前列腺癌EpCAM特异性分子探针的构建及其在体MR成像研究

目的:利用金磁纳米微粒偶联核酸适配体构建前列腺癌EpCAM特异性分子探针Ep1-GoldMag,探讨其对EpCAM阳性前列腺癌的亲和性及其在体MR成像能力。方法:将金磁纳米微粒偶联前列腺癌EpCAM核酸适配体制备分子探针Ep1-GoldMag。采用免疫荧光实验检测Ep1-GoldMag靶向EpCAM阳性前列腺癌组织细胞的能力;构建前列腺癌EpCAM荷瘤裸鼠模型,采用免疫组化检测裸鼠肿瘤及其重要脏器组织的EpCAM表达情况。将Ep1-GoldMag注入裸鼠体内,在注射后不同时间点行MRI扫描,比较注射前后各时间点的肿瘤T_(2)WI信号强度,探讨分子探针在体MR成像的可行性。结果:成功制备Ep1-GoldMag,并证实其能特异性识别EpCAM阳性前列腺癌组织细胞。对裸鼠注射Ep1-GoldMag前后行MRI扫描,结果显示注入1 h后,肿瘤T_(2)WI信号明显减低,6 h后T_(2)WI信号持续减低,12 h后T_(2)WI信号略升高,但与注射前相比仍呈低信号,而对照组注射前后T_(2)WI信号强度未见减低,实验组与对照组组间以及实验组内部注射前后各时间点的信号差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:本研究制备的分子探针Ep1-GoldMag具有良好的EpCAM前列腺癌组织细胞特异性,并能在MR上特异性成像。

胰腺肌纤维母细胞肉瘤一例

病例资料患者，女，76岁，无明显诱因消瘦2个月，食欲差，全身乏力，20天前出现腹痛，以下腹及剑突下为著，呈持续性钝痛。

单域抗体在前列腺癌分子影像学中的研究进展

前列腺癌是常见的老年男性泌尿系恶性肿瘤,其发病率和死亡率随年龄的增长而大幅增加,目前对其准确诊断及有效治疗尚缺乏特异性的手段。寻找一种灵敏特异的非侵入性技术对前列腺癌进行早期诊断、精准定位以及靶向治疗至关重要。分子影像学的发展有望解决这一难题。单域抗体(Single-domain antibody,Sd Ab)是目前已得的最小的抗体单元,已有大量研究表明其在应用于分子影像学进行分子探针的构建、肿瘤的靶向诊疗等方面取得了重大进展。作者对其在前列腺癌分子影像学中的研究进展进行综述,以为将来进一步的研究和临床应用提供参考。

基于Cell-SELEX技术的去势抵抗性前列腺癌细胞核酸适配体的筛选与鉴定

目的利用细胞指数富集配基的系统进化技术(Cell-SELEX)筛选去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞特异性核酸适配体。方法以人CRPC细胞C4-2基因组作为正筛选细胞,以激素依赖性前列腺癌细胞LNCap基因组作为负筛选细胞进行Cell-SELEX筛选。PCR上游引物的5’端标记FITC,下游引物的5’端标记生物素,将每一轮次筛选得到的DNA产物为模板进行PCR扩增、纯化。用生物素-链霉亲和素磁珠分离法将PCR产物分离后获得的产物用于下一轮次的筛选,用流式细胞仪监测Cell-SELEX筛选进程;将最后一轮次筛选所得的DNA产物行PCR扩增纯化、克隆及测序,预测核酸适配体的二级结构,计算适配体的平衡解离常数。用流式细胞术、细胞免疫荧光及组织免疫荧光检测适配体对CRPC组织细胞的特异性结合。结果随着Cell-SELEX的筛选进程,DNA产物与CRPC细胞的结合率逐渐增加,至第14轮达到最高。DNA结构预测分析显示,核酸适配体CRPC-1和CRPC-2的二级结构主要为茎环结构。流式细胞术和细胞免疫荧光实验显示,CRPC-1和CRPC-2可特异性靶向CRPC细胞C4-2;组织免疫荧光实验显示,CRPC-1能特异性识别并结合CRPC组织。结论Cell-SELEX可筛选CRPC细胞特异性核酸适配体,对靶向诊断技术的研发和及时调整临床治疗方案、改善患者预后具有重要意义。

