微创采血结合多色流式细胞术分析小鼠外周血记忆T细胞亚群

目的为实现序贯多时间连续采血监测小鼠外周血记忆T细胞亚群的变化情况，建立并优化微创采血结合多色流式细胞术分析的方法体系。方法经隐静脉进行微创采血，使用荧光补偿微球进行多色荧光补偿矩阵的建立，在BDCalibur双激光流式细胞仪上分析小鼠外周血记忆T细胞亚群（初始T细胞、中心记忆T细胞、效应记忆T细胞），评估采血体积、全血是否离心、抗体孵育浓度、红细胞裂解后是否洗涤等参数对多色流式分析结果的影响。随后采用优化的流式细胞分析方法动态评估C57和动脉粥样硬化（As）易发载脂蛋白E基因敲除（apoE-/-）小鼠在从常规饮食切换至高脂饮食过程中记忆T细胞的演变过程。结果（1）经小鼠隐静脉可实现10～50μL采血，该采血可无需对实验动物进行麻醉，能够实现多次重复采血，且10μL全血即可满足多色流式细胞术分析的需要，并减少抗体用量。（2）联合高速离心分离血细胞进一步缩小抗体孵育体积，则可进一步节省抗体的用量。（3）对抗体浓度的优化能在保证检测结果准确性和可重复性好的基础上进一步降低抗体用量和背景荧光的干扰。（4）红细胞裂解后加用洗涤可进一步降低背景荧光，但延长操作时间；也可裂解后直接上机检测。（5）使用上述流式细胞学分析方法揭示：apoE-/-小鼠在常规饮食基线水平其体内的效应记忆T细胞水平即高于对照C57小鼠（P〈0．05），给予高脂饮食3周后基本达到平台，而C57小鼠在高脂饮食2周即达到平台，表明apoE-/-小鼠在AS斑块进展早期即出现免疫调节紊乱。结论采用隐静脉采血结合优化流式细胞术抗体孵育流程可实现序贯连续采血，完成对小鼠体内记忆T细胞亚群的动态观察。

养心氏片治疗冠心病心绞痛疗效的Meta分析

目的系统评价养心氏片治疗冠心病心绞痛的临床疗效。方法计算机检索中国知网数据库、万方数据库、重庆维普全文数据库(VIP)及PubMed数据库自建库以来至2016年10月公开发表的与养心氏片治疗冠心病心绞痛相关的随机对照试验(RCT),经质量评价最终纳入文献后,采用STATA 14软件进行Meta分析。结果共纳入14个研究,全部为中文,Jadad评分2篇为2分,12篇为1分。Meta分析结果显示:与常规治疗组比较,养心氏片可以改善心绞痛症状[RR=1.19,95%CI(1.09~1.28),P<0.01]和心电图[RR=1.28,95%CI(1.12~1.46),P<0.001];与常规治疗药物合用时亦可明显提高临床疗效。结论养心氏片可有效改善心绞痛症状和心电图,治疗冠心病心绞痛临床疗效显著。

中性粒细胞与淋巴细胞比值评估冠心病预后

固有免疫和适应性免疫共同参与了动脉粥样硬化病变的形成和发展。中性粒细胞在动脉粥样硬化斑块形成中发挥了重要作用。临床研究表明,中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)具有快速、经济、相对稳定的优势,能客观地评价机体的免疫炎症状态。NLR在预测冠心病患者冠状动脉病变严重程度和心血管并发症方面的临床价值,越来越受到关注。

一种动态检测小鼠微量血中T细胞受体重排删除环含量的方法

目的:通过检测比较外周血(颈动脉大量采血和微量隐静脉采血)、胸腺组织和脾脏组织等不同成分或组织中T细胞受体重排删除环(T cell receptor rearrangement excision circles,TREC)的含量,并建立一种通过微量外周血PCR预扩增的方法,评估胸腺输出功能。方法:采用C57BL/6小鼠作为实验对象,分成幼年组(5周龄,n=10)和成年组(15周龄,n=10)。经过隐静脉采血及颈动脉采血后处死小鼠,取小鼠胸腺器官和脾脏器官,提取基因组DNA(g DNA),隐静脉微量血g DNA通过PCR预扩增,提纯后再和颈动脉血、胸腺组织和脾脏组织g DNA一起进行实时定量PCR,分析各组织成分TREC的表达水平及差别。结果:幼年组胸腺组织及外周血中TREC的含量比成年组高,且二者趋势基本一致;而脾脏组织结果与其相反;幼年组小鼠胸腺组织中TREC的含量比脾脏组织中高,成年组小鼠结果与之相反;微量外周血经过预扩增后再进行实时定量PCR的结果与直接定量PCR结果一致,且更高效。结论:研究提供了一种新型高效的动态检测T细胞受体重排删除环和检测胸腺输出功能的方法。