意大利牛舌草中芦丁的分离及定量分析研究

目的确定意大利牛舌草中芦丁的分离方法并建立用于测定意大利牛舌草中芦丁含量的HPLC方法。方法采用硅胶柱色谱对意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物进行分离纯化。建立测定意大利牛舌草中芦丁含量的反相高效液相色谱法,色谱条件：色谱柱Kromasil C18（5μm,250mm×4.6mm）;以乙腈-0.2%磷酸水溶液进行线性梯度洗脱：0～9min 83%～80%B,9～20min 80%～68%B,20～40min 68%～40%B,40～45min 40%～83%;流速1.0mL/min;检测波长354nm,柱温30℃。结果通过分离鉴定在意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物中得到单体化合物1,1 H-NMR与13 C-NMR结果提示其化合物1为芦丁。在1.64×10^（-3）～5.255×10^（-2 ）mL/min范围内芦丁浓度与其峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 7）,且不同批次的意大利牛舌草中的芦丁含量最低,为（1.299 7±0.014 1）mg/g。结论首次从意大利牛舌草中分离得到芦丁,所建立的用于测定芦丁含量的HPLC法简便、准确,重现性好,结果准确可靠,为提高意大利牛舌草的质量标准奠定了试验基础。

意大利牛舌草乙醇提取物抗缺氧/复氧心肌细胞氧化应激损伤的研究

目的研究意大利牛舌草(Anchusaitalica Retz)乙醇提取物的预处理对缺氧/复氧心肌细胞氧化应激损伤的影响。方法建立缺氧/复氧体外小鼠原代心肌细胞模型以模拟缺血再灌注损伤。实验分为6组:正常对照组、缺氧/复氧组、阳性对照组(缺氧/复氧+1.25 mg/mL葛根素)、低剂量乙醇提取物处理组(缺氧/复氧+1.25mg/mL意大利牛舌草乙醇提取物)、中剂量乙醇提取物处理组(缺氧/复氧+2.50 mg/mL意大利牛舌草乙醇提取物)、高剂量乙醇提取物处理组(缺氧/复氧+5.00 mg/mL意大利牛舌草乙醇提取物)。采用MTT法检测原代心肌细胞存活率,采用酶标法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平、细胞内的丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果与正常对照组比较,缺氧/复氧组呈现时间依赖性地降低原代心肌细胞存活率,差异有统计学意义(P<0.01);与缺氧/复氧组比较,乙醇提取物处理组、阳性对照组LDH、MDA含量降低,SOD活力提高,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论意大利牛舌草乙醇提取物可能通过干预平衡氧化应激产物的生成和抗氧化应激的酶系统来减少缺氧/复氧所致原代心肌细胞氧化应激损伤。

意大利牛舌草化学成分的初步研究

[目的]初步研究意大利牛舌草地上部分的化学成分。[方法]采用系统预试法对石油醚提取液、乙醇提取液、酸性乙醇提取液和水提取液进行研究,对其可能的化学成分进行初步确定。[结果]意大利牛舌草中可能含有甾体、三萜类、挥发油、酚类、鞣质、黄酮类、香豆素、内酯类、生物碱、糖类、氨基酸、蛋白质、皂苷类化合物等化学成分。[结论]初步确定意大利牛舌草可能含有的化学成分,为意大利牛舌草的后续研究奠定础基。

意大利牛舌草不同极性溶剂萃取物对大鼠缺氧/复氧心肌细胞氧化应激损伤作用的研究

目的研究意大利牛舌草(Anchusa italica Retz)不同极性溶剂萃取物对大鼠对缺氧/复氧心肌细胞(myocardial cells,MCs)氧化应激损伤保护作用的影响。方法模拟缺血再灌注损伤,建立体外培养心肌细胞缺氧/复氧模型,分为12组,正常对照组,缺氧/复氧模型组,阳性对照组,处理组包括:高、中、低剂量乙酸乙酯萃取物+缺氧/复氧模型组;高、中、低剂量正丁醇萃取物+缺氧/复氧模型组;高、中、低剂量水萃取物+缺氧/复氧模型组。采用MTT法测定心肌细胞存活率;酶标仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞内的丙二醛(MDA)含量和细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果与缺氧/复氧模型组比较,意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物高剂量组、正丁醇萃取物高剂量组、水萃取物高剂量组心肌细胞存活率升高,LDH水平及MDA含量降低,SOD活力提高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论意大利牛舌草乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、水萃取物对缺氧/复氧心肌细胞的损伤具有保护作用,其机制可能与平衡氧化应激产物和抗氧化应激的酶系统有关。