RNAi在植物寄生线虫抗性研究中靶基因的选择策略

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由dsRNA起始的转录后基因沉默机制。近年来,RNAi技术在植物抗线虫研究方面得到广泛的应用。随着线虫基因组测序工作的不断推进,越来越多的线虫基因被开发继而当作RNA干扰的靶基因,其中以寄生线虫的生长发育或寄生过程建立等所必需的基因作为RNAi的目的基因是防治线虫的新方法,也是培育抗性品种的新选择。文章介绍了在RNAi研究中,所选择的植物寄生线虫基因的种类及其研究进展。

转基因技术对提高大豆油脂和油酸含量的作用

植物油脂在人们的日常生活中有着举足轻重的地位,大豆(Glycine max L. Merrill)是我国最重要的油料作物和饲料作物之一,也是人类植物性蛋白和油脂的重要来源。大豆中油脂和油酸的含量均为20%左右。利用生物工程技术手段,对调控脂肪酸合成和积累的关键基因进行编辑和改良,能够提高大豆种子中油分含量或者改善脂肪酸组成,不仅能够加快优质高油、高油酸大豆育种进程,在人类健康方面也具有重要的意义,而且为大豆油成为新能源的发展提供可能。

抗病毒转基因大豆事件外源T-DNA序列分析及定性检测

转基因作物的T-DNA插入及其与宿主基因组的连接序列构成的侧翼区域,是转基因事件检测的关键组成部分,也是转基因作物开发、评估和监管所必需的。前期研究得到2个携带大豆花叶病毒P3(soybean mosaic virus P3)基因干扰片段的转基因大豆事件,即L13和L104,可显著提高大豆对大豆花叶病毒、大豆花叶坏死病毒和西瓜花叶病毒的抗性,具有较强的光谱性。为了便于对该转基因事件进行监管以及建立事件特异性检测方法,本研究通过Illumina Xten平台,对L13和L104进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),并结合生物信息学分析和PCR技术,对转基因事件L13和L104的旁侧序列进行了分析。通过全基因组测序,每一个事件获得了超过12.13 Gb的原始数据,测序深度为11×,与大豆参考基因组(Wm82.a2.v1)和转化载体序列做比较,初步识别出这两个转化事件T-DNA的边界及其旁侧序列。转化事件L13和L104的T-DNA分别位于Chr04和Chr11染色体上。进一步的PCR检测和序列测定表明转基因事件L13的T-DNA为单位点双拷贝整合到大豆基因组Chr04:46747946位点;转基因事件L104的T-DNA为单拷贝插入,整合位点为Chr11:30461895位点。结果证明了全基因组测序在识别转基因作物T-DNA插入和旁侧序列区域方面的有效性和稳定性。此外,插入位点的鉴定和事件特异性检测的建立将有助于广谱抗病毒转基因大豆品种的应用和发展。

基于回归测试的软件测试方法的研究与应用

为节省回归测试的时间和资源,提出了一种基于回归测试的软件测试方法(Hierarchy-PS-TCP)。该方法首先按照分层程序切片技术搜索程序的不同版本,利用UML类图及顺序图,从而定位不同版本程序间的差别。仅对差别部分生成测试用例集,节省大量开支。再利用优先级技术按照测试用例优先级公式对测试用例划分优先级,根据优先级高低进行排序,按照次序进行回归测试。从而提高了回归测试的效率,有效地缩减了回归测试用例集,同时降低了回归测试的成本。

面向非计算机类专业Python编程教学设计研究

针对非计算机专业编程语言公选课教学问题,文章分析了Python语言作为其优先选择的原因,并针对非计算机专业学生特点结合Python语言特点重点从教学内容、教学方法方面进行了设计与探讨,提出了"分方向的理论与实践指导"的教学设计,有助于全面提升教学质量,使学生有机会掌握一门终身受用的程序设计语言。

