胆管癌细胞外泌体对自然杀伤细胞功能影响

目的探究胆管癌细胞来源的外泌体(RBE-Exos)对自然杀伤(NK)细胞功能的影响及其内在机制。方法采用免疫组化染色对比分析NK细胞在胆管癌组织和癌旁组织中的浸润数量;通过超速离心法从胆管癌细胞中分离出外泌体,透射电镜(TEM)观察RBE-Exos的形态特征,蛋白质印迹实验鉴定RBE-Exos的蛋白标志物;纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测RBE-Exos粒径分布。NK-92细胞与RBE-Exos共培养后,荧光染色示踪RBE-Exos进入细胞;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测黏附分子的表达水平。LDH法检测NK-92细胞的杀伤功能变化。结果免疫组化染色显示,与癌旁组织相比,表达CD56(t=2.977,P=0.008)和NKp46(t=4.530,P<0.001)特异性标志分子的NK细胞在癌组织中的浸润数量减少。RBE-Exos电镜下呈酒窝或杯状,特异性表达CD63和HSP70。NTA结果显示RBE-Exos平均直径为(102.90±7.00)nm。荧光染色显示,培养24 h后RBE-Exos进入NK-92细胞。RBE-Exos处理后,NK-92细胞失去了正常的聚团现象而呈现分散的状态。qRT-PCR结果显示,RBE-Exos处理组黏附分子CD11a(t=4.999,P=0.038)、CD18(t=9.225,P=0.012)和CD54(t=12.050,P=0.007)在转录水平上的表达较PBS组均降低。蛋白质印迹实验结果表明,RBE-Exos处理组较PBS组黏附分子CD11a(t=5.140,P=0.007)、CD18(t=7.177,P=0.002)和CD54(t=8.713,P<0.001)蛋白表达均减少。LDH检测显示,RBE-Exos减弱NK-92细胞对靶细胞的杀伤功能(20∶1,t=3.975,P=0.017;10∶1,t=5.776,P=0.005)。结论胆管癌可能通过释放外泌体抑制NK细胞黏附分子表达从而抑制其在肿瘤部位的浸润。

华支睾吸虫CsLegumain促胆管癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨华支睾吸虫CsLegumain在胆管癌细胞的增殖、侵袭和转移中的作用及其分子机制。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CsLegumain并转染胆管癌细胞,建立CsLegumain过表达细胞株。通过CCK8试验、细胞划痕试验、Matrigel Transwell试验分析CsLegumain在胆管癌细胞的增殖、侵袭和转移中的作用。通过实时荧光定量PCR及Western blot分别检测CsLegumain影响的靶分子转录水平和蛋白表达水平。结果成功构建CsLegumain稳定表达细胞株。CCK8试验显示,CsLeguamin对RBE细胞的增殖无显著影响(均P>0.05)。划痕实验中,过表达CsLegumain的RBE细胞其运动能力与对照组细胞相比显著增强,细胞间的距离明显变窄(均P<0.05)。Transwell试验显示,过表达CsLegumain的RBE细胞穿过基质小室的数量较对照组细胞数量多(P<0.05)。过表达CsLegumain组RBE细胞中E-cadherin和N-cadherin的转录水平及其蛋白表达水平均较对照组细胞显著降低(均P<0.05)。结论CsLeguamin对胆管癌细胞的增殖无显著影响,但具有促进胆管癌细胞迁移和侵袭能力,可能的机制是通过调控E-cadherin和N-cadherin的表达诱导EMT促进胆管癌细胞的迁移和侵袭。

寄生虫源性外泌体的研究进展

外泌体(exosome)是由不同种类的细胞释放的一种具有脂质双分子层结构的囊泡样小体,含有多种RNA、蛋白质和脂质,参与细胞的信号转导,调控细胞的生长、增殖、分化和凋亡等,在长距离细胞间通讯发挥重要作用。近年来,多种寄生虫源性外泌体不断被发现,并可调节宿主的免疫应答以逃避免疫监视或促进疾病的进展。本文综述了不同寄生虫来源的外泌体的组分、生物学作用及其对宿主免疫反应的调节,为寄生虫与宿主的相互作用研究增加新的认识,为寄生虫病的防治提供参考。