电离辐射对RAD54L、SMC1B、INIP和HIST1H4K基因甲基化水平的影响

目的检测分析电离辐射前后人外周血淋巴细胞RAD54L、SMC1B、INIP和HIST1H4K基因启动子区域甲基化变化,为筛选辐射敏感基因甲基化标志物提供理论依据。方法3名健康男性为研究对象。1.0 Gy X线照射人外周血全血,剂量率为0.5 Gy/min,照射2min,未照射样本为阴性对照组。通过焦磷酸测序法对RAD54L、SMC1B、INIP和HIST1H4K 4个基因启动子区域13个富含CpG位点的片段进行DNA甲基化检测,采用配对样本t检验进行统计分析。结果照射后,RAD54L-1&3(11.360%±0.726%vs 10.636%±0.859%,P<0.05)和INIP-8(6.443%±1.308%vs 4.478%±1.005%,P<0.05)甲基化水平升高、SMC1B-7(12.164%±1.226%vs 13.895%±1.381%,P<0.05),HIST1H4K-11(33.863%±3.957%vs 39.868%±4.703%,P<0.01)以及HIST1H4K-11&13(12.259%±1.389%vs 14.104%±1.520%,P<0.01)甲基化水平降低。此外,照射组与对照组相比,上述片段中,分别有6(6/14,43%)、3(3/3,100%)、14(14/16,88%)、2(2/3,67%)、9(9/11,82%)个位点甲基化水平变化与各自所在片段甲基化水平变化趋势一致。结论本研究通过检测1Gy照射后与DNA修复和维持基因组稳定性相关基因启动子区甲基化改变,初步发现RAD54L-1&3、SMC1B-7、INIP-8、HIST1H4K-11和HIST1H4K-11&13及其相关位点甲基化水平的变化与辐射密切相关,可进一步研究将这些基因片段与位点作为潜在的辐射损伤标志物的可行性。

DNA修复相关基因SNP与辐射致离体血微核率的相关性研究

目的分析DNA修复相关基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与辐射致离体血微核率(micronucleus frequency,MNF)的关系,为寻找辐射易感性标志物提供理论依据。方法采集75例研究对象的外周血并分为乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)抗凝血样本和肝素抗凝血样本。提取EDTA抗凝血样本的DNA,设计8种基因11个SNP的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)引物和单碱基延伸引物,通过PCR扩增、延伸,应用DP-TOF型飞行时间质谱检测系统对SNP位点进行基因分型。将肝素抗凝血样本分为两份,一份行1.0Gy X线照射为辐照组,另一份未行照射为对照组,采用胞质分裂阻断微核实验对两组外周血淋巴细胞进行MNF测定。结果75份样本11个SNP位点均分型成功,检出率100.0%。辐照后,外周血淋巴细胞MNF升高(1.919‰±0.642‰vs.0.177‰±0.107‰,t=22.925,P<0.001)。X线交叉互补修复基因1(X-ray repair cross complementing 1,XRCC1)rs25487与辐照组MNF相关(P<0.01),且TC基因型个体MNF高于CC基因型(2.270‰±0.597‰vs.1.695‰±0.588‰,P<0.01);XRCC1rs1799782与辐照组MNF相关(P<0.05)且AA基因型个体MNF高于GG基因型(1.943‰±1.078‰vs.1.790‰±0.461‰,P<0.05)。X线交叉互补修复基因3(X-ray repair cross complementing 3,XRCC3)rs1799794与辐照组MNF相关(P<0.01)且TT和CC基因型个体MNF均高于TC基因型(2.123‰±0.707‰vs.1.680‰±0.411‰,P<0.01;1.979‰±0.763‰vs.1.680‰±0.411‰,P<0.05)。8-羟基鸟嘌呤糖苷酶(8-oxoguanine DNA glycosylase,hOGG1)基因rs1052133与辐照组MNF相关(P<0.05),且CC基因型个体MNF高于CG基因型(2.260‰±0.435‰vs.1.824‰±0.544‰,P<0.05),其余基因SNP位点与辐照组MNF的相关性无统计学意义(P>0.05)。结论辐射可导致MNF升高,rs25487,rs1799782,rs1799794和rs1052133的基因型与辐射致MNF有关联,可作为潜在的辐射敏感标志物。