过表达miR-382的肿瘤相关巨噬细胞对三阴性乳腺癌生物学特性的影响

目的探讨microRNA-382(miR-382)在肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)中的表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞(4T1)生物学特性的影响。方法以小鼠腹腔巨噬细胞(mouse peritoneal macrophages,PMs)作为研究对象,分为PMs组,TAMs组和L-TAMs组;Western blot与qRT-PCR检测极化指标(IL-10、TNF-α)、miR-382、PGC-1α和NF-κB的表达变化;流式细胞术检测TAMs的极化变化(CD86、CD206);激光共聚焦显微镜成像检测PGC-1α和NF-κB的表达变化;以4T1细胞作为研究对象,分为4T1组,4T1+PMs组和4T1+L-PMs组,流式细胞术检测细胞凋亡率与细胞周期;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与PMs组比较,TAMs组IL-10、CD206和PGC-1α表达明显增加(P<0.05),miR-382、TNF-α和CD86表达明显降低(P<0.05),NF-κB转录活性显著降低(P<0.05),而L-TAMs组TNF-α、CD86和miR-382表达明显增高(P<0.05),IL-10、CD206和PGC-1α表达明显降低(P<0.05),NF-κB转录活性显著增强(P<0.05);与4T1组比较,4T1+PMs组侵袭能力明显增强(P<0.05),凋亡率明显下降(P<0.05),而4T1+L-PMs组侵袭能力明显下降(P<0.05),凋亡率明显增高(P<0.05)。结论 TAMs通过调节miR-382的表达可抑制TNBC的侵袭和增殖,其机制可能与TAMs中miR-382抑制PGC-1α的表达、增强NF-κB的转录活性,进而抑制TAMs的M2分化有关。

乌司他丁抑制CCL17/CCL22-CCR4介导的小鼠乳腺癌肝转移

背景与目的:越来越多的研究表明趋化因子及其受体在癌症的发生、发展和转移中起关键作用。本文研究了乌司他丁(ulinastatin)对胸腺和活化调节趋化因子(thymus and activation-regulated chemokine,TARC)即CCL17/巨噬细胞来源的趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)即CCL22-CC族趋化因子受体4(CC chemokine receptor 4,CCR4)信号通路介导的乳腺癌肝转移的影响及其作用机制。方法:通过小鼠乳腺脂肪垫(mfp)接种4T1乳腺癌细胞的方式构建小鼠乳腺癌模型,15 d后取小鼠乳腺肿瘤,并记录乳腺肿瘤的质量;采用免疫组织化学法检测乳腺肿瘤组织中CCR4及肝脏转移瘤中CCL22、CCL17蛋白的表达;采用慢病毒转染的方式抑制4T1乳腺癌细胞CCR4基因,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测抑制效果,并以同样方式进行小鼠乳腺成瘤并观察肿瘤生长情况;用三种不同浓度乌司他丁处理4T1细胞荷瘤小鼠,15 d后采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中CCR4及肝脏组织中CCL22及CCL17的表达,采用Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)分别检测肝脏组织中TGF-β的表达以及microRNA-34a和microRNA-31的含量,并进行TGF-β和microRNA-34a、microRNA-31、CCL22以及CCL17的相关性分析。结果:小鼠乳腺癌组织高表达CCR4,肝脏转移瘤高表达CCL22和CCL17;沉默4T1乳腺癌细胞CCR4的表达,可抑制乳腺癌成瘤性;乌司他丁抑制CCR4、TGF-β、CCL22、microRNA-31和CCL17的表达,促进microRNA-34a的表达。结论:乌司他丁具有抑制乳腺癌肝转移的作用,其具体机制可能与乌司他丁通过TGF-β-microRNA-34a-CCL22轴及microRNA-31-TGF-β-CCL17轴抑制肝脏组织中与乳腺癌肝转移密切相关的CCL17/CCL22-CCR4信号通路有关。

