免疫治疗在肝癌合并门静脉癌栓中的治疗现状与展望

原发性肝癌是一种常见的恶性肿瘤,其中门静脉癌栓(portal vein tumor thrombus,PVTT)是进展期肝癌最常见的并发症之一,肝癌合并PVTT的传统治疗方法疗效欠佳,临床预后较差。免疫治疗近年在肝癌合并PVTT治疗中展现出较强优势,很大程度上提高了患者的生存率。在不远的将来,免疫治疗给肝癌及肝癌合并门静脉癌栓患者带来了新的希望。

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在肝细胞癌转移中的作用与机制研究

肝细胞癌(HCC)是一种炎症相关癌症,肿瘤免疫微环境在HCC的发生和发展中起关键作用。该文旨在研究中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在HCC转移中的作用及相关机制。ELISA和免疫组化方法检测HCC患者血清和肿瘤组织中的NETs水平以检测NETs与肝癌转移的相关性。在体外实验中,建立NETs与肝癌细胞系Hep3B和CSQT-2体外共培养模型,通过划痕实验和Transwell等实验,研究NETs对肝癌细胞迁移的影响。在体内实验中,建立尾静脉注射转移瘤模型并使用脂多糖诱导小鼠体内NETs形成,通过检测肝脏病理变化和肝脏Ki67蛋白水平等指标,研究NETs对肿瘤转移的作用。最后,为了探讨NETs影响HCC转移的机制,通过质谱的方法检测了NETs对细胞外基质的修饰,并检测了修饰的细胞外基质蛋白对整合素/FAK信号通路的影响。结果发现:高转移HCC患者肿瘤组织中髓过氧化物酶蛋白水平较高,且与早期HCC患者相比,晚期HCC患者血清中的MPO和中性粒细胞弹性蛋白酶水平升高。体外实验中,NETs与Hep3B和CSQT-2细胞共培养,可以促进Hep3B和CSQT-2细胞的迁移能力。体内实验中,NETs可以促进C57BL/6小鼠炎性细胞浸润肝脏。尾静脉注射转移瘤后,体内诱导NETs引起肝脏组织中Ki67蛋白水平升高,表明NETs促进肝癌细胞的肝转移。使用ATRA抑制NETs的释放缓解了NETs介导的促转移和促增殖作用。而使用ATRA抑制NETs的释放缓解了NETs介导的促转移和促增殖作用。机制研究发现,NETs形成和释放过程中会产生次氯酸,从而导致细胞外基质中层黏连蛋白肽段中LKDYEDLR的酪氨酸氯化修饰,且次氯酸处理的LAMC1会导致整合素/FAK信号通路的激活。因此,该研究证实,NETs可以促进HCC的转移,其作用机制与诱导ECM重塑,调控整合素/FAK信号通路有关。

全反式维甲酸通过激活BMP2的表达抑制中性粒细胞胞外诱捕网的形成

该研究探讨了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)释放的调节作用及其可能的机制。体外提取C57BL/6小鼠的中性粒细胞,给予ATRA处理,佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导NETs产生,免疫荧光检测NETs的髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)的共定位,Sytox Green荧光定量细胞外DNA的数量,蛋白质印迹法检测MPO蛋白表达,ELISA检测细胞上清中瓜氨酸化组蛋白(citrullinated histone 3,H3Cit)含量。该研究利用RNA-seq筛选了对ATRA易感的基因,并通过q RT-PCR验证相关差异基因(Arg1、Camkk1、BMP2等)的m RNA表达情况。为了研究ATRA的靶基因BMP2对NETs发生的影响,该研究用BMP2的抑制剂(LDN193189)处理中性粒细胞,再通过Sytox Green荧光实验验证BMP2对NETs形成的作用。结果显示:ATRA处理后的NETs的MPO和DNA共定位减少,MPO蛋白表达水平降低,细胞上清中H3Cit含量显著低于PMA组(P<0.0001),Sytox Green定量NETs荧光值显著低于PMA组(P<0.01),ATRA以剂量依赖性方式抑制NETs生成;RNA-seq结果显示456个基因的表达发生了变化,其中274个基因上调,182个基因下调,qRT-PCR结果表明,与PMA组相比,ATRA预处理组中的BMP2、Arg1、Camkk1、Abca1、GSS等基因发生上调,与RNA-seq结果一致;LDN193189处理后,Sytox Green定量NETs荧光值显著高于PMA组(P<0.0001)。综上,ATRA能够抑制NETs的释放,其机制可能是通过激活BMP2的表达从而抑制NETs形成的。