卫生军士护理学专业课程思政案例库建设探索

为更有效地将课程思政融入卫生军士护理学专业教学,提高护理专业卫生军士分析问题、发现问题、解决问题的能力,本文着眼案例教学对卫生军士护理课程的积极作用,从建设课程思政案例库入手,讨论了建立卫生军士护理学专业课程思政案例库的必要性,并提出了建设案例库的方法路径。

表达miR-192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析

目的:构建表达miR-192的重组腺病毒,感染HepG2细胞建立miR-192高表达的细胞模型,以研究miR-192在肝细胞中的功能。方法:将miR-192前体基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack,构建miR-192穿梭载体pAdTrack-miR-192,经线性化和同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-miR-192;线性化后,在QBI-293A细胞中进行病毒包装;用包装成功的重组腺病毒感染HepG2细胞,72 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后进行定量PCR,检测miR-192和潜在靶分子视网膜母细胞瘤基因1(RB1)mRNA的变化。结果:获得670 bp的miR-192前体基因,经过穿梭载体后重组构建表达miR-192的腺病毒载体pAd-miR-192;将pAd-miR-192转染QBI-293A细胞,第8 d细胞病变及荧光的表达结果表明重组腺病毒成功包装;感染HepG2细胞后,定量PCR检测表明miR-192的表达较对照增加了835.87倍,同时检测到细胞中RB1 mRNA的表达显著降低。结论:构建了高效表达miR-192的腺病毒,建立了miR-192高表达的肝细胞模型,证明在肝细胞中抑制的RB1是miR-192靶分子,为后续miR-192在肝细胞中功能的研究奠定了基础。

重组人血清白蛋白-干扰素α-2b 融合蛋白体外抗乙型肝炎病毒活性评价

目的检测重组人血清白蛋白-干扰素α-2b融合蛋白(HSA-IFNα-2b)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法构建含1.6倍HBV基因组及绿色荧光蛋白的重组腺病毒(AdGFP-HBV),感染人肝细胞系HepG2细胞,构建HBV复制细胞模型;ELISA法检测HBV乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)表达;MTT法检测HSA-IFNα-2b对HepG2细胞的毒性作用;定量PCR法检测细胞内HBV RNA的相对表达以及细胞上清中HBV DNA绝对表达水平;双报告基因法检测HSA-IFNα-2b对HBV增强子Ⅰ活性的影响。结果 AdGFP-HBV感染HepG2细胞后可以复制表达HBV。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1加入AdGFP-HBV感染的HepG2细胞,使HBsAg表达降低51.32%(P<0.01),HBeAg降低50.26%(P<0.01),而相同浓度的HSA-IFNα-2b并不抑制细胞的增殖。随HSA-IFNα-2b浓度增加,其对HBsAg表达的抑制作用逐渐升高,HSA-IFNα-2b对HBsAg表达的抑制率(Y)与其浓度(X)的回归方程是Y=21.11 lgX+11.91(r2=0.954),IC50为63.76 kU·L-1。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使细胞中HBV RNA下降52.83%(P<0.01),培养上清中HBV DNA降低53.07%(P<0.01)。HSA-IFNα-2b 500 kU·L-1使HBV增强子Ⅰ活性下降40.04%(P<0.01)。结论构建了可用于药物评价的HBV复制细胞模型,HSA-IFNα-2b体外具有抗HBV活性。

抗GPC3 C端抗体辅助杀伤肝癌细胞HepG2的活性检测及抗原表位鉴定

目的：检测制备的7株抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）蛋白C端单克隆抗体是否具有辅助杀伤肝癌细胞的活性，并研究其识别的抗原表位。方法：用细胞增殖法检测制备的抗体是否具有抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC）活性；用生物信息软件分析GPC3蛋白C端（359～580残基）的结构及抗原特征，并据此将其分为4个截短片段，将克隆的各基因片段分别连接到原核表达载体pGEX-4T-1中，进行蛋白表达和纯化，用间接ELISA和Western印迹分析GPC3C端单克隆抗体的表位识别情况。结果与结论：制备的7株单克隆抗体对肝癌细胞HepG2均具有不同程度的辅助杀伤作用，其中5号单克隆抗体的辅助杀伤效果最好；表达并纯化了GPC3C端4个截短片段的重组蛋白；间接ELISA和Western印迹检测结果表明，7株抗体均特异性结合GPC3蛋白的473～525残基区段。

