新疆阿克苏地区部分养殖场户绵羊体表硬蜱种类鉴定及携带病原检测

为了解新疆阿克苏地区绵羊体表硬蜱种类及携带病原情况,从5个养殖场户的168只绵羊体表采集硬蜱,采用形态学及分子生物学方法进行蜱种鉴定,同时应用PCR方法对硬蜱中携带的泰勒虫、巴贝斯虫、无浆体及立克次体等进行检测并构建遗传进化树。结果显示:共采集硬蜱630只,其中504只为图兰扇头蜱,126只为小亚璃眼蜱,2种硬蜱与GenBank上已发表的哈萨克斯坦序列MN853166、MN853167相似性分别高达98.30%、99.00%;硬蜱的立克次体、泰勒虫、无浆体及巴贝斯虫携带率分别为64.29%(405/630)、29.52%(186/630)、25.71%(162/630)、0(0/630);遗传进化树显示,泰勒虫与伊拉克株(MN712508)同源性最高(99.61%),位于同一分支上,立克次体与我国民丰县虫株(KU645284)同源性达100%,无浆体与西班牙株(HQ014384)同源性最高(99.62%),位于同一分支上。结果说明:图兰扇头蜱为新疆阿克苏地区绵羊体表优势蜱种,存在携带传播立克次体、泰勒虫及无浆体的风险,建议加强硬蜱驱虫及蜱传疫病监测。

腹膜透析技术在犬猫肾功能衰竭中的应用

腹膜透析是利用腹膜半透膜的性质对机体内存在的有毒有害物质或机体内过多的代谢产物进行清除。本文主要就腹膜透析原理、腹膜透析方法、适应症和禁忌症、操作技术、透析液、透析导管进行综述,旨在为实际临床治疗犬猫肾功能衰竭提供理论支撑。

驽巴贝虫metacaspase基因的克隆、表达、反应原性鉴定和生物信息分析

目的 克隆、表达驽巴贝虫精氨酸/赖氨酸特异性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(BcMC),鉴定其反应原性并分析其生物学信息。方法 根据驽巴贝虫部分基因序列设计并合成Bcmc基因扩增引物,采用PCR扩增Bcmc基因并克隆至原核表达载体pET-28a,提取质粒pET-28a-Bcmc进行双酶切、PCR和测序鉴定,将重组质粒转入感受态细胞大肠埃希菌BL21 (DE3),优化诱导条件后,选择最适异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、诱导温度和时间诱导,采用12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。用His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白后,以驽巴贝虫感染阳性马血清为一抗,Western blotting分析重组蛋白的反应原性。采用ProtParam等生物信息学在线软件预测Bcmc基因的理化性质、磷酸化位点、亚细胞定位、抗原表位、二级和三级结构、蛋白互作网络,对比BcMC与疟原虫属MC-1 (PsMC-1)和泰氏锥虫MC (TtMC)的三级结构。Bcmc序列在NCBI上进行BLAST比对,使用Mega 7.0软件,采用邻接法构建基于mc基因序列的系统进化树。结果Bcmc基因PCR扩增产物约为996 bp,与预期片段一致。重组质粒pET-28a-Bcmc经双酶切、PCR和测序鉴定表明插入的目的基因正确。诱导条件优化结果显示,BcMC重组蛋白在IPTG终浓度为0.8 mmol/L、37℃培养5 h时的表达量最高。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体的形式表达,相对分子质量(Mr)约为36 000。Western blotting结果表明,纯化后的BcMC可与驽巴贝虫感染阳性马血清发生特异性反应。生物信息学分析结果显示,BcMC的Mr为36 956.72;具有25个磷酸化点位;亚细胞定位预测位于线粒体的比例为10%;B细胞抗原表位分析发现该蛋白含有12个潜在抗原表位;BcMC蛋白的二级结构中,无规则卷曲占50.30%、α-螺旋占23.19%;BcMC的三级结构与PsMC-1和TtMC相似;蛋白互作网络预测结果显示,与BcMC相互作用的蛋白及BcMC参与的生物过程均与细胞凋亡有关。BLAST比对结果和系统进化树分析结果显示,Bcmc与马泰勒虫(CP099439)、马泰勒虫WA株(XM_004830992)的mc基因序列一致性均为99.90%,进化树上聚为一支,亲源关系较近。结论 BcMC原核表达蛋白具有良好的反应原性,生物信息学分析表明BcMC参与驽巴贝虫凋亡的生物过程。