硫化氢与神经胶质细胞功能的研究进展

长期以来被人们熟知的硫化氢（hydrogensulfide，H2S）是具有异味的剧毒气体。直到20世纪80年代末期，科学家们才相继在大鼠、牛和人类等脑中发现含量较高的内源性H2S，且具有重要的生理功能。近年来研究表明，内源性H2S是脑内重要的神经调节递质和神经保护因子，是一种新型气体信号分子。神经胶质细胞是神经组织中无传导神经冲动能力的细胞群，

外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

目的观察外源性硫化氢(H2S)对嗜铬细胞瘤细胞(PC12)β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)表达的影响,并探讨可能涉及的细胞信号机制。方法用不同浓度的硫氢化钠(NaHS)处理体外培养的PC12细胞,利用RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1mRNA及蛋白表达;继以LY294002和PD98059分别阻断磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3-K/Ak)t及丝裂酶原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2(MAPK/ERK1/2)通路,Western blot法检测其对NaHS诱导的通路下游蛋白Akt1和ERK1/2磷酸化的影响及其对BACE1蛋白表达变化的调节;ELISA法检测细胞培养液中Aβ42水平的变化。结果 NaHS在实验浓度范围内呈剂量依赖性下调BACE1mRNA及蛋白表达,200μmol/L时最明显,各NaHS组与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05);LY294002抑制NaHS诱导的Akt1蛋白磷酸化,削弱NaHS对BACE1蛋白的下调作用,其表达在LY294002预处理组与NaHS200μmol/L组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);而PD98059虽能抑制NaHS导致的ERK1/2蛋白磷酸化,但对其调节BACE1蛋白表达无影响,PD98059预处理组与NaHS200μmol/L组相比,差异无统计学意义(P>0.05);不同处理条件下的Aβ42表达与BACE1变化趋势基本一致。结论外源性H2S下调PC12细胞BACE1表达,其机制可能与PI3-K/Akt信号通路的激活有关,而与MAPK/ERK1/2通路无关。

不同程度脑白质疏松症患者认知功能的对比研究

目的探讨不同程度脑白质疏松症(LA)患者认知功能障碍的特点。方法将符合LA影像学诊断标准的150例患者按Aharon-peretz标准由轻到重分成4组,其中LA-1组45例,LA-2组38例,LA-3组36例,LA-4组31例,并设健康对照组35例;分别用简易智力状态量表(MMSE)、日常生活能力量表(ADL)/Barthel指数进行评估,通过统计分析判断各组之间认知功能及日常生活能力是否存在统计学差异。结果随着LA严重程度的增加,MMSE评分及Barthel指数逐渐降低;其中LA-1、LA-2组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而LA-3、LA-4组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中记忆力、注意力和计算力及日常生活能力的下降更明显(P<0.01)。结论随着LA严重程度的增加,患者的认知功能障碍程度及日常生活能力下降的程度也逐渐增加,因此认知功能障碍和日常生活能力可作为监测LA患者病情的重要指标。

急性脑梗死患者血清脑利钠肽动态变化及临床意义

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清脑利钠肽(BNP)动态变化及其与病情进展的关系。方法研究组ACI患者78例,根据病情进展情况分为进展性脑梗死组(PCI组)和非进展性脑梗死组(NPCI组),在发病后1、3、7、14、28d时检测血清BNP水平;对照组78例为健康体检者,检测血清BNP水平。结果研究组血清BNP水平在1、3、7、14d时与对照组和研究组发病28d时比较显著升高(P<0.01),发病后28d时血清BNP水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而PCI组与NPCI组在发病3d与7d时比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑梗死急性期血清BNP水平升高,而病情进展者升高更明显。因此,血清BNP水平的动态变化可作为评估ACI病情发展的指标之一。

重庆某二甲医院紧张型头痛的诊治情况及共患病研究

紧张型头痛（tension-type headache）是临床工作中最常见的原发性头痛类型之一。流行病学资料表明,在全球范围内约有38.0%的人患有紧张型头痛。我国最近的一项流行病学研究显示,紧张型头痛的年患病率为10.8%。紧张型头痛由于其慢性反复发作,常导致患者的工作效率和生活质量下降,并给家庭和社会带来了严重的经济负担。