MicroRNA-582-5p在HBV感染中的作用及分子机制研究

目的探究微小RNA-582-5p(microRNA-582-5p,miR-582-5p)在HBV感染中的作用及分子机制。方法通过miRNA芯片筛选出miR-582-5p作为研究对象。分别通过过表达和抑制内源性miR-582-5p表达的方法,研究其对HBV DNA、HBV RNA、HBeAg、HBsAg等HBV复制和表达相关指标的影响。在分子机制研究中,双荧光素酶报告基因检测miR-582-5p对HBV启动子和增强子的影响,生物信息学预测miR-582-5p的靶基因,分别使用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot检测miR-582-5p对靶基因NOTCH1 mRNA和蛋白表达的影响。最后检测HBV相关蛋白表达对miR-582-5p的影响。结果qRT-PCR结果表明miR-582-5p随着HBV复制水平升高而逐渐降低。miR-582-5p抑制HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBsAg的表达。miR-582-5p能抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性,miR-582-5p能直接靶向HBV促进因子NOTCH1,抑制其mRNA和蛋白表达。HBx蛋白抑制miR-582-5p的表达。结论miR-582-5p通过抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性或靶向抑制HBV促进因子NOTCH1而抑制HBV复制和表达;同时,HBV的复制与表达抑制miR-582-5p的表达。

MicroRNA-27a通过靶向HBx mRNA抑制HBV复制

目的探究微小RNA-27a(microRNA-27a,miR-27a)在HBV感染中的作用及分子机制。方法实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测miR-27a对HBV DNA和HBV RNA的影响。ELISA法检测miR-27a对HBeAg和HBsAg的影响。生物信息学预测miR-27a的靶基因,然后用双荧光素酶报告基因检测、qRT-PCR和western blot检测miR-27a是否能够直接靶向靶基因以及对靶基因mRNA和蛋白表达的影响。最后用qRT-PCR检测HBV蛋白表达对miR-27a的影响。结果MiR-27a能抑制HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBsAg等HBV复制和表达的指标。生物信息学预测和双荧光素酶报告基因检测表明miR-27a能够直接靶向HBx,抑制HBx mRNA和蛋白表达。反之,HBx蛋白表达能抑制细胞内miR-27a的表达。结论MiR-27a通过直接靶向HBx进而抑制HBV的复制和表达,可以作为一种新的治疗HBV感染的潜在靶点。

新型冠状病毒肺炎出院患者核酸复阳研究进展

新型冠状病毒肺炎患者康复出院后核酸检测呈“再阳性”这一现象受到广泛关注,给临床治疗和疫情防控带来严峻挑战。本文综述了康复后核酸检测复阳的新型冠状病毒肺炎患者的流行病学特点、临床特点、核酸检测再阳性的可能原因及潜在传染性,为新型冠状病毒肺炎患者的出院管理和制定合理的疫情防控措施提供参考。

寄生虫教学标本的保存与管理

介绍了各类寄生虫标本的采集、制作和保存的规范方法,列举了几种常用的标本固定液的制作方法,通过探讨几种常见寄生虫不同发育期和不同寄生部位固定与保存的方法,使得寄生虫标本能够形态完整并得以长期保存,有效解决了寄生虫标本缺乏的问题,提升了寄生虫标本的保护与利用水平,使现有标本得到妥善保管,保证教学使用.

高空大跨度混凝土结构支撑平台的施工

以烟台城发城市广场工程为例,针对高空大跨度混凝土结构屋面的施工难题,提出一种悬空拼装钢结构支撑平台,并通过定型化滑轮组三角支架及平台四角固定滑轮卡具来拆除支撑平台。经实施,该工艺能满足高空大跨度屋面结构的施工要求,保证了施工质量,对同类工程具有一定的借鉴意义。