行业协会的环境适应性与管理创新——基于复杂适应系统理论视角

中国市场经济的发展和政府职能转变,为行业协会的发展提供了机遇和空间,同时也对行业协会提出了新的挑战。在新的变化环境中,如何加强自身管理适应发展趋势成为行业协会面临的一大课题。基于复杂适应系统理论强调主体的主动性及对环境的适应性等,行业协会要完善管理结构,增强主动性;发挥协会与政府、企业、公众的交互作用,实现自我优化以适应环境变化;在发挥预测性、保持动态性的同时增强行业协会的适应性。

基于SAS的校园一卡通数据分析

基于SAS软件,文章针对校园一卡通消费数据进行了数据挖掘。文章首先对于此问题的总体目标及设计方案进行了统筹规划;对于原始数据进行了初步处理;采用k均值算法对消费数据进行聚类分析,对学生消费情况进行分类,从而掌握学生消费情况,了解学生的消费趋势。

浅谈数字媒体艺术专业编程语言的教学方法——以程序设计基础(JavaScript)为例

本文简述了编程语言在数字媒体艺术专业课程体系中的重要作用,分析探讨了数字媒体艺术专业在编程语言教学中存在的问题,旨在丰富该专业的教学思路,提高学生对编程语言的学习兴趣,增强学生的逻辑思维能力,改进教学方法,提高教学质量和教学效果。

4种矮牵牛叶片直接诱导不定芽再生体系建立

选择4种不同花色的矮牵牛品种‘Pink’、‘Red’、‘Pink Vein’和‘Peppermint’,以MS培养基为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA、NAA、IBA激素,除草剂双丙氨膦和抗生素壮观霉素,研究其不定芽的诱导频率,为后续的叶绿体转化提供受体。结果表明:影响矮牵牛叶片诱导不定芽因素中,品种间的影响比激素更重要。当诱导培养基中的6-BA质量浓度为1.0 mg·L-1、NAA质量浓度为0.5 mg·L-1时,诱导效果最佳,是品种‘Pink’、‘Pink Vein’的最适培养基;同样地,品种‘Peppermint’最适培养基中,6-BA质量浓度不变、NAA的质量浓度降低至0.3 mg·L-1;品种‘Red’最适培养基中,6-BA质量浓度仍不变、NAA质量浓度降低至0.1 mg·L-1。4个矮牵牛品种的不定芽诱导率,由高到低的顺序为‘Pink’、‘Pink Vein’、‘Peppermint’、‘Red’,因此,优先选择品种‘Pink’作为转基因受体材料。分别利用不同质量浓度双丙氨膦和壮观霉素筛选,通过二者对品种‘Pink’叶片分化的影响,发现双丙氨膦和壮观霉素的最低抑制质量浓度分别为3、100 mg·L-1。该研究结果对今后利用叶绿体遗传转化技术改良矮牵牛品种提供了技术支持。

房价变化映射房产政策改革

一、新闻背景 2005年3月26日，国务院办公厅下发《关于切实稳定住房价格的通知》，要求各地政府重视房价上涨过快这一现象。刚过1个月，即4月28日，国务院再次出台了“加强房地产市场引导和调控的八条措施”，“国八条”为具体硬性措施，每条措施都直指房价涨幅过快。

耐盐转基因大豆事件FA8015旁侧序列分离及定性PCR检测

本研究前期利用转基因技术,将菠菜(Atriplex hortensis)甜菜碱醛脱氢酶编码基因Ah BADH导入栽培大豆Williams 82中,获得耐盐性较强的转基因大豆事件FA8015。为进一步加快该转基因事件生物安全评价,本研究分离了FA8015外源T-DNA旁侧序列,并依据其序列特征,建立事件特异性检测方法。Southern杂交结果表明,转基因事件FA8015外源T-DNA为单拷贝插入。利用基因组重测序技术,获得转基因大豆事件FA8015的基因组信息,并与参考基因组Williams 82做比较,初步确定转基因大豆事件FA8015外源T-DNA片段整合位点。然后根据整合位点,设计融合大豆基因组和T-DNA序列的引物,获得了1 160 bp的左边界旁侧序列,包括405 bp的大豆基因组序列和750 bp的T-DNA序列;右边界获得了1 254 bp的旁侧序列,其中601 bp为T-DNA片段,653 bp为大豆基因组序列;序列分析证明转基因事件FA8015的T-DNA整合位点为Chr15染色体的25129882位点,整合方式为正向单拷贝插入,与Southern杂交和重测序结果一致。依据PCR结果设计事件特异性引物,建立了转基因大豆事件FA8015转化体特异性检测方法。该方法特异性强、灵敏度高,可快速识别该转基因大豆事件的身份,为该转化事件及其衍生品的安全性和监管提供技术支撑。

