新疆喀什地区黑热病暴发的危险因素分析

目的探讨新疆喀什地区黑热病暴发流行的危险因素。方法采用病例对照研究,自制调查问卷,以基于利什曼原虫kDNA保守区PCR扩增的分子方法检测呈阳性感染的为病例组,按1∶3匹配选择年龄、性别、营养状况、职业、家庭收入与消费、受教育程度等方面差别无统计学意义(P>0.05),且利什曼原虫感染检测呈阴性的健康人为对照组,对性别、环境和行为等10个潜在危险因素进行单因素和多因素logistic回归分析。结果75份易感人血样感染利什曼原虫阳性率为82.67%(62/75)。单因素分析显示:户外被叮咬、户外露宿习惯、邻居有黑热病患者、蚊帐及趋避剂杀虫剂的使用与当地易感人群感染利什曼原虫关系密切,危险比(RH)值和95%可信区间(95%CI)依次为7.296,(3.102,1.16)、15.429(5.876,8.995)、75.6(26.6,214.9)、0.311(0.132,0.733)、0.491(0.292,0.672);多因素分析显示:户外被叮咬、邻居有黑热病患者是感染利什曼原虫的危险因素,使用蚊帐是保护性因素,RH值和95%CI为12.56(3.476,45.38)、140.987(37.59,528.8)、0.185(0.05,0.68)。结论在该地区易感人群感染利什曼原虫率较高的情况下,对当地居民普及黑热病的危害及防御措施,及时确诊并彻底诊治黑热病患者,尽量避免户外被叮咬,养成使用蚊帐习惯是预防控制当地人源型黑热病感染暴发的有效措施。

弓形虫pcDNA3-p30-ROP2-HSP70复合核酸疫苗免疫保护性的研究

目的研究pcDNA3-p30-ROP2-HSP70复合核酸疫苗的免疫保护作用。方法 150只BALB/c小鼠随机分为5组,其中3实验组,每鼠分别肌肉注射pcDNA3-p30-ROP2-HSP70、pcDNA3-p30-ROP2、pcDNA3-ROP2各50μg;2对照组每鼠分别注射pcDNA3空质粒50μg、PBS 50μL。共免疫3次,每次间隔2w,末次量加倍。末次免疫后2w,各组分别取6只小鼠的血清和脾组织,检测CD4+、CD8+及各细胞因子。各组其余小鼠腹腔注射RH株弓形虫速殖子500个/每鼠,观察其存活时间等。结果 pcDNA3-p30-ROP2-HSP70复合核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应。小鼠血清抗体滴度高并能识别重组ROP2蛋白抗原;免疫接种后CD4+和CD8+均增殖明显,组间有显著性差异(F=45.00,P<0.01;F=15.01,P<0.01),实验组CD4+/CD8+比值增加明显,各组间有显著性差异(F=9.17,P<0.01);其脾、淋巴结细胞培养液及血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-12、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)均有不同程度的升高,尤其是血清中升高最为显著。弓形虫攻击感染后,实验组与对照组比较,实验组小鼠存活时间明显延长。结论该复合核酸疫苗具有较强的免疫原性,能产生良好的免疫保护作用。

食品蛋白质水解肽的研究概况

综述了食品蛋白质水解肽的制备方法及蛋白质水解产物的应用情况。

乙肝表面抗原和弓形虫棒状体分泌抗原多功能真核表达载体的构建与鉴定

目的探讨通过体外扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因,构建真核表达载体pcDNA3-HBsAg-ROP2的可行性。方法根据乙肝S基因序列及pcDNA3-p30-ROP2酶切位点等情况设计、合成引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HBsAg基因片段;应用回收、纯化、酶切、连接等技术,将HBsAg基因替换pcD-NA3-p30-ROP2中的p30基因,并进行酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增出约0.7 kb的目的基因HBsAg,成功构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组载体。PCR、酶切结果与理论相符,重组体包含了HBsAg和ROP2基因的完整序列。结论利用体外扩增乙肝表面抗原,可成功构建乙肝和弓形虫多功能重组载体pcDNA3-HBsAg-ROP2。

蛋白质组学在肿瘤研究中的应用

蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新的研究领域,是对机体、组织或细胞的全部蛋白质的表达和功能模式进行的研究。生命的表现形式最终由蛋白质决定的,从蛋白质组学的角度进行肿瘤诊断与治疗具有积极的现实意义。近年来蛋白质组学发展十分迅速,蛋白质学在肿瘤研究中得到了广泛的应用。

恩丹西酮联合地塞米松、安定预防顺铂所致恶心呕吐临床观察

目的：观察恩丹西酮(0ND)对顺铂(DDP)所致的呕吐预防效果及合理止吐方案。方法：120例患者接受含DDP方案化疗。观察对比NOD单用或联用地塞米松(DXM)安定(DNP)，以及胃复安(MCP)加DXM对DDP的止吐疗效。结果：OND联用DXM、DNP组的有效率达98％；OND单用达82．2％。均明显高于MCP、DXM组710％。结论：OND联用DXM、ONP组每日1次给药止吐对预防DDP所致的呕吐疗效满意。