阿尔茨海默病患者血清胆红素水平与血脂的相关性研究

目的对阿尔茨海默病患者的血清胆红素和血脂水平进行检测,分析三者之间的相关性。方法选取重庆市合川区人民医院门诊及病房2018年10月至2019年12月符合纳入标准的30例阿尔茨海默病患者入观察组,选择同一时期在体检中心进行体检的认知功能正常的老年人30例作为健康对照组,进行对照研究,通过比较两组人员的血清胆红素水平(血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素)和血脂水平(总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇),观察分析阿尔茨海默症与血清胆红素、血脂的关系,并探讨阿尔茨海默症患者血清胆红素与血脂的可能相关性。结果观察组患者的血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素水平显著低于健康对照组(P<0.05);观察组患者的总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇分别为(3.0±1.1)mmol/L,(1.0±1.1)mmol/L,(0.9±0.5)mmol/L,(1.6±0.9)mmol/L,健康对照组的总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇分别为(4.0±1.0)mmol/L,(2.1±1.5)mmol/L,(1.1±0.1)mmol/L,(1.7±0.5)mmol/L,两组患者总胆固醇、三酰甘油比较,差异具有统计学意义(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇差异无统计学意义(P>0.05)。阿尔茨海默症患者的血清总胆红素水平与总胆固醇、三酰甘油均呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿尔茨海默症与血清胆红素、血脂水平具有密切关系,同时,阿尔茨海默病患者血清胆红素水平与血脂有相关性。

重庆市某地区卫生系统工作人员心理卫生状况分析

目的调查重庆市某地区卫生系统工作人员的心理卫生状况。方法以重庆市某地区卫生系统773名工作人员为研究对象,应用症状自评量表(SCL-90)调查,以SCL-90总分大于160分为心理症状阳性,并在躯体化、强迫、人际关系、抑郁、焦虑、敌对性、恐怖、偏执、精神病性9项因子及总均分等方面进行统计分析。结果 773名卫生系统工作人员心理症状阳性率为17.46%(135/773),其中临床护士为23.20%(58/250),临床医生为15.63%(50/320),非临床工作人员为13.30%(27/203)。与中国人常模比较,该地区卫生系统工作人员在躯体化症状及强迫症状方面得分明显偏高(P<0.05),而在人际关系和偏执方面得分明显偏低(P<0.01);区级卫生单位工作人员在偏执方面得分高于卫生院工作人员(P<0.05),而在其他8项因子及总均分方面明显高于卫生院工作人员(P<0.01);临床护士在强迫、抑郁、焦虑、敌对性及总均分方面明显高于临床医生(P<0.01),而在躯体化、人际关系、恐怖、偏执及精神病性等方面二者差异无统计学意义(P>0.05);临床护士在总均分及各项因子得分均高于非临床工作人员(P<0.05)。结论该地区卫生系统工作人员多项因子得分与中国常模比较有明显差异,临床工作人员心理卫生状况较非临床工作人员差,尤其临床护士的心理卫生状况更差。

硫化氢对淀粉样前体蛋白代谢途径的影响

目的:观察硫化氢(H2S)对PC12细胞淀粉样前体蛋白(APP)代谢途径的影响,探讨可能的细胞信号机制。方法:用不同浓度硫氢化钠(NaHS,50、100和200μmol·L-1)作用PC12细胞1和18h,Westernblotting法检测APP、C99、C83、磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3-K/Akt)及丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2(MAPK/ERK1/2)信号通路相关蛋白的水平;ELISA检测细胞培养液中Aβ42的水平。50μmol·L-1 NaHS作用于PC12细胞前30min加入PI3-K抑制剂LY294002(25和50μmol·L-1)或MAPK激酶(MEK)抑制剂PD98059(25和50μmol·L-1),重复上述检测。各种检测实验均设正常对照组。结果:与正常对照组比较,50μmol·L-1 NaHS组C99及Aβ42水平降低(P<0.05),C83的表达提高(P<0.05),Akt及ERK1/2的磷酸化增加(P<0.05),而LY294002可抑制NaHS的上述作用,但PD98059不具有与LY294002类似的作用。结论:H2S能使APP的代谢向非淀粉样途径转变,其机制可能涉及PI3-K/Akt信号通路。

胰岛素样生长因子1对PC12细胞胱硫醚-β-合成酶和硫化氢的影响及机制

目的观察胰岛素样生长因子1(IGF-1)对大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)胱硫醚-β-合成酶(CBS)及硫化氢(H2S)表达的影响以及可能的细胞信号通路机制。方法用不同剂量IGF-1(20、40、80ng/ml)作用体外培养的PC12细胞24h,荧光定量PCR检测CBS基因表达,蛋白质印迹分析检测CBS、细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)相关蛋白表达,敏感硫电极法检测H2S气体含量。之后选取最佳剂量的IGF-1(80ng/ml)作用于30min前已加入ERK/MAPK抑制剂PD98059的PC12细胞再次检测CBS、ERK/MAPK相关蛋白及H2S气体表达水平。结果 IGF-1增加CBS的表达和H2S的含量,上调pERK1/2的表达;而PD98059能够抑制IGF-1的上述作用。结论 IGF-1及其调控的ERK/MAPK信号通路参与调节CBS及H2S的表达。