大悬挑屋面异形铝板幕墙施工技术

以烟台城发城市广场为施工实例,现场加工钢结构桁架并安装饰面铝单板,采用单元吊装安装的方式进行单榀造型柱檐口的安装。专门研制了可移动式吊装小车,能够在悬挑钢梁上灵活便捷地完成檐口组合单元式铝板幕墙安装施工,解决了大悬挑屋面异形铝板幕墙施工难度大、施工周期长等难题,为今后类似工程的设计、施工提供了一定的借鉴。

microRNA在HBV感染和致病中的作用研究进展

微小RNA (microRNA, miRNA)在宿主-病毒相互作用中起关键调节作用,参与HBV感染、复制和HBV相关疾病的调节。细胞miRNA可以通过直接结合HBV转录物或通过靶向与HBV生命周期相关的细胞因子间接调节HBV转录和复制。反过来,HBV感染也可以影响宿主细胞内的miRNA水平。HBV和miRNA之间的相互作用在HBV复制和HBV相关疾病的发病机制中发挥重要作用。本文对miRNA与HBV的相互关系进行综述,为进一步探讨HBV感染致病的分子机制和开发新的抗HBV治疗策略提供参考。

用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因表达的抗肝纤维化药物双报告基因系统的构建及其有效性鉴定

目的构建一种双报告基因系统，用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因（COLIAl）表达的抗肝纤维化药物。方法RT-PCR克隆转化生长因子β1（TGFβ1）全长基因，酶切后插入载体pcDNA3．1和pJW4303，构建真核表达载体pcDNA3.1-TGFβ1和pJW4303-TGFβl；以基因组DNA为模板，克隆COLlAl启动子，插入报告基因载体pGL4.29，构建含COLlAl启动子的报告基因载体pGL4.29-COLlAl promoter。上述重组载体鉴定使用酶切和序列测定。将pcDNA3.1-TGFβ1或pJW4303-TGFβ1与pGL4-COLlAl promoter、内参报告基因载体pRL-null共转染入肝星形细胞系LX-2中，构建转录激活的双报告基因系统。使用地塞米松鉴定该双报告基因系统评价抗肝纤维化药物的有效性。组间比较用Studant t检验分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果成功构建TGFβ1的两种真核表达载体和含COLlAl启动子的报告基因载体。通过双报告基因检测两种方式表达TGFβ1对COLlAl启动子活性的影响，结果表明：分泌表达的TGFβ1使cOLlAl启动子活性提高200倍以上（t=21.78，P=0.0001），非分泌表达的TGFβ1仅使cOLlAl启动子活性提高了不到2倍t=3.396，P=0.0274）。成功构建了转录激活的双报告基因系统。用COLlAl表达抑制剂地塞米松作为模式药物来鉴定该系统的有效性，结果显示地塞米松对COLlAl启动子有抑制作用，且呈有剂量依赖性。结论成功构建了用于筛选和评价抑制COLlAl表达的抗肝纤维化药物的双榀告基因系统并答定该系统的有效件．

新型冠状病毒无症状感染者的研究进展

新型冠状病毒无症状感染者给2019新型冠状病毒感染防控带来了严峻挑战。新型冠状病毒无症状感染者不知道自己的感染状态,难以进行必要的隔离和防护,加剧了病毒传播潜力。本研究总结了新型冠状病毒无症状感染者的流行病学特点和临床特征,对规划、设计和制订适当的公共卫生策略以有效控制2019新型冠状病毒的传播具有重要意义。

2019新型冠状病毒感染的免疫应答及其免疫致病机制的研究进展

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)引起的呼吸系统疾病。免疫应答在抑制2019-nCoV感染中发挥重要作用。然而,2019-nCoV在靶细胞内的活跃复制还能引起机体过度免疫激活和免疫失衡,导致肺部病理损伤。免疫反应是把"双刃剑",现对2019-nCoV感染引起的机体免疫应答特点及免疫致病机制进行总结。

HIV-1/SARS-CoV-2合并感染研究进展

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染导致的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)引发全球大流行。HIV感染者/艾滋病患者是一个特殊人群,由于其免疫系统受损及各种并发症,对SARS-CoV-2的感染风险、疾病严重程度和预后等产生重要影响。本文对HIV-1/SARS-CoV-2合并感染的流行病学特点、临床特征和转归等进行综述。

中国慢性乙型肝炎治愈研究进展与未解决的难题:2019年香山科学会议纪要

CHB的临床治愈是当前本领域的重大临床难题。为进一步促进我国CHB相关的临床、基础和转化医学研究,加强本领域国内外专家之间的学术交流,早日实现CHB临床治愈;同时为了让读者分享本领域的重大发现和最新成果,全面提升我国在乙型肝炎治疗和预防方面的实践能力和理论水平,由王福生院士、闻玉梅院士、袁正宏教授发起,北京解放军总医院和上海复旦大学承办的"慢性乙型肝炎功能性治愈"香山科学会议于2019年6月27日至28日在北京召开。