国产奥沙利铂为主的联合化疗治疗晚期大肠癌临床研究

目的观察国产注射用奥沙利铂(L-OHP)为主的联合化疗治疗晚期大肠癌的临床疗效和毒副反应。方法治疗组为A组,对照组为B组。A组L-OHP130mgm2,静脉滴注,第1天,注射用亚叶酸钙(CF)200mgm2,静脉滴注,第1～5天,氟脲嘧啶脱氧核苷(FUDR)400mgm2,静脉滴注,第1～5天,21天为一个周期;B组CF200mgm2,静脉滴注,第1～5天,FUDR400mgm2,静脉滴注,第1～5天,21天为一个周期。2周期后评定疗效。结果共收入病人51例,A组26例,有效率为46.2%,不良反应主要为感觉神经毒性、恶心、呕吐和白细胞下降;B组25例,有效率12.0%,不良反应主要为恶心、呕吐和白细胞下降,无神经毒性。结论L-OHP,联合CF+FUDR化疗较CF+FUDR化疗疗效提高,病人的耐受良好,是治疗晚期大肠癌安全有效的方案。

顺铂联合沙培林治疗恶性胸腔积液临床观察

目的 探讨顺铂联合沙培林胸腔内局部应用治疗恶性胸腔积液的临床疗效。方法 5 2例恶性肿瘤合并胸腔积液患者分为顺铂 +沙培林组和顺铂组 ,采取胸腔内局部用药。结果 顺铂 +沙培林组对恶性胸腔积液的有效率为 88 9% ,明显高于顺铂组有效率 (P <0 0 1)。结论 顺铂联合沙培林胸腔内部应用是治疗恶性胸腔积液的有效方法。

蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对杜氏利什曼原虫杀伤作用的研究

目的研究蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对杜氏利什曼原虫的抑杀作用，探讨此抗菌肽可作为治疗黑热病的药物的可能性。方法培养利什曼原虫至适当浓度，接种于96孔组织培养板中，设实验组和对照组，实验组分别加入10ul浓度为30、60、90、120、150、180ug／ml的蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液，每个浓度重复9孔，对照组加相应体积的对照表达产物，分别在连续培养24、48和72h后，每孔加入20ul四甲基偶氮唑盐（5mg／ml），继续培养4h，每孔加入100ul formanzan溶解液，孵育4h左右，在570nm测定吸光度，根据吸光度数值计算杀伤率。结果实验组按浓度由低到高（30～180ug/ml）对应的杀伤率在培养24h后为20．12％、41．39％、64．89％、65．14％、66．49％和66．49％，培养48h后为40．12％、67．34％、75．11％、82．03％、82．75％和82．75％；培养72h后为45．89％、65．57％、78．49％、82．58％、85．38％和85．38％。蛔虫抗菌肽发酵产物浓度为150ug／ml时，杀伤作用最大，杀伤率为85．38％，IC50为50ug／ml。结论蛔虫抗菌肽对利什曼原虫有很强的杀伤作用。

蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对骨髓瘤细胞杀伤作用的效果观察

目的观察蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对于骨髓瘤细胞杀伤作用的效果。方法培养骨髓瘤细胞至对数生长期,调整细胞浓度为(3～5)×105/ml,接种于96孔组织培养板中,100μl/孔,于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养24h。设实验孔、空白对照孔和5-FU阳性对照孔。实验孔分别于10μl对数生长期骨髓瘤细胞中加入蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液至终浓度分别为30、60、90、120、150、180μg/ml,每个浓度重复9孔,5-FU阳性对照孔终浓度为400μg/ml。连续培养24、48和72h后,采用MTT法检测各浓度蛔虫抗菌肽酵母发酵产物浓缩上清液对骨髓瘤细胞的杀伤效果。结果蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对骨髓瘤细胞SP2/0有杀伤作用,发酵产物浓度为150μg/ml时,杀伤作用最大,杀伤率最大为78.845%,相当于400μg/ml的5-FU对骨髓瘤细胞SP2/0的杀伤作用。结论蛔虫抗菌肽酵母发酵产物对于骨髓瘤细胞具有杀伤作用。

我国黑热病的流行概况和防治现状

黑热病又称内脏利什曼病,是严重危害人类身体健康的寄生虫病。按传染源特点可分为野生动物源型、犬源型和人源型3种类型。目前,人源型黑热病除新疆流行区外,在其他流行区已得到控制。而犬源型和野生动物源型黑热病则在其流行区不断出现,有死灰复燃之势。本文对我国黑热病的分型、流行概况和防治现状进行了综述。

