孢形成的成簇和沿菌丝两侧排列,分生孢子卵圆形。提取真菌总DNA用PCR方法扩增ITS序列,测序后登录GeneBank进行比对,该菌与申克孢子丝菌菌株KMU3360ITS区碱基序列一致性达99%,鉴定为申克孢子丝菌。内服联合局部应用特比萘芬治疗6个月后皮损完全消退。结论确诊1例儿童鼻翼的孢子丝菌病,内服联合局部应用特比萘芬治疗儿童孢子丝菌病疗效良好。

家兔饲养者两侧面颌部的难辨认癣1例

患者女,33岁。两侧面颌红斑瘙痒1年余。曾外用多种糖皮质激素霜治疗无效。刮取皮屑镜检见大量真菌菌丝,培养见棒形分隔大分生孢子、葡萄串状小分生孢子。尿素酶实验阳性、毛发穿孔实验阳性,鉴定为须癣毛癣菌。经内服特比萘芬胶囊和外用萘替芬酮康唑乳膏治疗28天后皮损消退。复查真菌阴性。

密切接触宠物兔后幼儿鼻孔周围体癣1例

报道1例密切接触宠物兔后发生在幼儿双侧鼻孔周围及上唇部的体癣。患儿4岁,因"鼻唇部红斑、鳞屑、伴瘙痒10余日"就诊。取皮屑镜检见真菌菌丝及毳毛内孢子,培养见棒形分隔大分生孢子、葡萄串状小分生孢子及螺旋菌丝。尿素酶试验阳性、毛发穿孔试验阳性,鉴定为须癣毛癣菌。经内服伊曲康唑胶囊和外用萘替芬酮康唑乳膏治疗6d后红斑瘙痒明显减轻,34d后皮损消退。复查真菌阴性。

家庭内红色毛癣菌病患者间菌株差异性分析

目的用PCR技术比较分离自同一家庭红色毛癣菌病患者的菌株差异性,分析家庭内多发的红色毛癣菌病的致病菌株是家内相互感染,还是家外感染。方法以家庭内多发的皮肤癣菌病患者为研究对象,分离致病菌株并以传统方法鉴定菌种。再分别用随机扩增多态性DNA(RAPD)和巢式PCR特异扩增红色毛癣菌的串联重复亚元件(TRSS:TRS-1/TRS-2)产生的指纹图谱分析种内株间有无差异性。结果纳入实验的16株菌分离自8个家庭,用形态学等方法及种特异引物均鉴定为红色毛癣菌。RAPD显示4个家庭内的菌株间有差异性,TRS-1区PCR指纹图谱显示5个家庭内菌株有株间差异,TRS-2区能鉴定出2个家庭内菌株间有差异。综合各方法共区分出6个家庭内的菌株间有带型差异。结论该研究提示家庭内多发红色毛癣菌病从家外途径感染率高于家内感染。TRS-1区PCR指纹图谱对红色毛癣菌的菌株区分度高于RAPD,更适于红色毛癣菌株间分型。结合多种分子分型方法可最大限度发现不同菌株间的差异。

口服伊曲康唑治疗婴儿泛发性皮肤黏膜念珠菌病1例

随着低体重儿存活率的提高以及抗生素的广泛应用,婴儿皮肤、黏膜念珠菌病的患病率在逐年上升。本院1例9个月男婴,因喂养不当而诱发泛发性皮肤、黏膜念珠菌病,采用口服伊曲康唑100mg隔日1次,治疗14d后痊愈。