三种基因型羽衣甘蓝筛选适合叶绿体转化材料

以3种不同基因型的羽衣甘蓝品种"皱叶红心"、"白鸥"和"红鸥"为试材,以MS培养基为基础培养基,分别添加不同质量浓度的6-BA、NAA、IBA激素,筛选不同品种真叶叶片不定芽的诱导频率,同时确定不同材料对除草剂双丙氨膦和抗生素壮观霉素的致死临界质量浓度,为羽衣甘蓝的叶绿体转化研究筛选受体材料。结果表明:影响羽衣甘蓝叶片诱导不定芽因素中,激素质量浓度的影响比品种的影响更大;当诱导培养基中的6-BA质量浓度为1.0mg/L、NAA质量浓度为0.1mg/L时,诱导效果最佳,是3个品种的最适培养基;按照由高到低的顺序排列,3个品种的不定芽诱导率依次为"红鸥"、"白鸥"和"皱叶红心",因此择优利用品种"红鸥"作为后续转基因研究的受体材料;分别利用双丙氨膦和壮观霉素的不同质量浓度梯度进行筛选,研究二者对"红鸥"品种叶片分化的影响,发现双丙氨膦和壮观霉素的最低抑制质量浓度分别为4mg/L和50mg/L。该研究结果对今后利用叶绿体遗传转化技术改良羽衣甘蓝品种提供了技术支持。

增量预取技术在持久化框架中的研究与实现

ORM(Object-Relational Mapping)框架是解决对象与关系数据不匹配的有效方案,但是ORM并非很完美,复杂对象的映射和查询,对系统性能造成了很大的影响。本文根据控制流程图实现对象的预取,每次预取关键点之间的对象,这种增量预取方式,保证预取到的对象都是有效的,同时减少了与数据库的交互操作。最后介绍了增量预取技术在持久化框架中的实现。

Hg-rps-23基因RNAi转基因大豆对大豆胞囊线虫的抗性研究

大豆胞囊线虫（Soybean Cyst Nematode,SCN）是一种极具破坏性的大豆寄生虫,一般可造成大豆减产10%~20%。利用植物介导RNAi是培育抗虫转基因植物新品种的有效手段之一。本研究从大豆胞囊线虫中获得了编码参与线虫m RNA代谢的关键基因-核糖体蛋白基因Hg-rps-23。采用农杆菌介导法将Hg-rps-23 RNA干扰片段导入Williams82中。PCR和Southern杂交检测结果表明,外源RNAi片段已导入受体大豆品种。病土接种鉴定结果表明,转基因大豆对大豆胞囊线虫3号生理小种抗性水平显著提高,表明利用植物介导RNAi可以有效提高大豆抗胞囊线虫水平。本研究为大豆抗胞囊线虫新材料的创制及新品种培育提供了一条新的途径。

大豆花色研究进展

本文归纳了大豆花色的种类、数量、分布等基本情况,总结概述了花色素组成、花色与花色素组成的关系、控制花色的基因型等的最新研究进展,为大豆花色研究提供参考。

中职生法律意识培养的重要性及方法

法律意识的培养是新时期新形势下职业学校德育工作的重要组成部分。法律意识是中职生不可或缺的基本素质,以培养中职生法律意识的重要性为基础,针对中职生法制教育现状以及法制教育的必要性进行了分析,并提出了相应的对策建议。