结节性硬化症的临床特征及影像学诊断

目的探讨结节性硬化症的临床特征与影像学诊断价值。方法回顾性分析本院22例经临床确诊的结节性硬化症患者的临床资料和影像学表现。结果22例中,男性12例,女性10例,平均年龄7.3岁;2例有家族史;22例中有3例症状不清,其余19例除1例以面部皮疹2年就诊外,均以发作性癫痫就诊且其中4例伴智力低下;22例均有特征性室管膜下结节,其中21例并双侧大脑半球多发异常改变;12例伴皮肤表现异常,2例伴有面部皮质腺瘤,1例伴右侧室管膜下巨细胞星形细胞瘤,1例伴双侧室管膜瘤,1例伴Dandy-Wallker畸形,1例伴右侧重复肾,2例伴右肾错构瘤,1例伴双肾多发结节,1例伴先天性动脉导管未闭,2例伴心脏横纹肌肉瘤,1例伴肝多发错构瘤,2例伴多发骨质硬化改变。结论结节性硬化症临床表现复杂多变,伴多器官受累并具有一定的影像学特征。熟悉各系统病变的特征及影像学表现,有助于临床诊断更加简明和精确。

皮肌炎的临床特征及MRI诊断价值

目的探讨皮肌炎的临床特征及MRI诊断价值。方法回顾性分析西安交通大学第二附属医院61例经临床确诊的皮肌炎患者的临床资料和影像学资料。结果 61例中,男15例,女46例,平均年龄45.3岁,病程10 d至12年。均具有不同程度的皮肤损害,伴肌无力和或肌痛者57例;皮肤、肌肉受累伴吞咽困难者4例,伴呼吸困难者2例,伴饮水呛咳者2例;18例合并两肺间质病变,1例合并干燥综合征,1例合并关节炎,1例合并横纹肌溶解症,1例合并肾损害和肝功不全。其中46例皮肌炎患者做了MRI检查,43例有异常表现,肌肉炎性水肿41例,皮下脂肪组织水肿37例,肌筋膜炎40例。结论皮肌炎临床表现复杂,具有一定的影像学特征,结合实验室肌酶、自身抗体检查、肌电图及皮肤肌肉活检,为临床提供诊断证据。MRI是诊断皮肌炎和评估其累及范围及进展程度的重要检查手段。

泌尿外科医师对三种前列腺MRI诊断报告满意度的调查研究

目的从前列腺MRI报告的准确性、对治疗方案的指导意义及泌尿外科医师对报告的主观感受3个参数分别评估我院泌尿外科医师对3种前列腺MRI报告,即传统自由文本报告(报告A)、TNM分期结构化报告(报告B)及PI-RADSTMv2联合(或不联合)TNM分期的结构化报告(报告C)的满意度。材料与方法调查研究2007年10月至2018年12月我院泌尿外科医师对放射科出具的3381份3种类型前列腺MRI报告的满意度。采用Likert五分量表法分别从报告的准确性、报告对治疗方案的指导意义及泌尿外科医师对报告的主观感受3个参数进行满意度评分。满意度统计方法用Kruskal-WallisH检验和Nemenyi检验。结果泌尿外科医师对报告B和报告C的总满意度均显著高于报告A(P<0.05),但对报告B和报告C的总满意度之间差异无统计学意义(P>0.05)。在报告对临床治疗方案的指导意义上,泌尿外科医师对报告B和报告C的满意度之间差异有统计学意义(P<0.05),但在报告的准确性及医师对报告的主观感受上,泌尿外科医师对报告B和报告C的满意度之间差异无统计学意义(P>0.05)。在对3个参数的满意度评价上,泌尿外科医师对报告B和报告C满意度均高于报告A(P<0.05)。结论与传统自由文本报告相比,泌尿外科医师对结构化的前列腺MRI报告更满意。

原发性肝脏神经内分泌肿瘤影像学表现

目的:总结原发性肝脏神经内分泌肿瘤(primary hepatic neuroendocrine neoplasm,PHNEN)的影像特点,以提高对该病的认识。方法:回顾性分析2006年4月至2017年4月8例经穿刺活检或手术病理证实的PHNEN患者的临床及影像学资料,对病灶位置、大小、形态、数目、密度、边界等进行综合性分析。结果:MSCT表现:7例为类圆形病灶,1例呈分叶状;肿瘤直径0.50～20.21 cm,平均为(10.25±9.96)cm;均表现为边界欠清或不清晰肿块,内可见小囊状低密度区,其中5例见局灶性出血,1例见血-液分层密度影。动脉期均见假包膜样强化,5例环形边缘轻度强化,3例边缘明显强化;延迟期5例病灶低密度区为渐进性强化,具有"反转强化"表现;病灶中心小片状低密度区均无强化,其中1例呈皂泡样蜂窝状强化。MRI表现(1例):T_2WI呈混杂高信号,T_1WI呈混杂低信号,见低信号包膜结构,弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)呈高信号,表观弥散系数(apparent diffusion coeffecient,ADC)图像呈低信号,增强后边缘早期强化,晚期持续强化。结论:PHNEN患者影像学表现具有一定特点,可为临床诊疗提供依据。

