MiR-484通过靶向MAPK8抑制人前体脂肪细胞的增殖与分化

目的:探讨miRNA-484在肥胖发生中的作用及其临床意义。方法:利用RT-qPCR、CCK-8法、油红O染色及甘油三酯定量检测研究miR-484对人脂肪细胞增殖及成脂分化的作用。运用Targetscan7.2对miR-484的下游靶基因进行预测分析,并使用双荧光素酶实验验证miR-484与靶基因的结合,使用Western blot及RT-qPCR验证miR-484对靶基因的作用。结果:miR-484在人脂肪细胞分化成熟过程中逐渐低表达。过表达miR-484抑制人前体脂肪细胞的增殖及分化,而沉默miR-484与过表达作用相反。生物信息学预测发现MAPK8是miR-484的下游靶基因,且miR-484可抑制其mRNA及蛋白表达,同时过表达MAPK8可部分挽救miR-484对人前体脂肪细胞增殖分化的抑制。结论:miR-484可以通过抑制MAPK8的表达从而抑制人前体脂肪细胞的增殖与成脂分化。

脂源性细胞因子对人脂肪细胞miR-506表达的调控影响

目的探讨脂源性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)对成熟人脂肪细胞miR-506表达的调控影响。方法采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应方法检测人脂肪前体及成熟脂肪细胞中miR-506的表达水平。并以10、30 ng/mL的TNF-α、IL-6干预成熟脂肪细胞0、4、8、24 h,检测各时间点miR-506的表达水平。结果成熟脂肪细胞中miR-506表达量高于前体脂肪细胞,差异有高度统计学意义(P<0.01)。10 ng/mL的TNF-α、IL-6干预成熟人脂肪细胞4、8、24 h miR-506表达量与干预0 h比较,差异无统计学意义(P>0.05)。30 ng/mL的TNF-α、IL-6干预成熟人脂肪细胞24 h miR-506表达量高于干预0 h,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-506的表达受脂源性细胞因子的调控,为miR-506与肥胖相关胰岛素抵抗和炎症反应相关性的研究提供理论依据。

学龄前期头胎儿童同胞关系影响因素分析

目的研究学龄前期头胎儿童同胞关系的影响因素,为促进儿童同胞关系的积极发展提供理论指导。方法采用分层整群随机抽样的方法,于2019年3至7月在南京、无锡、镇江、扬州、南通、宿迁、连云港7个市中选择符合条件的4~6岁城市学龄前期头胎儿童,应用"3~6岁城市儿童家庭养育环境量表"及自拟的儿童同胞关系问卷、家庭社会人口学问卷进行调查,应用单因素方差分析和多因素线性回归研究影响同胞关系的因素。结果共发放问卷900份,回收有效问卷862份(95.78%),其中男童382人(44.3%),女童480人(55.7%),女童的同胞亲密维度得分高于男童(F=7.752,P<0.05),同胞冲突维度和同胞竞争维度得分无性别差异(均P>0.05);同胞年龄差为1~3岁组的儿童在同胞亲密维度得分高于年龄差为4~6岁组儿童,在同胞冲突、同胞竞争维度得分低于年龄差为4~6岁组儿童(F值分别为5.765、81.097和27.231,均P<0.05);良好的家庭养育环境在同胞亲密、冲突、竞争维度上的得分均高于中等环境和不良环境(F值分别为67.977、26.943和7.959,均P<0.05)。多因素线性回归结果显示,同胞年龄差、家庭养育环境、父母受教育程度、父母教养方式、父亲陪伴时间显著影响儿童的同胞关系(均P<0.05)。结论学龄前期头胎儿童同胞关系受个体性别、同胞年龄差和家庭环境等众多因素的影响,应进行早期的干预以促进儿童同胞关系及其心理行为的健康发展。

miR-93对睾丸畸胎瘤细胞增殖、心肌分化的影响及其与NFATC3的调控关系

目的观察miR-93对常用于心脏发育研究的睾丸畸胎瘤细胞P19增殖与心肌分化的影响,并分析其与活化T细胞核转录因子3(NFATC3)在此过程中的调控关系。方法将P19细胞分为三组,miR-93组、NC组分别转染miR-93 mimic及阴性对照空白质粒,对照组不转染;采用CCK-8法观察转染0、24、48 h后miR-93对P19细胞增殖的影响,Western blotting法检测miR-93对心肌分化标志基因心肌肌钙蛋白T(cTnT)与锌指转录因子CATA结合蛋白4(GATA4)的影响。通过TargetScanhuman7.2数据库筛选发现NFATC3为miR-93的下游靶基因,通过双荧光素酶基因报告验证两者的结合情况;采用Western blotting法检测miR-93对P19细胞中NFATC3表达的影响。再将P19细胞另分为三组,miR-93组、miR-93+NFATC3组及NC组分别转染miR-93 mimic、miR-93 mimic+NFATC3 mimic及阴性对照空白质粒,采用CCK-8法、Western blotting法观察NFATC3对miR-93过表达所致细胞增殖及心肌分化的影响。结果miR-93组除0 h外同时点细胞OD值及cTnT、GATA4蛋白表达均低于NC组及对照组(P均<0.05),NC组与对照组各指标比较差异无统计学意义。转染NFATC3 wt+NC质粒的P19细胞荧光素酶相对活性与转染NFATC3 wt+miR-93 mimic质粒的细胞比较有明显差异(P<0.01);转染NFATC3 mut+NC质粒的P19细胞荧光素酶相对活性与转染NFATC3 mut+miR-93 mimic质粒的细胞比较无统计学差异。miR-93组NFATC3蛋白表达低于对照组及NC组(P均<0.05),除0 h外同时点细胞OD值及cTnT、GATA4蛋白表达NC组>miR-93+NFATC3组>miR-93组(P均<0.05)。结论miR-93可抑制P19细胞增殖及心肌分化,该作用可能通过沉默NFATC3表达来实现,或可为先天性心脏病提供潜在的治疗靶点。