L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因5′端二级结构对重组表达的抑制机制及消除策略

探究赤拟谷盗Tribolium castaneum L-天冬氨酸-α-脱羧酶(PanD)与人工高效表达元件适配过程中翻译抑制产生的机制,并发展新的消除策略.首先在枯草芽孢杆菌中利用高效表达元件验证翻译抑制现象并分析了翻译抑制产生的机制,同时融合sfGFP考察其对翻译抑制的影响,筛选与PanD酶适配性强的精简融合肽.结果显示,强组成型启动子不能介导PanD高表达,呈翻译抑制.分析证实,panD转录后mRNA的5'编码区与5'UTR形成抑制性的二级结构,降低翻译起始效率.将两种报告基因和其N端部分序列作为绝缘肽分别与PanD的N端融合后均能够提升重组蛋白的表达水平,消除由mRNA分子内部的顺式作用导致的翻译抑制现象.这为深入探索利用通用型肽绝缘子元件稳定异源基因在底盘中的表达提供依据.

微波辅助萃取小米黄色素的响应面法优化

采用微波辅助提取技术研究小米黄色素的最佳提取工艺。利用单因素实验确定微波辅助提取过程中微波辐射功率、微波辐射时间、料液比、乙醇体积分数对吸光度的影响;利用单因素实验选取3个影响较大的因素进行响应面法分析优化,并建立二次多项式回归方程获得微波辅助萃取小米黄色素的最佳参数为:微波功率580 W,微波时间74 s,乙醇体积分数94%,在此条件下小米黄色素提取液的吸光度可达0.759,得率为10.23%。色素产品除了含有类胡萝卜素外,还含有黄酮类物质。