外源性H_2 S通过调节β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达对PC12细胞APP/Aβ代谢的影响

目的观察外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β-位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)的调节作用,进而探讨其对淀粉样前体蛋白/β-位淀粉样蛋白代谢途径的影响。方法用硫氢化钠作外源性H_2S供体,实验设空白对照组、NaHS 50 μmol/L组、NaHS 100μmol/L组和NaHS 200 μmol/L组,按分组浓度处理PC12细胞24 h后,RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达,并用Western blot法继而检测APP代谢过程中关键蛋白APP、C99、C83表达变化,ELISA法检测细胞培养液中Aβ40和Aβ42水平。结果 NaHS在实验浓度范围内从基因与蛋白两个水平上呈剂量依赖性下调BACE1表达,并下调C99、Aβ40和Aβ42蛋白表达,上调C83蛋白,各NaHS组分别与对照组比较,差别均有统计学意义(P<0.05),而对APP蛋白表达没有影响,各组间比较差别无显著性(P>0.05)。结论外源性H_2S具有通过调节PC12细胞BACE1表达下调APP/Aβ代谢的作用。

胰岛素信号通路磷脂酰肌醇-3激酶／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响

目的通过胰岛素和磷脂酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂渥曼青霉素（wortmannin，WORT）对P13K／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（P13K／Akt）信号通路的激活和抑制作用，观察P13K／Akt信号通路对海马神经元β-淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACEI）表达的影响。方法40只sD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、胰岛素组和WORT组（每组10只），海马立体定向注射胰岛素和PDK抑制剂WORT。免疫组织化学和Westernblot法检测P13K／Akt信号传导相关蛋白以及BACEI的表达水平。结果注射胰岛素的海马P13K信号通路下游信号分子较对照组：Akt表达增加（0．952±O．060与0．835±0．029，t=4．9150，P=0．0001），Aktser473位点磷酸化（pAkt）水平上调（0．800±O．075与0．657±0．025，t：4．5598，P=0．0002），糖原合成激酶-3α（GSK-3α）磷酸化水平降低（0．604±0．062与0．726±0．041，t=3．5871，P=0．0018），而成熟的BACEl及其裂解产物p分泌酶C末端（母-CTF）表达下调。WORT组的P13K下游信号分子Akt、pAkt表达明显被抑制，磷酸化GSK-3仪表达增加，同时成熟的BACE1（1．004±0．096）和β-CTF（1．031±0．048）的表达较对照组（分别0．498±O．064，0．786±O．101）上调（分别t=11．5980，P=0．0000；t=4．2194，P=0．0004）。结论胰岛素信号通路P13K／Akt可以调节BACE1的表达和活性并参与阿尔茨海默病的发病机制。

内源性硫化氢与皮质发育障碍模型大鼠认知功能损害的相关性研究

目的探讨皮质发育障碍DCDs(disorders of cortical development)模型鼠的认知功能与H_2S的变化关系。方法用γ射线照射孕15d Wistar大鼠,制作DCDs模型。采用Morris水迷宫法测试P30(出生后30天)、P60、P90 F1代DCDs模型鼠和对照组大鼠的学习能力和空间记忆能力。用敏感硫电极法检测大鼠血液及海马组织中H_2S浓度。用亚甲基蓝法测定大鼠海马神经元细胞胱硫醚-β-合酶CBS(cystathionine-beta-synthase)酶活性。结果水迷宫实验:P60、P90模型组大鼠较正常对照组潜伏期明显延长(P<0.05),且随月龄增加潜伏期越长。P60、P90模型组大鼠较对照组血液H_2S浓度分别降低6.5、11.5μmol/L、海马组织H_2S含量分别减少3.2、5.6μmol/L.mg,海马组织神经元细胞CBS酶活性降低24.94、34.46μmol/L.g.min。P30模型组与对照组的各项变化不明显。结论 DCDs模型鼠脑内H_2S含量及海马组织神经元细胞CBS酶活性降低,内源性H_2S降低与DCDs认知功能损害可能具有相关性,并为治疗皮质发育障碍的认知功能损害可能提供治疗途径。