DKI对前列腺癌的鉴别诊断及临床病理分级的定量预测研究

目的:探讨扩散峰度成像(Diffusion kurtosis imaging,DKI)相关定量参数对前列腺癌(Prostate cancer,PCa)与前列腺增生(Benign prostatic hyperplasia,BPH)间的鉴别诊断并评估其在临床病理分级中的预测价值。方法:回顾性分析经手术或穿刺活检病理证实的57例前列腺病变,其中PCa 25例,BPH 32例。所有患者均行前列腺常规MRI及DKI扫描,获得病灶的平均扩散峰度(Mean kurtosis,MK)、平均扩散系数(Mean diffusivity,MD)以及各向异性分数(Fractional anisotropy,FA)值,采用受试者工作曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)评估各参数对PCa及BPH的鉴别诊断效能。分析各DKI参数与美国癌症联合会(American joint committee on cancer,AJCC)第8版PCa临床病理分级的相关性,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:BPH和PCa组间MK、MD值的差异有统计学意义(P值均为0.000),其中MK值诊断效能最大(AUC=0.99)。AJCC PCa不同临床病理分级的组间MK、FA值差异均有统计学意义(P<0.05),不同Gleason评分组间MD值无统计学意义(P>0.05)。MK值与AJCC临床病理分级之间显著正相关(r值分别为0.860和0.805),FA值与其呈中等负相关(r值分别为-0.463和-0.465)。结论:DKI模型定量分析有助于BPH及PCa的鉴别诊断,其中MK值诊断效能较高,且有助于预测PCa的临床病理分级。

细胞SELEX技术用于胰腺癌细胞特异性适配体的筛选及鉴定

细胞SELEX是目前常用的筛选细胞特异性适配体的技术。胰腺癌细胞特异性适配体在胰腺癌的诊断和治疗中有巨大的应用潜力。本研究拟通过该技术获得特异性识别胰腺癌PANC-1细胞的适配体,并对所筛选的适配体进行功能鉴定。本研究以胰腺癌PANC-1细胞为正筛细胞,正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7为负筛细胞,通过磁珠法细胞SELEX技术进行筛选。经过12轮筛选,对筛选文库进行PCR扩增、质粒转染、单克隆挑选及测序,获得2条适配体Apt-5和Apt-12。流式细胞术检测发现,适配体Apt-5和Apt-12可特异性识别PANC-1细胞,其Kd值分别为8.27±2.10 nmol/L和8.88±2.51 nmol/L,Kd值均处于纳摩尔级别。通过RNA结构预测,2条适配体的二级结构均为茎-环结构。细胞免疫荧光验证了适配体的结合部位为细胞膜表面。本研究表明,通过磁珠法细胞SELEX技术,成功获得可特异性识别胰腺癌PANC-1细胞的适配体。该适配体有望成为胰腺癌诊断和治疗中的特异性分子靶向剂。

Survivin和MMP14在胰腺癌中的表达及临床病理意义

目的:研究胰腺癌组织中Survivin和MMP14的表达及其临床病理意义,为筛选胰腺癌分子诊断新靶标提供理论依据。方法:采用免疫组织化学技术(S-P)法检测44例胰腺癌、13例胰腺炎及21例正常胰腺组织中Survivin和MMP14表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理参数的相关性。结果:胰腺癌组织中Survivin和MMP14蛋白均呈明显高表达,其表达与胰腺癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、临床分期、分级及有无淋巴结转移均显著相关性(P>0.05)。胰腺炎与正常胰腺组织中Survivin和MMP14蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05),但均显著低于胰腺癌组织(P=0.000/P=0.001)。结论:Survivin和MMP14蛋白在胰腺癌组织中均呈异常高表达,但与胰腺癌的临床病理特点均无关,可能成为新的胰腺癌诊断标志物。

