外源性膜联蛋白A5对胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探究外源性膜联蛋白A5(ANXA5)对人胃癌MGC-803细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并初步探讨其影响迁移的机制。方法制备ANXA5蛋白培养液,将人胃癌MGC-803细胞分为外源ANXA5组和空白对照组,分别用ANXA5蛋白培养液和等量培养基进行处理,培养24 h,倒置显微镜观察其形态学变化。MTT和Western blot法检测外源性ANXA5对细胞增殖的影响。PI荧光染色法对两组细胞的凋亡情况进行定量分析。细胞划痕实验检测两组细胞的迁移能力。Western blot法在蛋白水平上检测外源性ANXA5对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响。结果将ANXA5蛋白外源性作用于MGC-803细胞后,细胞发生了细胞变圆、胞浆呈空泡状等明显的形态学变化。外源ANXA5组MGC-803细胞增殖、迁移能力明显低于空白对照组(P<0.05),且外源ANXA5组凋亡细胞的数量明显增加(P<0.001)。外源ANXA5组E-cadherin的表达显著高于空白对照组(P<0.01),而MMP-9的表达低于空白对照组(P<0.05)。结论ANXA5蛋白可通过外源性添加的方式抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,而且可能通过对E-cadherin和MMP-9的调控抑制了细胞的迁移。

敲低膜联蛋白A5对人胃癌细胞系MKN-45增殖的作用

目的探讨膜联蛋白A5低表达对人胃癌MKN-45细胞增殖和凋亡的影响。方法将胃癌MKN-45细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组。采用RNA干扰技术将靶向膜联蛋白A5的siRNA和阴性对照siRNA脂质体转染法转染细胞,转染48 h后采用qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平进行抑制效率的鉴定,空白对照组不予任何处理。应用MTT、平板克隆形成法检测膜联蛋白A5低表达对胃癌MKN-45细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot法检测增殖核抗原PCNA和周期相关蛋白CyclinD1的表达。结果靶向膜联蛋白A5的siRNA转染后,胃癌MKN-45细胞中膜联蛋白A5的表达较阴性对照和空白对照组明显降低(P<0.05)。MTT和克隆形成实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力和集落形成能力较阴性对照和空白对照组显著增高(P<0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率无明显改变;PCNA和Cyclin D1的表达显著上调。结论膜联蛋白A5低表达能促进胃癌细胞的增殖。

敲低膜联蛋白A5对人胃癌细胞Galectin-3表达的影响

目的:探讨膜联蛋白A5低表达对人胃癌细胞Galectin-3表达的影响。方法:人胃癌HGC-27细胞和MGC-803细胞分别分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,siRNA干扰组、阴性对照组细胞分别转染靶向膜联蛋白A5的si RNA Oligo和阴性对照siRNA Oligo。采用Western blotting法和qRT-PCR法检测HGC-27细胞和MGC-803细胞膜联蛋白A5、Galectin-3蛋白和m RNA的表达情况。结果:膜联蛋白A5的表达受抑制后,HGC-27细胞Galectin-3蛋白和m RNA的表达均明显降低,与阴性对照组和空白对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。与阴性对照组和空白对照组相比,si RNA干扰组MGC-803细胞Galectin-3的表达无明显改变(P>0.05)。结论:膜联蛋白A5对胃癌细胞Galectin-3的表达具有调控作用,该调控作用可能与胃癌细胞的分化程度有关。