血小板在HIV-1慢性感染中作用的研究进展

血小板不仅介导机体止血和凝血过程,而且作为炎症细胞参与机体感染免疫。在1型艾滋病病毒(HIV-1)感染中,血小板内化吞噬HIV-1,充当病毒感染CD4+T淋巴细胞的中介,并且保护HIV-1不被机体免疫系统识别,促进HIV-1在体内的系统传播与持续存在。同时,活化的血小板可以通过释放促炎因子,维持系统的免疫活化和持续炎症反应。而且,血小板通过与免疫细胞的结合精准调节免疫细胞功能,进而影响机体对HIV-1感染的免疫应答。本文旨在了解血小板在促进HIV-1感染与免疫致病中的研究进展。

二甲双胍对HIV-1感染者免疫细胞功能影响的研究

目的体外实验探究二甲双胍对HIV-1感染者CD8细胞功能、CD4细胞的存活和单核细胞释放促炎性因子的作用。方法选取未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者为研究对象,将健康受试者作为对照,二甲双胍和不同刺激剂组合活化刺激两组受试者的PBMCs,采用流式细胞技术检测二甲双胍对CD8细胞、CD4细胞和单核细胞的作用。结果二甲双胍显著促进HIV-1特异性CD8细胞分泌IFN-γ,并在800μM浓度达到峰值(平均值3.28%vs.1.0%)。使用HIV-1肽库刺激,二甲双胍促进CD8细胞分泌IFN-γ的作用与在CD3/CD28抗体活化体系中结果相似。此外,二甲双胍明显降低尼日利亚菌素(nigericin)诱导的CD4细胞caspase-1的表达水平,50μM浓度下,HIV-1感染者CD4细胞caspase-1表达量降低6.7%(平均值22.7%vs.29.4%)。在脂多糖(LPS)诱导的单核细胞中,10000μM浓度下,TNF-α表达降低10.8%(平均值37.7%vs.48.5%),IL-6表达降低10.5%(平均值62.5%vs.73.0%)(P<0.05),并且具有浓度梯度效应。结论二甲双胍在体外能显著增强CD8细胞HIV-1特异性反应,促进CD4细胞存活,并有效降低单核细胞释放促炎性细胞因子。

HIV-1感染者外周血增加的CD71^(+)红系细胞特点及临床意义

目的探讨HIV-1感染者外周血CD71^(+)红系细胞的特点及其与疾病进展的关系。方法通过流式细胞术检测HIV-1感染者外周血CD71^(+)红系细胞,分析其与HIV-1 RNA、CD4细胞计数、CD4/CD8细胞比值的相关性。结果入组10例健康对照(HCs)和49例HIV-1感染者,后者包括28例未接受过ART者(TNs)和21例免疫重建成功患者(CRs)。与HCs组(平均值0.69%)相比,TNs组患者CD71^(+)红系细胞频率明显升高(平均值2.79%)。CRs组患者经ART后,CD71^(+)红系细胞频率降低(平均值1.18%),但是未恢复到正常水平。TNs组患者CD71^(+)红系细胞频率与病毒载量呈显著正相关(r=0.503 4,P=0.006 3),与CD4/CD8细胞比值呈明显负相关(r=-0.464 0,P=0.012 9)。与HCs(平均值158 g/L)相比,TNs组患者外周血血红蛋白含量明显降低(平均值149 g/L);CRs组患者经ART后,血红蛋白含量升高(平均值154 g/L),并且恢复到正常水平;TNs组患者CD71^(+)红系细胞频率与血红蛋白含量呈明显负相关(r=-0.462 5,P=0.013 2)。与HCs(平均值53.84%)相比,TNs组患者CD71^(+)红系细胞活性氧(ROS)表达水平明显升高(平均值66.64%);CRs组患者经ART后,CD71^(+)红系细胞表达ROS显著降低(平均值43.82%),并且降至正常水平。结论HIV-1感染导致外周血CD71^(+)红系细胞频率升高,并且与疾病进展和血红蛋白的降低密切相关。