职业院校多语种旅游志愿者队伍建设探索

建设多语种旅游志愿者队伍,既可以通过旅游志愿服务实践活动,提高学生的语言技能水平,展现地区大学生的良好精神风貌;又可以通过多语言的旅游宣传和服务,提升地方旅游志愿服务水平,促进旅游事业的发展,具有很强的现实意义。

miR-382通过PGC-1α对三阴性乳腺癌细胞株4T1生物学特性的影响

目的研究乳腺癌4T1细胞内miR-382下调PGC-1α对细胞生物学特性的影响。方法①以4T1细胞作为研究对象,miR-382mimics或抑制性探针anti-miR-382转染4T1细胞后,以qRT-PCR检测4T1中miR-382水平变化,qRT-PCR和Western blot检测各组PGC-1α的表达水平变化;②荧光素酶报告基因检测miR-382与PGC-1α3′UTR的结合位点;③将miR-382mimics或对照miR分别与pCDNA3.1或pCDNA-PGC1α共转染于4T1细胞,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的变化;CCK8实验检测细胞增殖活力的变化;皮下移植瘤实验和尾静脉肺移植瘤实验分别检测小鼠体内肿瘤生长及肺转移的变化。结果转染miR-382 mimics之后乳腺癌细胞PGC-1α表达明显降低(P<0.05),转染抑制性探针anti-miR-382后PGC-1α表达明显升高(P<0.05);miR-382与PGC-1α存在靶向调控核心序列,其作用位点位于PGC-1α3′UTR 565-582(核心序列ACAACTT)。相比对照+pCDNA3.1组,miR-382+pCDNA3.1组的细胞迁移和增殖活力明显降低,4T1皮下移植瘤体积和尾静脉移植瘤肺转移灶的面积显著减小(P<0.05);对照+pCDNA-PGC-1α较对照+pCDNA3.1组,细胞迁移和增殖活力明显提高,4T1皮下移植瘤体积和尾静脉移植瘤肺转移灶的面积显著增加(P<0.05);miR-382的抑瘤效应因PGC-1α过表达而被阻断。结论miR-382可能通过PGC-1α抑制4T1细胞株的增殖和肺转移能力,其作用位点可能位于PGC-1α3′UTR 565-582。

乌司他丁联合去氧氟尿苷对乳腺癌肿瘤微环境的影响

目的:探讨乌司他丁(ulinastatin,UTI)联合去氧氟尿苷(doxifluridine,DFD)对肿瘤生长及肿瘤微环境的影响。方法:构建Balb/c小鼠荷4TI乳腺癌肿瘤模型,将70只小鼠随机分为空白组,2个单药组以及4个UTI合用DFD组共7组分别给药,计算肿瘤抑制率;流式细胞术检测Treg细胞,各功能树突状细胞;Western blot检测IL-10及TGF-β表达;免疫组化法检测CD34表达及肿瘤细胞凋亡情况。结果:对比空白组,各用药组均能抑制肿瘤生长,Treg/CD4^+T细胞的比值(P<0.001),IL-10与TGF-β的表达量(P<0.001)及CD34分子的表达(P<0.001)均降低,各功能树突状细胞(P<0.001)和肿瘤细胞的凋亡(P<0.001)增加,UTI合用3 mg DFD组实验效果最显著。结论:UTI联合DFD可抑制免疫正常小鼠乳腺癌的生长,各组中以UTI联合3 mg DFD效果最为明显。其机制可能与调节Treg细胞以及DC细胞抗原提呈相关因子有关。

新西兰环境保护工作的特点及对中国的启示

众所周知,新西兰地广人稀,环境优美,政府一向高度重视环境保护,注重可持续发展,公民环保意识强,其生态成效也得到了国际认可。本文从产业结构、环保法规、公众教育、循环经济等方面介绍了新西兰环境保护工作的特点,指出我国环境保护工作中的一系列问题,总结出新西兰环境保护工作的经验,为我国环境保护提供借鉴。