HPV DNA纸基快速提取方法的建立与初步评价

目的建立一种简便快速的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)DNA纸基提取方法并对其进行初步评价。方法以含HPV 16型基因片段的质粒为对象,结合紫外分光光度法和实时荧光定量PCR检测,对6种不同的纸材料进行选择,最终设计成方便拿取的浸蜡试纸条,对18例临床宫颈脱落细胞样本(阳性样本13例,阴性样本5例)进行HPV DNA提取检测,与常规煮沸法进行比较。结果1张核酸结合区面积为2 mm×10 mm的浸蜡定性滤纸条所提取的临床宫颈脱落细胞样本中的HPV DNA,经实时荧光定量PCR扩增,18例临床宫颈脱落细胞样本中的13例高危型HPV阳性样本均能成功检出,与常规煮沸法结果一致。每个样本提取时间<1 min,检出限为8×10^(2) copies/mL,相对标准偏差为1.15%。结论建立的HPV DNA纸基快速提取方法无需移液、加热和离心等操作,洗脱液可直接作为PCR扩增反应的模板,极大简化了临床宫颈脱落细胞样本中HPV DNA的提取步骤。

传染病病原体生物传感即时检测技术与设备综述

回顾了基于光学、电化学、磁学的生物传感技术与设备在传染病病原体即时检测(point-of-care testing,POCT)中的研究进展,总结了3种检测方法在POCT应用中的优劣。分析了生物传感POCT技术与设备在传染病病原体检测中面临的问题,指出了传染病病原体生物传感POCT技术与设备未来应向低成本、高通量、高准确性、高灵敏度及便携性等方面发展。

基于试纸条核酸提取和重组聚合酶扩增技术的HPV 16型DNA纸基电化学发光快速检测方法

目的建立一种人乳头瘤病毒(HPV)高危16亚型快速、灵敏、特异的检测方法。方法采用前期构建的试纸条法提取样本HPV DNA,并以其为模板,使用电化学发光试剂(酯化钌)标记上游引物,生物素标记下游引物,进行重组聚合酶恒温扩增,通过亲和素化的磁微球将生物素标记的扩增产物,在磁场的作用下富集,通过纸基电极-电化学发光检测技术,获得有酯化钌标记的待测物的浓度信息。结果酯化钌与上游引物以20∶1的摩尔比可以获得更高的标记效率和发光强度,该法最低检出限为50copies/mL,比实时荧光PCR的灵敏度高16倍;批内检测相对标准偏差低于5%,单个样本从核酸提取到获得扩增结果所需时间小于1h,具有较好的特异性、灵敏度和重复性。结论该法检测快速、灵敏、特异、操作简单,具有一定的临床应用价值。