人tBID蛋白的表达纯化及其偶联的新型分子探针对前列腺癌细胞的促凋亡作用研究

目的:以PQE-30为原核表达载体,构建PQE30-tBID重组表达载体,表达和纯化目的蛋白tBID,并利用金磁纳米微粒将tBID蛋白与人HER2抗体偶联成分子探针Anti HER2-Gold Mag-tBID,以探究其对前列腺癌细胞的促凋亡作用。方法:根据tBID的基因序列设计特异性的上下游引物,利用普通PCR扩增目的基因tBID,构建重组表达载体PQE30-tBID,将其转化到BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE凝胶电泳和Western Blot鉴定分析,验证目的蛋白tBID的表达,并对其进行纯化。利用金磁纳米微粒与蛋白质之间的静电相互作用以及疏水相互作用,将人HER2抗体与tBID蛋白偶联在其表面,构建分子探针Anti HER2-Gold Mag-tBID。流式细胞术检测该分子探针与前列腺癌PC-3细胞的特异性亲附结合能力,通过Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒分析分子探针对PC-3细胞的促凋亡作用。结果:普通PCR扩增后得到了411 bp的DNA片段,经双酶切鉴定以及菌液测序,表明重组表达载体PQE30-tBID构建成功。促凋亡蛋白tBID成功地在大肠杆菌中表达,蛋白相对分子量约15 KD,经过纯化,得到了纯度较高的tBID蛋白。经过与金磁纳米微粒的偶联,成功构建出一种新型的分子探针Anti HER2-Gold Mag-tBID。该分子探针可与PC-3细胞特异性结合,且经Annexin V-FITC染色分析可见PC-3细胞发生明显凋亡,凋亡率达62.9%,与未处理组(3.79%)和对照组(4.33%)相比,具有显著的统计学差异。结论:PQE30-tBID重组表达载体能在大肠杆菌中高效表达,且成功得到了纯度较高的人促凋亡蛋白tBID。经金磁纳米微粒偶联,该蛋白能够与人HER2抗体重组成新型的分子探针,且能特异性地靶向前列腺癌PC-3细胞并显著促进其凋亡。

前列腺癌适配体的研究进展及其应用

寻找一种高特异性高灵敏度的方法对于前列腺癌的早期发现和及早干预,进而提高患者的生存率及生活质量十分重要。适配体(Aptamer)是由一段寡聚核苷酸链折叠形成的特定三维结构,能高亲和性、高特异性地靶向不同的分子。自上世纪90年代,许多研究者致力于适配体的研究,目前,适配体在药物递送、肿瘤诊疗等方面的研究已取得较大进展。本文将对前列腺癌适配体新近的研究进展及其应用进行综述,以期为将来进一步的研究和临床应用提供参考。

MR成像在梨状肌综合征诊治中的价值

就梨状肌相关解剖结构、梨状肌综合征的病理生理与病因学、临床表现与诊断标准进行了论述,并结合本院收集病例重点探讨不同病因所致梨状肌综合征的MR表现。结果表明MR对梨状肌综合征具有重要辅助诊断价值,可帮助临床医生寻找病因并制定正确治疗方案,临床医生与影像科医生的密切配合可提高梨状肌综合征的诊断准确性,使患者受益。

IVIM在前列腺癌诊断中的价值及其与第八版AJCC临床病理分级的相关性研究

目的分析体素内不相干运动(IVIM)相关定量参数在前列腺癌诊断中的价值并分析其与临床病理分级的相关性。方法连续搜集经穿刺或根治切除术病理证实的63例前列腺病例,其中前列腺癌31例,前列腺增生32例。两组患者均采用IVIM模型计算得出病灶的标准水分子扩散系数(Ds)、纯水分子扩散系数(D)、快速水分子扩散系数(D^*)及灌注分数(f),利用受试者工作特征(ROC)曲线分析其对前列腺癌的诊断效能。评估以上参数与美国癌症联合会(AJCC)第8版前列腺癌临床病理分级的相关性,P<0.05认为差异有统计学意义。结果前列腺增生组的Ds、D值及f值显著高于前列腺癌组(P值均为0.000)。AJCC前列腺癌不同临床病理分级的组间Ds、D值及f值差异均有统计学意义(P<0.05),其中D值具有最大的诊断效能(AUC=0.964)。D^*值在不同临床分级的PCa组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ds、D及f值与AJCC临床分级呈负相关(r值分别为-0.612、-0.946及-0.610,P=0.000)。结论IVIM参数定量分析对前列腺癌有较高的诊断价值,其中D值诊断效能最高,且有助于判断前列腺癌的侵袭性及预后情况。

