坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化

坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗透压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中。热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用。构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义。利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序。从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶SmaⅠ和NotⅠ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70。通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功。

中国沿海浒苔属rbcL和ITS序列比较及系统进化分析

为阐明中国沿海浒苔的亲缘关系及地理分布特点,采集青岛栈桥、盐城弶港、宁波象山、温州平阳四地浒苔样本,克隆测序得到ITSl、5.8S rDNA和ITS2 3种不同长度序列片段.四个地区的rbcL目的片段,长度均为1 201bp.分析核苷酸差异和遗传距离,采用邻接法建立系统发生树.结果显示,ITS序列进化速率较快,rbcL序列相当保守.ITS区较短,GC含量均在65%以上,5.8S rDNA的CG含量在50%左右,ITS1区的序列差异大于ITS2区.四个地区的浒苔存在一定的地理差异,盐城和青岛的样本间的亲缘关系较近;宁波和温州的样本间的亲缘关系较近.石莼属（Ulva）和浒苔属（Enteromorpha）的物种没有聚成各自独立的分枝,而是相互混合在一起,应是两个亲缘关系相近的属.引起青岛绿潮的海藻很可能是来自盐城海域的Enteromorphalinza或Enteromorpha prolifera.