紫花苜蓿转录因子MsNF-YB4的克隆及其耐盐作用的评价

核因子Y的B亚基(NF-YB)可以在植物的生长、发育和抗逆响应中调节多种基因的表达,在植物的各种生理活动中发挥重要作用。紫花苜蓿是重要的牧草,具有较强的抗逆能力。本研究从紫花苜蓿中克隆了一个NF-YB基因,即MsNF-YB4(Gen Bank登录号为KX966286)。该基因的开放阅读框长度为405 bp,编码134个氨基酸残基。经过比对发现,该基因与蒺藜苜蓿的NF-YB4(Mt NF-YB4)在m RNA的编码区内同源性为92%,而在蛋白水平上的同源性为94%。通过比对分析,发现MsNF-YB4含有典型的NF-YB转录因子保守结构域。我们通过qPCR的方法对MsNF-YB4基因的表达模式进行了分析,结果发现,在盐碱和干旱胁迫下,根瘤和根中的表达量显著上调,暗示该基因在盐碱和干旱胁迫的响应中发挥作用。我们构建了植物表达载体pCBC-MsNF-YB4,并通过农杆菌介导法获得了过量表达MsNF-YB4基因的转基因烟草。对T1代转基因烟草的耐盐性测试结果表明,MsNF-YB4基因的表达提高了转基因烟草的耐盐性,转基因烟草幼苗可以在含有1.4%Na Cl的培养基上生长。这些结果表明,MsNF-YB4在紫花苜蓿的盐胁迫响应中发挥重要作用。

抗病转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA整合位点分析及特异性检测

大豆疫霉根腐病是由卵菌纲病原菌—疫霉菌(Phytophthora sojae)引起的大豆毁灭性病害之一。本研究前期利用农杆菌介导转化技术,将广谱抗病基因hrpZm导入栽培大豆Williams 82,获得高抗疫霉根腐病转基因大豆新品系B4J8049,并已进入环境释放试验阶段。为进一步推进该转化事件的生物安全评价及应用,本研究采用热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)方法分析外源T-DNA整合位点右边界序列,并依据其序列特征,建立该转化事件特异性检测方法。Southern杂交检测结果表明,转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA插入拷贝数为1个。根据外源T-DNA插入片段序列设计3条嵌套特异性检测引物,与简并引物组合进行TAIL-PCR扩增反应,获得外源TDNA插入位点右边界序列。BLAST分析(https://soybase.org/)表明,外源T-DNA片段以单拷贝形式反向插入的方式整合到大豆基因组中第8号染色体的187 824位点。在此基础上,依据插入位点右边界序列设计检测引物,建立转基因大豆事件B4J8049特异性检测方法。本研究为该抗病转基因事件B4J8049及其衍生产品特异性检测提供依据。

转GbNPR1基因提高烟草抗病性

病害是造成烟草减产和品质降低的主要因素,而利用生物技术提高烟草抗病性是解决此问题的有效途径,其中包括利用与植物抗病性密切相关的关键因子如病程相关基因非表达子(non-expressor of pathogenesis-related genes1,NPR1)。本研究利用源于海岛棉的Gb NPR1基因,表皮特异性启动子CUT1和组成型启动子35S构建两个植物表达载体35S-Gb NPR1和CUT1-Gb NPR1,经农杆菌介导法分别转化烟草。T0代及T1代转化植株PCR检测证明,目的基因已整合到核基因组中。T1代植株RT-PCR分析表明,Gb NPR1基因在转录水平得以表达。bar试纸条检测为阳性,证明和Gb NPR1连锁的草甘膦基因能够正常转录和翻译表达。将阳性植株进行烟草病菌赤星病、炭疽病和低头黑病等三种病害的病原菌离体接菌实验,研究结果表明:转CUT1-Gb NPR1载体的转基因烟草虽然较转35S-Gb NPR1载体的烟草对三种病菌的抗性稍低,但较野生型烟草相比具有较高抗性。转Gb NPR1基因的烟草能提高对低头黑病和炭疽病的抗性为首次报道。