p53蛋白磷酸化及其功能

p53作为最重要的抑癌基因之一,在肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用。在正常条件下,p53的活性和蛋白水平在细胞内维持着一个较低的水平。当细胞感应应激,p53发生系列翻译后修饰,蛋白水平和活性发生改变,主要作为转录因子调控多种下游靶基因的表达,从而启动细胞周期阻滞、凋亡、衰老和分化等细胞学效应。p53的翻译后修饰在响应应激和启动p53参与相应的细胞学效应的过程中起着重要的作用。p53的磷酸化修饰是最常见的翻译后修饰,能够影响p53的稳定性及与反应元件的结合能力,从而调控p53的活性。现综述p53的功能结构域,p53最常见的不同位点的磷酸化修饰及其参与的细胞学效应,并阐释p53磷酸化在p53调控中的重要性和与疾病的相关性。

ZNF331过表达对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究ZNF331过表达对结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法构建ZNF331过表达的慢病毒载体Flag-p LV-Neo-ZNF331,并进行包装,感染HCT116/p53+/+(p53野生型)和HCT116/p53-/-(p53缺陷型)细胞,通过Western印迹法鉴定建立ZNF331稳定过表达的细胞株。分别通过细胞增殖实验、集落形成实验、DAPI染色、流式细胞仪分析ZNF331对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响。通过免疫沉淀实验、报告基因实验和实时(real-time)PCR检测ZNF331与p53相互作用、对p53转录活性和p53凋亡相关靶基因表达的影响。结果成功构建ZNF331过表达的慢病毒载体;建立ZNF331稳定过表达的HCT116细胞克隆;ZNF331对HCT116/p53+/+细胞增殖无明显影响,但能抑制HCT116/p53-/-细胞增殖(P<0.01);ZNF331与p53存在相互作用,与空载对照细胞相比,ZNF331能梯度抑制p53转录活性,且能抑制p53凋亡相关靶基因Puma和p53AIP1的mRNA表达水平(P<0.05);ZNF331能抑制p53诱导的细胞凋亡(P<0.01)。结论 ZNF331过表达对结肠癌细胞增殖的影响依赖p53状态;且能通过与p53相互作用,抑制p53转录活性而抑制结肠癌细胞凋亡。