弓形虫ROP21基因的原核表达与免疫学鉴定

目的原核表达弓形虫棒状体ROP21基因,并对rROP21蛋白进行免疫学鉴定。方法根据已发表的ROP21基因序列设计引物,通过RT-PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP21基因。将ROP21基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)后转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达目的蛋白,纯化后进行SDS-PAGE分析、Western blot及IFA分析。结果经PCR和酶切鉴定,成功构建重组表达载体。重组质粒转化BL21(DE3)后经IPTG诱导,重组蛋白(rROP21)以包涵体形式高效表达,分子质量单位约为45ku。Western blot显示重组rROP21蛋白能被his标签抗体及弓形虫病患者血清识别。用rROP21免疫小鼠,获得滴度为1∶104的抗体血清。IFA显示弓形虫速殖子体内存在ROP21蛋白。结论构建的重组质粒pET28a-ROP21表达的弓形虫rROP21具有抗性,可作为血清学诊断候选抗原,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

我国不同疫区杜氏利什曼原虫ITS-1片段序列的多态性分析

目的确定rDNA的内转录间隔区Ⅰ(ITS-1)是否可作为我国杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)分类的分子遗传标记。方法对我国不同疫区杜氏利什曼原虫分离株(L.d.SD1、L.d.SC7、L.d.XJ3、L.d.JS12)的ITS-1进行PCR扩增、克隆、测序,并分析它们的ITS-1序列多态性。结果 4个不同疫区的利什曼原虫分离株(L.d.SD1、L.d.SC7、L.d.XJ3、L.d.JS12)经PCR均扩增出一条约320bp的ITS-1片段,其序列大小分别为:317bp、323bp、317bp、316bp。序列分析表明:序列之间在多处位点发生了不同类型的突变,存在明显的序列多态性,其中伽师县突变的频率最为频繁,序列多态性最为显著。结论 ITS-1可以作为Leishmania donovani种内分类的分子遗传标记,有利于我国内脏利什慢原虫病的防治、诊断和治疗。

pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体的构建与鉴定

目的构建pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因重组表达载体,并对其进行初步鉴定。方法根据重组体pcDNA3-p30-ROP2酶切位点和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因序列等因素设计合成引物,扩增HBsAg目的基因片段,再应用酶切、连接等分子生物学技术将HBsAg目的基因克隆至pcDNA3-p30-ROP2表达载体中。应用聚合酶链反应(PCR)初筛,再采用酶切、测序等技术对构建的重组表达载体pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2进行鉴定。结果 PCR扩增出HBsAg基因片段,构建了pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2多基因真核表达载体。PCR与酶切结果显示,该基因片段大小均与理论值相符;测序结果显示该重组表达载体包含了p30-ROP2和HBsAg目的基因的完整序列。结论成功构建了多基因重组表达载体pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2,为进一步研究多基因核酸疫苗奠定了基础。

杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定

目的在毕赤酵母中分泌表达具有抗菌活性的杂合抗菌肽Cecropin P1-Dermaseptin S4(CP1-DS4)。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性优化Cecropin P1和Dermaseptin S4两抗菌肽基因序列,通过SOE-PCR拼接,构建克隆载体pMD18T-cp1-ds4并测序;pMD18T-cp1-ds4经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后构建重组表达载体pPICZαA-cp1-ds4,测序验证开放阅读框(ORF)正确后经SacⅠ线性化处理,然后电转化毕赤酵母X-33(800V,1mm电转化杯,15s电击1次)并利用Zeocin筛选阳性重组子。重组子接种BMGY、BMMY培养基,采用5%的甲醇诱导表达,采用Tricine-SDS-PAGE分析表达上清,表达上清浓缩后进行抑菌试验。结果在本研究中拼接引物经SOE-PCR拼接后得到优化的长度为120bp的Dermaseptin S4基因基因片段,该片段与Cecropin P1基因连接形成约197bp杂合抗菌肽片段,成功构建pPICZαA-cp1-ds4表达载体,电转化获得重组酵母菌pPICZαA-cp1-ds4/X-33,经诱导后可产生分子质量单位约为9.7ku的目的多肽,该多肽对大肠埃希菌和金黄葡萄球菌均有抑制作用。结论杂合肽CP1-DS4可以在毕赤酵母X-33中融合分泌表达,且具有抗菌活性。

抗菌肽作用机制及改造策略研究进展

抗菌肽是生物体先天性免疫系统的重要组成成分,是多种不同具有抗菌活性天然多肽分子的统称。研究发现抗菌肽具有抗包括G+细菌,G-细菌,真菌,支原体,病毒在内的多种病原体的广谱作用活性,有些抗菌肽还具有抗肿瘤活性。本文主要综述了抗菌肽的分类、作用机制、改造策略及其应用中存在的问题。