拉伸指数与单指数模型多b值DWI定量参数在胰腺癌的对照研究

目的探讨拉伸指数与单指数模型多b值磁共振扩散加权成像(DWI)定量参数在胰腺癌的应用价值。方法搜集临床或手术证实的37例胰腺癌患者,应用GE Discovery MR750 3.0T磁共振扫描仪对所有患者行胰腺多b值DWI。应用MADC软件的单指数和拉伸指数模型分析多b值DWI,得到标准化表观扩散系数(ADC_(standard))、分布扩散系数(DDC)和扩散异质性指数(α)参数图,测量胰腺癌和癌周胰腺组织的ADC_(standard)、DDC和α值,并应用独立样本t检验进行统计学分析。结果胰腺癌的DDC值明显低于癌周胰腺组织的DDC值(1.244×10^(-3)mm^2/s vs.1.679×10^(-3)mm^2/s,P=0.013),胰腺癌的α值明显高于癌周胰腺组织的α值(0.720 vs.0.653,P=0.019),差异均有统计学意义。DDC和α值鉴别胰腺癌和癌周胰腺组织的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积分别为0.640、0.631。胰腺癌的DDC值和ADC_(standard)值显著正相关(r=0.401,P=0.013);α值和ADC_(standard)值显著正相关(r=0.360,P=0.026)。结论拉伸指数模型DWI相关参数DDC和α可以鉴别胰腺癌和癌周胰腺组织,DDC鉴别胰腺癌和癌周胰腺组织时较α的诊断效能更高。

EpCAM特异性适配体对胰腺癌细胞的靶向识别及促凋亡研究

目的:验证EpCAM分子特异性适配体对胰腺癌细胞的亲和性及对细胞凋亡的影响。方法:通过文献查询EpCAM分子特异性适配体,以流式细胞术验证适配体与胰腺癌PANC-1细胞的特异性亲和力;通过细胞免疫组化验证适配体与细胞结合的位点;通过流式细胞术检测适配体对细胞的凋亡影响。结果:选择文献报道的EpCAM分子特异性适配体EP166,在不破坏主要二级结构情况下做截断处理形成EP166s。通过流式细胞术验证发现EP166s与原适配体EP166均可以特异性识别胰腺癌PANC-1细胞,而与阴性对照的HEK293T细胞无特异性亲和力。细胞免疫荧光显示EP166s主要结合在细胞膜表面。凋亡检测结果发现EP166s在与PANC-1孵育12 h、24 h后均可促进细胞凋亡,且主要是细胞的早期凋亡,其所占百分比分别为12.2±0.20,27.13±0.36,而随机文库对照组的早期凋亡百分比分别为5.21±0.63,4.91±0.72;均值的配对T检验发现EP166s在孵育12 h和24 h后其早期凋亡所占百分数与随机文库组均有统计学差异,而且EP166s与细胞孵育12 h与24 h对凋亡的影响也有统计学差异,P≤0.01。结论:修饰后的适配体EP166s可以特异性识别胰腺癌PANC-1细胞,且结合位点位于细胞膜上;该适配体有促进PANC-1细胞凋亡的作用。

小鼠颈部游离皮瓣移植模型的构建

目的构建一种小鼠颈部游离皮瓣移植模型,并初步探讨同种异体皮瓣移植排斥规律。方法选择MHC不相符的近交系BALB/c小鼠(第四军医大学动物实验中心)作为供体,以C57bl/6小鼠为受体,将小鼠利用随机数字表法分为3组,包括同基因移植组:C57bl/6→C57bl/6;急性排斥组:BALB/c→C57bl/6不用药;免疫抑制剂组:BALB/c→C57bl/6联合输注3 mg/(kg·d)雷帕霉素。供体腹股沟皮瓣以小鼠股动静脉为蒂,获取皮瓣后,将血管穿过套管,并将内膜翻折出并固定;受体区域选择小鼠颈部,在颈部去除皮肤,舌下腺等结构后暴露颈动脉和颈外静脉,利用血管套管技术,将皮瓣股动脉与颈动脉相接,将皮瓣股静脉与颈外静脉相接。观察皮瓣存活,病理染色检查血管通畅情况,生存资料采用Kaplan-Meier方法统计,组之间的差异采用Log-Rank法来比较。结果供体皮瓣获取时间为(43±3)min,总手术时间为(91±7)min,皮瓣整体缺血时间(73±2)min。同基因移植组皮瓣均获得长期存活,急性排斥组皮瓣在术后10 d左右均发生了排斥;免疫抑制组皮瓣中位生存时间高于急性排斥组皮瓣存活时间(80 d比10 d,χ^(2)=9.039,P<0.01)。结论通过血管吻合套管技术构建游离皮瓣移植模型,为临床血管化皮肤移植研究提供了较理想的动物模型。