宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的建立及其应用

宽口裂腹鱼为塔里木河水系的特有物种。为建立其尾鳍细胞系,笔者采用组织块法和胰酶消化法相结合,分别用含胎牛血清的DME/F12培养基体外培养尾鳍组织。初步建立宽口裂腹鱼尾鳍细胞系,细胞传代培养至45代。细胞呈悬浮生长,最适培养液为DME/F12,最适胎牛血清质量分数为20%,最适温度为25℃。第10代细胞的群体倍增时间为24.94 h,细胞呈“S”型生长。第6代细胞液氮冷冻保存180 d后复苏,经台盼蓝染色计数,(88.72±0.99)%的宽口裂腹鱼尾鳍细胞系具有活性,复苏后增殖速度快,可正常传代。细菌、真菌、支原体的鉴定未发现污染。第10代细胞线粒体16S rRNA基因测序结果与GenBank中基因序列做一致性对比,宽口裂腹鱼尾鳍细胞系与NC036933.1的一致率达99.91%,从分子水平证明,宽口裂腹鱼尾鳍细胞系来自宽口裂腹鱼。NaCl质量分数为8‰时,宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的相对增殖率最高;NaHCO3质量浓度为7 g/L时,宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的相对增殖率最高;宽口裂腹鱼尾鳍细胞系的相对增殖率随盐碱度增加呈先升后降趋势。

塔里木裂腹鱼尾鳍细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响

为了建立塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)尾鳍细胞系,本研究采用组织块法,分别用含胎牛血清(FBS)的DME/F12培养基体外培养塔里木裂腹鱼尾鳍组织,初步建立了塔里木裂腹鱼尾鳍细胞系(BICF1)。采用MTT法测定分析盐度(NaCl)和碱度(NaHCO_(3))对其增殖的影响。结果显示,BICF1悬浮培养传至45代,最适培养液为DME/F12,最适FBS浓度为20%,最适温度为25℃。第10代BICF1的群体倍增时间为28.11 h,呈“S”型生长。第6代BICF1液氮冻存180 d后复苏,经台盼蓝染色计数,BICF1有(87.85±0.66)%的细胞具有活性,复苏后可增殖并传代。BICF1无细菌、真菌、支原体污染。第10代BICF1线粒体16S rRNA测序结果与GenBank基因序列进行一致性对比,结果显示,BICF1与JQ844133.1的一致率为100%,表明BICF1来自于塔里木裂腹鱼。BICF1增殖数量在盐度为1、2、4、6时呈上升趋势,在盐度为6、8、10时呈下降趋势;盐度为6时,BICF1增殖数量最高。BICF1增殖数量在碱度为2、3、4、5、6 g/L时呈上升趋势,在碱度为6、7、8、10 g/L时呈下降趋势;碱度为6 g/L时,BICF1增殖数量最高。细胞增殖数量随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。本研究旨在为合理开发和利用塔里木裂腹鱼遗传资源以及建立和保护其种质资源提供一定的科学依据。

宽口裂腹鱼中肾组织细胞系建立的初步研究

鱼类细胞培养是进行种质保存、基因功能分析、细胞工程育种等研究的重要材料和模型。为了建立濒危的宽口裂腹鱼(Schizothorax eurystomus)中肾组织细胞系,本研究以其中肾组织为材料,以组织块移植法启动细胞原代培养,待细胞稳定后再进行传代培养,建立宽口裂腹鱼中肾组织细胞系,命名为EUM10。分析宽口裂腹鱼中肾细胞系冻存复苏能力和最适生长条件,且通过PCR技术检验污染状况,用线粒体基因片段分析鉴定细胞的来源。结果显示,宽口裂腹鱼中肾组织细胞的最佳培养基为DME/F-12,最适温度为25℃,最适血清浓度为20%;细胞呈悬浮生长,生长曲线为“S”型曲线,第10代中肾组织细胞系细胞的群体倍增时间为23.26 h;第6代细胞液氮冷冻保存6个月后,复苏存活率达91.91%;经污染鉴定无污染现象;EUM10第10代细胞线粒体16S rRNA序列分析结果与宽口裂腹鱼基因序列一致性为99.81%,表明细胞系来自宽口裂腹鱼。本研究成功建立了宽口裂腹鱼中肾组织细胞系,可将宽口裂腹鱼中肾细胞系作为体外体系运用于宽口裂腹鱼的研究,如细胞遗传学、基因功能分析等,可为宽口裂腹鱼的基础研究和育种工作提供基础资料。

杂交鲟泌尿系统的组织学初步观察

为了解杂交鲟(施氏鲟♀×西伯利亚鲟♂)渗透压调节机理及其对环境的适应性,本研究采用常规组织学技术,对杂交鲟泌尿系统的组织学进行了初步观察。结果表明:其泌尿系统由中肾、输尿管和膀胱构成。中肾包括肾小体、肾小管和填充于其间的拟淋巴组织,中肾无皮质和髓质之分。肾小管分成颈段、第一近端段、第二近端段、远端段。输尿管可分为黏膜层、肌肉层、纤维层,膀胱是输尿管膀胱,输尿管和膀胱黏膜上皮都有分泌细胞分布。

塔里木裂腹鱼肾细胞系的建立及盐碱度对其增殖的影响

【目的】建立塔里木裂腹鱼肾细胞系并研究盐碱度对其的影响,旨在为合理开发和利用塔里木裂腹鱼遗传资源以及建立和保护其种质资源提供一定的科学依据。【方法】采用组织块法,分别用含胎牛血清(FBS)的DME/F12培养基体外培养肾组织,初步建立塔里木裂腹鱼肾细胞系(BIM14)。采用MTT法测定分析NaCl盐度和NaHCO碱度对BIM14增殖的影响。【结果】BIM14悬浮培养传至60代;最适培养液为DME/F12;最适FBS浓度为20%;最适温度为25℃。第10代BIM14的群体倍增时间为16.80 h,呈“S”型生长。第6代BIM14液氮冻存180 d后复苏,经台盼蓝染色计数,BIM14有(91.13±0.72)%的细胞具有活性,复苏后可增殖并传代。BIM14无细菌、真菌、支原体污染。第10代BIM14线粒体16srRNA测序结果与GenBank基因序列做一致性对比,BIM14与GenBank数据库中JQ844133.1的一致率为99.91%,证明BIM14来自塔里木裂腹鱼。NaCl盐度1‰、2‰、4‰、6‰依次使BIM14增殖上升,8‰、10‰依次使BIM14增殖下降,6‰时BIM14增殖最高。NaHCO碱度2、3、4、5、6 g/L依次使BIM14增殖上升,7、8、10 g/L依次使BIM14增殖下降,6 g/L时BIM14增殖最高。BIM14增殖随盐碱度增加呈现先升高后下降的趋势。【结论】建立了塔里木裂腹鱼肾细胞系(BIM14),盐碱度对BIM14细胞增殖有显著的影响。