转化生长因子-β3 对牙髓干细胞成骨早期蛋白的影响

目的 研究转化生长因子-β3(TGF-β3)对体外培养的兔牙髓干细胞(DPSCs)成骨向分化的影响。方法 采用酶消化法分别将兔牙髓与颅骨分离培养获得DPSCs与成骨细胞(OB),通过光镜观察细胞形态,免疫组化染色和茜素红染色对OB进行鉴定。取第3代DPSCs与OB,分为3组:DPSCs组(空白对照组)、OB组(阳性对照组)及DPSCs+TGF-β3组(实验组)。培养第5天采用免疫组化染色检测各组细胞内Runt相关转录因子2(Runx-2)的表达;培养第7天采用碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测各组细胞内ALP的活性;培养第1、3、5、7天采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组成骨特异性标志物Runx-2及TGF-β3蛋白的表达。结果 兔DPSCs多呈长梭形,突触多,OB多呈短梭形或成纤维样细胞形态,突触少而丰满;DPSCs与OB鉴定阳性。培养第5天,OB组与DPSCs+TGF-β3组细胞中的Runx-2蛋白表达均呈强阳性;培养第7天,两组细胞内的ALP活性差异无统计学意义(P>0.05)。Western Blot结果显示,培养各时间点DPSCs组与另外两组比较Runx-2和TGF-β3蛋白相对表达量差异均具有统计学意义(均P<0.05);培养第7天,DPSCs+TGF-β3组Runx-2和TGF-β3蛋白相对表达量均高于另外两组,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。结论 TGF-β3可促进DPSCs成骨早期特异性蛋白的表达。

转化生长因子-β诱导牙髓干细胞成骨向分化的研究进展

近年来骨组织工程技术修复骨缺损成为临床研究的热点。牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞,不同诱导条件下可发育为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种类型的细胞,是骨组织工程技术的优选种子细胞。采用不同的诱导方法加快DPSCs成骨向分化,可缩短骨缺损的修复时间。转化生长因子-β是通过细胞间信号转导调节细胞活动的一类多肽因子,可促进或抑制细胞分裂、增殖、迁移和基因表达,在促进DPSCs成骨向分化方面具有重要作用。本文就转化生长因子-β诱导DPSCs成骨向分化的研究进展作一综述。

转化生长因子-β3对牙髓干细胞成骨向分化的作用

目的:探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)诱导体外培养的兔牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的情况。方法:采用酶消化法分离并培养兔DPSCs,光镜下进行形态学观察;并将体外培养的第4代DPSCs分为空白对照组,矿化液阳性对照组与TGF-β3实验组。1、3、5、7 d后采用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测各组细胞内ALP活性变化情况;1、3、5、7 d后行细胞免疫化学法检测成骨细胞标记物相关转录因子2(RUNX-2)和骨涎蛋白(BSP)的表达情况;14 d后观察各组细胞的矿化结节情况;7 d后使用Western blot检测各组细胞成骨分化指标BSP变化情况。结果:兔DPSCs在诱导体系中生长状态良好;实验组较两对照组上调细胞内ALP活性明显;免疫化学检测TGF-β3组与矿化液组RUNX-2第5 d呈阳性表达,BSP第7d阳性表达,空白对照组均呈弱阳性;14 d茜素红染色显示TGF-β3组矿化结节较矿化组明显,空白对照组阴性;与对照组相比,TGF-β3可增强兔DPSCs内BSP相关蛋白表达。结论:TGF-β3能够一定程度上促进兔DPSCs成骨向分化。

转化生长因子β3联合牙髓干细胞在种植体周围早期骨结合中的作用

目的建立兔下颌骨前牙区种植修复动物实验模型，探讨转化生长因子（transforming growth factor，TGF）-β3联合体外培养的兔牙髓干细胞（dental pulp stem cells，DPSC）在兔种植体周围骨结合中的作用。 方法将实验新西兰兔按随机数字表随机分为实验组、对照组和空白组，每组6只，在实验组的种植体与骨间隙内充填TGF-β3、DPSC、人工骨粉的混合物，在对照组的种植体与骨间隙内充填DPSC、人工骨粉的混合物，在空白组的种植体与骨间隙内充填磷酸盐缓冲液和人工骨粉的混合物。术后2周处死各组动物，观察游离下颌骨并对种植体周围骨组织进行HE染色和免疫组化染色，实时荧光定量PCR检测成骨相关基因的表达水平。 结果种植体植入后均无脱落、松动。HE染色结果显示空白组可见种植体周围骨小梁稀疏，未见明显新骨形成，少量血管；对照组可见种植体周围骨小梁较稀疏、纤细，成骨细胞呈线状排列在骨小梁周围，少量新骨形成；实验组可见种植体周围骨小梁较多，其粗大且致密，成骨细胞呈密集成团排列、功能活跃被基质包裹，新骨形成较多，可观察到典型的骨陷窝、骨细胞并伴有大量新生血管。免疫组织化学结果显示实验组、对照组、空白组骨涎蛋白的平均阳性面积所占比例分别为（24.6±5.3）%、（11.3±2.8）%及（7.6±3.8）%。实验组骨涎蛋白呈强阳性表达，明显高于其他两组（P=0.000，P=0.000）。实时荧光定量PCR结果显示实验组RUNX相关转录因子2、Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶基因的表达水平均高于空白组和对照组，且差异均有统计学意义（P=0.023）。 结论TGF-β3具有促进DPSC向成骨细胞转化的潜能，能增加成骨细胞的数量并促进种植体周围骨结合，为解决临床种植骨愈合时间过长等问题提供新思路。